丹紅注射液對(duì)自體脂肪顆粒移植存活率的影響

賈 垚， 王 鵬,2， 陳曦航,2， 武承興

(1山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院整形科，太原 030001； 2山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院； 3山西大醫(yī)院整形科；*通訊作者，E-mail: 591292983@qq.com)

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丹紅注射液對(duì)自體脂肪顆粒移植存活率的影響

賈 垚1， 王 鵬1,2， 陳曦航1,2， 武承興3*

(1山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院整形科，太原 030001；2山西醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院；3山西大醫(yī)院整形科；*通訊作者，E-mail: 591292983@qq.com)

目的 觀察中藥制劑丹紅注射液對(duì)自體脂肪顆粒移植成活率的影響。 方法 建立SD大鼠自體脂肪顆粒移植動(dòng)物模型，分為低劑量組，高劑量組和模型組。實(shí)驗(yàn)組分別持續(xù)肌肉注射不同劑量的丹紅注射液，模型組不做處理，術(shù)后不同時(shí)間檢測(cè)血液中VEGF含量。術(shù)后90 d采集脂肪移植體樣本，與術(shù)前記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比得到移植存活率；HE染色后鏡下觀察脂肪移植組織細(xì)胞形態(tài)和血管密度；血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子免疫組化法觀察新生血管生長情況及密度。 結(jié)果 自體脂肪顆粒移植術(shù)后90 d，實(shí)驗(yàn)組脂肪存活率均明顯高于模型組(P<0.05)。ELISA結(jié)果顯示，低劑量組和高劑量組SD大鼠血清VEGF表達(dá)各時(shí)段水平明均顯高于模型組(P<0.05)。HE染色顯示低劑量組和高劑量組在脂肪細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)、脂肪移植體纖維化程度優(yōu)于模型組，血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子免疫組織化學(xué)染色示新生毛細(xì)血管密度高于模型組。 結(jié)論 丹紅注射液能顯著提高SD大鼠自體脂肪顆粒移植的存活率。

自體脂肪移植； 丹紅注射液； 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子； 血管新生； 大鼠； 存活率

近年來，由于軟組織缺損而造成的先天性或后天性畸形的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，最重要的缺損是皮下脂肪組織的缺損[1]。目前治療方案中自體脂肪組織填充最為常用[2]。但自體脂肪注射進(jìn)行缺損修復(fù)時(shí)，注射顆粒脂肪存在著吸收率較高的問題，嚴(yán)重影響了自體脂肪移植的效果[3]。這個(gè)問題也得到了國內(nèi)外許多學(xué)者的關(guān)注和研究。這些研究主要集中于兩個(gè)方面，一方面是提高自體移植脂肪組織內(nèi)脂肪細(xì)胞的增殖能力，或者促進(jìn)前脂肪細(xì)胞及脂肪干細(xì)胞(adipose derived stem cells，ADSCs)向成熟的脂肪細(xì)胞分化；另一方面通過改善自體脂肪移植組織的受區(qū)環(huán)境，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)新生血管形成，盡快重建游離脂肪的血運(yùn)，增加自體移植脂肪組織的血液供應(yīng)來提高脂肪移植的存活率[4]。

能否找尋一種經(jīng)濟(jì)、方便、有效的方法，一方面延緩或抑制移植的脂肪細(xì)胞凋亡，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化，另一方面改善脂肪移植組織的性狀及供受區(qū)組織的環(huán)境，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)新生血管形成，從而提高移植脂肪顆粒存活率，以便在臨床上能夠得到更為廣泛的應(yīng)用呢？

