茉莉花葉多酚的抗氧化作用研究

商淵婷，周志鵬，李 原，甘家惠，黃鎖義，黃上峰

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床學(xué)院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000；3.右江流域特色民族藥研究廣西高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 百色 533000)

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茉莉花葉多酚的抗氧化作用研究

商淵婷1，周志鵬1，李 原1，甘家惠1，黃鎖義2，3*，黃上峰2，3

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床學(xué)院，廣西 百色 533000；2.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000；3.右江流域特色民族藥研究廣西高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 百色 533000)

目的：測(cè)定茉莉花葉乙酸乙酯提取物中多酚的含量及其體外抗氧化能力，為充分利用茉莉花資源提供理論依據(jù)。方法：用乙酸乙酯作溶劑，在75 ℃水浴中超聲提取茉莉花葉多酚30 min，通過(guò)紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定了茉莉花葉中多酚的含量及其提取物的清除自由基能力。結(jié)果：茉莉花葉乙酸乙酯提取物中含有較高多酚含量，其提取物有較強(qiáng)的清除自由基能力，當(dāng)提取物稀釋10倍時(shí)，其抗氧化能力表現(xiàn)為：鄰苯三酚法(89.2%)>Fenton法(77.0%)。茉莉花葉乙酸乙酯提取物的抗氧化能力隨提取物濃度的增大而增加，二者呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。結(jié)論：茉莉花葉多酚具有較強(qiáng)的抗氧化活性。

茉莉花葉；多酚；抗氧化性

茉莉花，又稱(chēng)為茉莉，為木樨科素馨屬(Jasminum)常綠灌木或藤本植物的統(tǒng)稱(chēng)。茉莉花在我國(guó)主要分布在廣西、福建、江蘇蘇州,廣西橫縣是我國(guó)茉莉花的主產(chǎn)地區(qū),有“中國(guó)茉莉花都”之稱(chēng)。[1]茉莉花因其花朵潔白馨香，且花期較長(zhǎng)，適合盆栽觀賞或作插花之用，極具觀賞價(jià)值。茉莉花不僅可供觀賞，且有一定的藥用價(jià)值。“人間第一香,茉莉止痛強(qiáng)”，止痛是它最為突出的一個(gè)功效?！侗静菥V目》記載，傷損之疾，用茉莉根“以酒磨一寸服，則昏迷一日乃醒……凡跌損骨節(jié)脫臼，接骨者用此，則不知痛也。”說(shuō)明茉莉根有通脈止痛作用。傳統(tǒng)中醫(yī)藥中,茉莉的花根葉均可入藥,具有理氣、開(kāi)郁、辟穢、和中、治下痢腹痛、結(jié)膜炎、瘡毒等功效[2]。茉莉花根具有治療筋骨跌傷、關(guān)節(jié)炎 眼炎、腹痛、虛弱等癥狀。臨床上，茉莉葉的水提液用于清洗眼睛，可治療眼疾，東印度人還嚼茉莉葉來(lái)治療口腔潰瘍，把葉的汁涂在毒蛇咬的傷口上可治療毒蛇咬傷；茉莉花可用于治療痢疾、皮炎和腫瘤，痛茉莉花用菜油浸泡，滴人耳內(nèi)可治耳心[3]。目前，中國(guó)茉莉花種植面積約為0.8萬(wàn) hm2，年產(chǎn)鮮花約9萬(wàn) t[4]。

本實(shí)驗(yàn)分別用Fenton法、DPPH法和鄰苯三酚法對(duì)茉莉花葉乙酸乙酯提取物清除自由基能力進(jìn)行了對(duì)比研究，旨在為保健醫(yī)學(xué)和食品營(yíng)養(yǎng)學(xué)等方面提供實(shí)驗(yàn)參考，同時(shí)為開(kāi)發(fā)和利用茉莉花的藥用價(jià)值提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

1.1.1 儀器

UV-1800紫外分光光度計(jì)(日本島津)、FA1004天子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)、KQ5200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、馬頭牌JYT-5架盤(pán)藥物天平(上海醫(yī)用激光儀器廠)、SHZ-D(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵(鞏儀市子華儀器有限責(zé)任公司)、722可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海菁華科技儀器有限公司)。

1.1.2 試劑與藥材

乙酸乙酯、水楊酸、鹽酸、30%過(guò)氧化氫、硫酸亞鐵、酒石酸、Tris(三羥甲基氨基甲烷)、鄰苯三酚、DPPH等，所用試劑均為分析純?cè)噭?，茉莉花葉采購(gòu)自百色藥店。