近些年來，中藥對(duì)人體疾病的治療越來越受到了中外學(xué)者的重視，中藥的研究開展得越來越深入，許多中藥的藥理功效得到了較廣泛的認(rèn)同。研究發(fā)現(xiàn)丹紅對(duì)心血管系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、物質(zhì)代謝、肝腎功能及腫瘤治療等均可發(fā)揮良好的作用，丹紅能夠擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，改善心臟功能，可使減少的血細(xì)胞數(shù)恢復(fù)正常，可以增加機(jī)體抗缺氧能力，可以保護(hù)細(xì)胞，延長細(xì)胞壽命[5]。鑒于國內(nèi)外鮮有學(xué)者在中藥對(duì)自體脂肪移植存活率進(jìn)行基礎(chǔ)及臨床應(yīng)用研究，我們應(yīng)用肌肉注射中藥丹紅注射液到自體脂肪移植的SD大鼠中，探討中藥丹紅對(duì)自體脂肪移植術(shù)后脂肪移植存活率的影響并分析可能的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及主要試劑、儀器

SD大鼠(10周齡，雄鼠)，體重(265±5)g，購自山西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；丹紅注射液(國藥準(zhǔn)字:Z20026866)(Danhong Injection)，菏澤步長制藥有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品規(guī)格：10 ml/支。VEGF的ELISA試劑盒(美國R&D公司)；鼠多克隆Ⅷ因子抗體(Rat Polycloal to Factor Ⅷ，英國Biorbyt公司)；鼠兔通用免疫組化二抗(丹麥Dako公司)；免疫組化抗體稀釋液(丹麥Dako公司)；鹽酸氯胺酮注射液(2 ml ∶0.1 mg)，福建古田藥業(yè)有限公司；陸眠寧Ⅱ注射液(1.5 ml ∶30 mg)，吉林省華牧動(dòng)物保健品有限公司。圖像分析系統(tǒng)(IMAGE PROPLUS 6.0,美國)；CO2培養(yǎng)箱(THERMO FORMA3111,美國)；熒光光學(xué)顯微鏡(LEICA DM6000M,德國)；倒置相差顯微鏡(Nikon TS-100,日本)；酶標(biāo)儀(Bio-Tek Synergy HT,美國)。

1.2 大鼠分組與處理

模型組 12只單純行自體脂肪顆粒移植；低劑量組24只行自體脂肪顆粒移植+肌肉注射丹紅注射液4 ml/(kg·d)(持續(xù)用藥2周)；高劑量組24只行自體脂肪顆粒移植+肌肉注射丹紅注射液8 ml/(kg·d)(持續(xù)用藥2周)。術(shù)后90 d進(jìn)行脂肪移植體標(biāo)本取材，稱量后置入4%多聚甲醛溶液中固定。術(shù)后1周、2周、4周、6周、8周分別尾靜脈取血，每只取血1 ml，取血后置入離心管中以1 500 r/min離心5 min，留取上層血清，-80 ℃保存，ELISA試劑盒檢測(cè)VEGF濃度。

1.3 大鼠自體脂肪移植存活率檢測(cè)

以自體移植脂肪組織術(shù)后與術(shù)前質(zhì)量比計(jì)算存活率，完整取下脂肪移植體后分離修去周圍多余組織及包膜，精密天平準(zhǔn)確測(cè)量其質(zhì)量，與術(shù)前記錄數(shù)據(jù)進(jìn)行對(duì)比得到移植存活率。

1.4 大鼠的血清VEGF表達(dá)水平檢測(cè)

首先配置沖洗緩沖液，底物溶液，擴(kuò)增液，稀釋度標(biāo)準(zhǔn)品。移去96孔板中的多余板條，在剩余的96孔板中的每一孔中分別加入50 μl的稀釋劑。在第一列的孔中加入200 μl已準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)品。其余的孔中分別加入200 μl待檢測(cè)的血清。4 ℃環(huán)境下孵育過夜。在96孔板的每孔中分別加入200 μl的VEGF，在室溫下避光孵育2 h。再次用洗板儀清洗96孔板4次。每孔中分別加入50 μl的底物溶液，放置于室溫下避光孵育45 min。每孔中分別加入50 μl的擴(kuò)增溶液，室溫下避光孵育45 min。每孔中分別加入50 μl的中止液，吹打混勻。利用酶標(biāo)儀在30 min內(nèi)于450 nm下讀取吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到VEGF含量。

1.5 移植脂肪組織的蘇木精-伊紅(HE)染色和血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子的免疫組化染色

將標(biāo)本置于4%多聚甲醛溶液中固定24 h，流水沖洗過夜。乙醇梯度脫水后，將標(biāo)本置于透明二甲苯中浸泡,浸蠟后，進(jìn)行包埋，切片機(jī)切片后用載玻片每個(gè)標(biāo)本撈片5張。其中，2張用于蘇木精-伊紅染色，3張用于血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子的免疫組化染色。蘇木精-伊紅(HE)染色，將切片烤干后，二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，蘇木精染色約8 min，鹽酸酒精分化，流水沖洗20 min。分化后鏡檢。伊紅染色：0.1%-0.5%伊紅染液染色1-2 min，70%乙醇5 s。 梯度酒精脫水，二甲苯透明1-2 min。 封片后貼標(biāo)簽，編號(hào)，倒置顯微鏡觀察。血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子的免疫組化染色 將石蠟切片烤干后，脫蠟、水化，用封閉通透液浸潤切片30 min(室溫避光)后，0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖溶液(pH 6.0)進(jìn)行抗原修復(fù)暴露抗原決定簇，用山羊血清封閉非特異性蛋白 ，加一抗(1∶500)約50 μl，放入濕盒中置于4 ℃冰箱過夜。加二抗孵育和顯色 ，切片復(fù)染、脫水、透明、封片后倒置顯微鏡觀察。

1.6 SD大鼠自體脂肪移植組織內(nèi)毛細(xì)血管密度計(jì)算

在100倍光鏡下觀察脂肪組織移植體血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子免疫組化染色切片，在每張切片中分別隨機(jī)選取6個(gè)視野，周邊區(qū)及中心區(qū)各3個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)每個(gè)視野中的毛細(xì)血管斷面數(shù)目(條)，計(jì)算血管斷面密度(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差，條/視野)。凡是免疫組化染色成棕黃色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或者內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)均作為一個(gè)微血管計(jì)算在內(nèi)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)使用 SPSS13.0 軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以 表示，數(shù)據(jù)采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析進(jìn)行檢驗(yàn)，存活率比較采用卡方檢驗(yàn)，雙側(cè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠自體脂肪移植組織塊觀察

脊椎皮下可見丘狀隆起的脂肪移植體，移植的脂肪組織無移位及擴(kuò)散，在脂肪移植體部位觸及移植體，于其外周1 cm處切開皮膚，鄰近皮膚、皮下組織均未見明顯炎癥反應(yīng)、組織壞死、空腔或膿腫形成，脂肪移植體均表現(xiàn)為質(zhì)地略柔軟、邊界清晰、活動(dòng)度良好的組織團(tuán)塊，脂肪移植體呈暗黃色，外部被一層纖維組織包膜所覆蓋，界線比較明顯。

2.2 大鼠自體脂肪顆粒移植各實(shí)驗(yàn)組間脂肪移植體存活率比較

結(jié)果表明，自體脂肪顆粒移植術(shù)后90 d，模型組脂肪移植存活率為(40.6±6.5)%，低劑量組脂肪移植存活率為(62.1±8.2)%，高劑量組脂肪移植存活率為(64.2±8.4)%。低劑量組和高劑量組脂肪移植存活率均明顯高于模型組(P<0.05)，低劑量組與高劑量組脂肪移植存活率無明顯差異(P>0.05)。

2.3 大鼠自體脂肪顆粒移植各實(shí)驗(yàn)組間血清VEGF表達(dá)比較

結(jié)果表明：SD大鼠自體脂肪顆粒移植低劑量組和高劑量組血清VEGF表達(dá)水平在脂肪移植術(shù)后1，2，4，6周時(shí)，與模型組比較均有明顯增高(P<0.05)，在術(shù)后 2 周時(shí)達(dá)到高峰，低劑量組和高劑量組血清 VEGF 表達(dá)水平無顯著差異(P>0.05，見圖1)。

與模型組比較，*P<0.05圖1 大鼠自體脂肪顆粒移植各實(shí)驗(yàn)組間血清VEGF表達(dá)比較Figure 1 Expression of VEGF in serum at different time after fat particle transplantation