1.2 茉莉花葉乙酸乙酯提取液的制備

精確稱(chēng)取6g茉莉花葉粉末，加入乙酸乙酯，在75 ℃下水浴超聲30 min，抽濾，然后將濾液轉(zhuǎn)移至100 mL的容量瓶中，用乙酸乙酯定容到100 mL備用。再取上述溶液1 mL于10 mL的比色管中，加入一定體積的乙酸乙酯定容至刻度，然后測(cè)其吸光度。

1.3 酒石酸亞鐵法測(cè)定多酚以及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

取11支25mL的試管，標(biāo)記序號(hào)，分別加入1 mg/mL的沒(méi)食子酸溶液0.00、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50、1.75、2.00、2.25、2.50 mL，再往每支試管中加入水4mL和剛配置好的酒石酸亞鐵溶液5.0 mL，用緩沖液定容至25mL刻度，搖勻，靜置1h后，在最大吸收波長(zhǎng)為549 nm處以空白對(duì)照作參比，測(cè)其吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，沒(méi)食子酸濃度C(μg/mL)為橫坐標(biāo)繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并求出其回歸方程為A=0.015 5C-0.071 2(R2=0.9982)。

1.4 樣品中活性物質(zhì)多酚含量的測(cè)定

分別移取一定體積稀釋一定倍數(shù)的提取液，用上述方法測(cè)其吸光度，代入回歸方程，求出濃度，按下列公式計(jì)算：

含量(μg/g)=濃度(μg/mL)×稀釋倍數(shù)×提取液體積(mL)/(原料干重×106)×100%

盡量取多次提取液稀釋后測(cè)其吸光度，求其平均含量。

1.5 抗氧化能力測(cè)定

表1為酒石酸亞鐵法測(cè)定多酚以及標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制結(jié)果，圖1、圖2、圖3分別為不同稀釋倍數(shù)茉莉花葉提取液對(duì)羥基自由基清除率、超氧自由基清除率、Fe3+還原能力的測(cè)定結(jié)果。

表1 722可見(jiàn)光分光光度計(jì)測(cè)多酚溶液吸光度

測(cè)得茉莉花葉中多酚的含量為7.05 μg/g。

1.5.1 Fenton法

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Fenton法測(cè)定茉莉花葉乙酸乙酯提取液的抗氧化能力,利用H2O2與Fe2+反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基(·OH)，基本反應(yīng)如下：

H2O2+Fe2+→·OH+OH-+Fe3+

羥基自由基清除率的測(cè)定：取4支試管，往每支試管加入9 mmol/L FeSO41mL、9 mmol/L水楊酸-乙酸乙酯溶液2.0 mL，在其中3支試管中分別加入0.5、1.0、2.0mL的提取液，另一試管中2.0 mL蒸餾水作空白對(duì)照。最后往4支試管中加入8.89mmol/L H2O22mL開(kāi)始反應(yīng)，用乙酸乙酯定容至10 mL，靜置1h。以蒸餾水作參比，于510 nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度，其計(jì)算其清除率：

式中：A0為空白對(duì)照液的吸光度；AS為加入提取液后的吸光度。

由圖1可以看出，不同濃度的茉莉花葉提取液對(duì)H2O2/Fe2+通過(guò)Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的·OH具有清除作用，并且在一定范圍內(nèi)，隨提取液濃度的增加，·OH清除率有明顯的上升趨勢(shì)，說(shuō)明茉莉花葉提取液對(duì)·OH的清除效果明顯。

圖1 不同稀釋倍數(shù)茉莉花葉提取液羥自由基清除率

1.5.2 鄰苯三酚法

超氧陰離子自由基清除率的測(cè)定：在4支試管中，分別加入2 mL新配置的pH值為8.43的緩沖溶液，在其中3支中分別加入0.5、1.0、2.0 mL的提取液，再往4支試管中分別加入1mL 0.2×10-3mol/L鄰苯三酚溶液，用水定容至10 mL，在吸收波長(zhǎng)為322 nm處每隔30 s記錄一次吸光值，測(cè)量時(shí)間為4 min，每支試管測(cè)得8個(gè)吸光值，其清除率計(jì)算公式為：

圖2 不同稀釋倍數(shù)茉莉花葉提取液對(duì)超氧自由基清除率

1.5.3 普魯士蘭法

分別取不同濃度樣品溶液2．5 mL，0．2 mol/L的磷酸緩沖液(PBS，pH值6．6)2．5 mL和1%六氰合鐵酸鉀溶液2．5 mL于具塞試管中，50 ℃水浴保溫20 rain，快速冷卻，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的三氯乙酸溶液2．5 mL，混合后以轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心10 min。取反應(yīng)液2．5 mL，依次加入蒸餾水2．5 mL，0．1%三氯化鐵溶液0．5 mL，充分混勻，靜置10 min后，在波長(zhǎng)700 nm下測(cè)定其吸光度，平行測(cè)定3次，吸光度越大表示還原力越強(qiáng)。