2.4 大鼠自體脂肪移植組織HE染色

結(jié)果顯示：低劑量組和高劑量組自體脂肪移植90 d后均可見脂肪細(xì)胞增生，移植脂肪組織纖維間隔不多，脂肪小葉以及脂肪小葉間纖維組織保持較好，周圍血管較豐富，無論在脂肪移植體周邊區(qū)還是在中央?yún)^(qū)均可見到大量的前脂肪細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，形態(tài)規(guī)則，脂肪細(xì)胞排列比較整齊，形態(tài)相近。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒M移植脂肪組織中有較多的脂肪細(xì)胞壞死融合，形成了數(shù)量較多的大小不等的空泡，存活脂肪細(xì)胞大小不規(guī)則，分布不均勻，脂肪組織間纖維結(jié)締組織較多，并有分隔傾向，偶可見部分前脂肪細(xì)胞與大小不一的脂肪細(xì)胞夾雜在一起，血運(yùn)不豐富，新生血管不明顯(見圖2)。

A.模型組 B.低劑量組 C.高劑量組圖2 自體脂肪顆粒移植90 d后自體移植脂肪組織的HE染色 (×100) Figure 2 Morphology of autotransplanted fat tissues at 90 d after fat particle transplantation by HE (×100)

2.5 SD大鼠自體脂肪移植組織血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子免疫組織化學(xué)染色

血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子免疫組化染色后，血管呈現(xiàn)棕黃色，低劑量組和高劑量組自體脂肪移植90 d后移脂肪組織周邊區(qū)和中心區(qū)血管均較豐富，但差別不明顯。模型組移植脂肪組織中血運(yùn)不豐富，新生血管不明顯(見圖3)。

A.模型組 B.低劑量組 C.高劑量組圖3 SD大鼠自體脂肪顆粒移植90 d后自體移植脂肪組織的血管內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子免疫組化染色結(jié)果 (×100) Figure 3 Immunohistochemical staining of vascular endothelial cells factor Ⅷ in autotransplanted fat tissues 90 d after fat particle transplantation (×100)

2.6 SD大鼠自體脂肪移植組織的毛細(xì)血管密度評(píng)估

通過光鏡下觀察，計(jì)算毛細(xì)血管數(shù)量，模型組移植脂肪組織的毛細(xì)血管密度為(14.10±2.83)條/HP，低劑量組移植脂肪組織的毛細(xì)血管密度為(24.85±3.27)條/HP，高劑量組移植脂肪組織的毛細(xì)血管密度為(25.76±3.42)條/HP。低劑量組和高劑量組毛細(xì)血管密度明顯高于模型組(P<0.05)，但低劑量組與高劑量組的毛細(xì)血管密度無明顯差異(P>0.05)。

3 討論

3.1 自體脂肪組織移植修復(fù)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究

自體脂肪組織移植修復(fù)軟組織缺損畸形距今已有上百年的歷史，與其他種類的人工合成充填材料、異體脂肪或異種脂肪相比較，自體脂肪組織具有來源豐富、取材簡便、操作簡單、充盈外觀好、無排異反應(yīng)、組織相容性好、無明顯過敏反應(yīng)等優(yōu)勢(shì)[6,7]，更加易于被患者所接受，從而倍受整形美容外科醫(yī)生的重視，可廣泛用于充填各種先天性軟組織缺損或后天性軟組織缺損，自體脂肪移植技術(shù)在整復(fù)外科領(lǐng)域治療軟組織缺損沿用已久[8]。但自體脂肪移植的存活率較低長久以來一直是自體脂肪移植的最大障礙，也一直是自體脂肪移植研究討論的重點(diǎn)和難點(diǎn)[9]，長期困擾著臨床醫(yī)師，并且極大地限制了自體顆粒脂肪移植在臨床上的廣泛及大面積應(yīng)用。