圖3 不同稀釋倍數(shù)茉莉花葉提取液對(duì)Fe3+還原能力

由圖3可知，不同濃度的茉莉花葉提取液對(duì)Fe3+均具有還原能力，并且在一定的濃度范圍內(nèi)，隨提取液濃度的增加，F(xiàn)e3+的還原能力在增強(qiáng)，說(shuō)明茉莉花葉提取液對(duì)Fe3+的還原能力效果較明顯。

2 結(jié) 論

衰老是由自由基對(duì)細(xì)胞成分的有害進(jìn)攻造成的[6]。因此，清除多余自由基的措施有益于某些疾病的預(yù)防和治療，而自由基清除劑的研究對(duì)人體健康的意義便顯得更為重大。本實(shí)驗(yàn)以茉莉花葉作為原料，研究了其乙酸乙酯提取液抗氧化自由基作用，為開(kāi)發(fā)和利用茉莉花的藥用價(jià)值提供了理論依據(jù)。

[1] 黃芳芳,徐桂花,陳全斌.茉莉花研究文獻(xiàn)計(jì)量分析[J].大眾科技,2007(7):138-139.

[2] 欒海蓉,尹姣姣,莫韋皓，等. 茉莉花水提物對(duì)大鼠胸主動(dòng)脈的舒張作用及機(jī)制[J].中國(guó)藥學(xué)雜志，2010,45(3)：182-186.

[3] 黃桂麗.茉莉的化學(xué)成分與藥理作用的研究進(jìn)展[J]．中外醫(yī)療，2010，29(33):113-114.

[4] 楊申勇．淺談我國(guó)茉莉花茶的歷史現(xiàn)狀及發(fā)展措施[J]．茶葉通訊，2011，38(4)：32-34.

[5] 張昊，任發(fā)政.羥基和超氧自由基的檢測(cè)研究進(jìn)展[J].光譜學(xué)與光譜分析，2009,29(4)：1093-1099.

[6] 趙保路.自由基、營(yíng)養(yǎng)、天然抗氧化劑與衰老[J].生物物理學(xué)報(bào)，2010，26(1):26-36.

Anti-oxidation Effect of Polyphenols from Jasmine Leaf

Shang Yuanting1, Zhou Zhipeng1, Li Yuan1, Gan Jiahui1, Huang Suoyi2,3*, Huang Shangfeng2,3

(1. School of Clinical Medicine，Youjiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,China； 2. School of Pharmacy，Youjiang Medical University for Nationalities，Baise 533000,China；3. The Characteristics of Folk Medicine in Youjiang River in Guangxi Key Laboratory of Colleges and Universities, Baise 533000,China)

Objective：polyphenol content of ethyl acetate extract of Jasmine leaf and antioxidant capacity in vitro were determined, to provide a theoretical basis for the full use of the resources of jasmine. Method：Using ethyl acetate as the solvent in a water bath at 75 ℃ ultrasonic extraction jasmine leaf polyphenols 30min, by UV - visible spectrophotometry the free radical scavenging ability of jasmine leaf polyphenol content and extract. Results：The ethyl acetate extract of Jasmine leaves contain high content of polyphenols, the extract has a strong free radical scavenging capacity. When the extract was diluted 10-fold, its antioxidant capacity were as follows: pyrogallol method (89.2%) > Fenton France (77.0%).The ethyl acetate extract antioxidant capacity of Jasmine leaves increases with increasing extract concentration, showing a certain dose-effect relationship. Conclusion: Jasmine leaf polyphenol has a strong antioxidant activity.

Jasmine leaves; polyphenols; antioxidant

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.05.008

2016-03-11

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81160347)；國(guó)家中醫(yī)藥管理局“十二五”中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科中藥化學(xué)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(國(guó)中醫(yī)藥人教發(fā)[2012]2號(hào))；廣西重點(diǎn)學(xué)科藥物化學(xué)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(桂教科研[2013]16號(hào))；廣西壯族自治區(qū)百色市科學(xué)研究與技術(shù)開(kāi)發(fā)計(jì)劃第一批項(xiàng)目(百科計(jì)1001013)。

商淵婷(1991—)，女，學(xué)士，主要研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)、食品衛(wèi)生。E-mail：476954662@qq.com

*通訊作者： 黃鎖義，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)、食品衛(wèi)生、中草藥與植物化學(xué)。 E-mail：huangsuoyi@163.com

R284.2

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1006-9690(2016)05-0032-03