較多國內(nèi)外學(xué)者認(rèn)識(shí)到加快脂肪移植組織的血供重建是提高脂肪顆粒移植存活率的關(guān)鍵因素。如果可以找到能夠顯著加速脂肪移植組織血供重建的一些藥物或細(xì)胞因子，在脂肪組織移植的過程中，使脂肪組織移植體的血供加快，脂肪組織內(nèi)的缺血、缺氧、營養(yǎng)不足期縮短，成熟的脂肪細(xì)胞缺血壞死減少；同時(shí)又減少或延緩脂肪細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞吸收并合成脂質(zhì)，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞反分化成為成熟的脂肪細(xì)胞，從而可以代償被吸收的脂肪組織，便可以明顯提高自體脂肪組織移植的成活率[10]。Langer等[11]利用活體免疫熒光顯微鏡進(jìn)行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)脂肪組織移植后的血供主要依賴周圍的血管長入。國內(nèi)學(xué)者杜學(xué)亮等[12]通過免疫組化方法研究脂肪組織內(nèi)微血管的分布，應(yīng)用免疫組化方法顯示微血管，對(duì)不同的時(shí)期脂肪組織移植塊按中央?yún)^(qū)和周邊區(qū)劃分，進(jìn)行了微血管的定量統(tǒng)計(jì)研究，發(fā)現(xiàn)脂肪組織移植體周邊區(qū)的血管密度在移植后的14 d達(dá)到高峰；中央?yún)^(qū)的血管密度呈逐漸增高趨勢(shì)，在同一時(shí)期脂肪組織移植體周邊區(qū)的血管密度要高于中央?yún)^(qū)的血管密度，脂肪組織移植塊周邊區(qū)的血管密度明顯高于中央?yún)^(qū)的血管密度。證明了新生血管在脂肪移植組織的血運(yùn)重建過程中，作為供血的主要渠道，其生長的快慢程度以及數(shù)量對(duì)脂肪移植體顯得尤為重要。移植體與受床建立良好的血運(yùn)是脂肪移植組織存活的關(guān)鍵。血運(yùn)的建立一方面依靠從受床向移植體長入新生血管，另一方面通過新生血管與原有血管吻合溝通?？梢?，改善血液循環(huán)是提高移植脂肪存活率的有效途徑。由于血管新生是由細(xì)胞因子啟動(dòng)的調(diào)控過程，目前最常用的方法是將促血管生長因子應(yīng)用到局部。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)在血管形成的過程中發(fā)揮著最重要的作用，血管內(nèi)皮生長因子是最早被發(fā)現(xiàn)的能夠促進(jìn)血管生長的生長因子，也是目前發(fā)現(xiàn)的效果最強(qiáng)的促血管生成因子。CM-Dil標(biāo)記的血管內(nèi)皮前體細(xì)胞復(fù)合游離脂肪移植，顯示了較高的脂肪存活率和新生毛細(xì)血管密度[13,14]，局部的血管內(nèi)皮生長因子能提高游離移植脂肪的存活率和質(zhì)量[15]。Lei等[16]在SD大鼠自體顆粒脂肪移植的部位注射含有編碼重組人血管內(nèi)皮生長因子(recombinant human vascular endothelial growth factor，rhVEGF)DNA的脂質(zhì)體質(zhì)粒，分別在術(shù)后3，7，15，30 d取出移植物，測(cè)量質(zhì)量并對(duì)移植物進(jìn)行組織學(xué)評(píng)價(jià)以及微血管計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示，術(shù)后15 d和30 d，rhVEGF試驗(yàn)組的微血管計(jì)數(shù)均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于模型組，脂肪移植體吸收率較低。所以本次實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)藥物作用和非藥物作用的模型鼠血液中VEGF的表達(dá)，移植脂肪組織中血管密度，來對(duì)藥物作用進(jìn)行判斷。結(jié)果顯示低劑量組和高劑量組血管密度均高于模型組，而且VEGF表達(dá)也明顯高于模型組。

3.2 SD大鼠自體脂肪顆粒移植動(dòng)物模型

脂肪顆粒移植動(dòng)物模型多采用SD大鼠或裸鼠[17-19]。即通過手術(shù)切取大鼠自體脂肪組織，然后通過脂肪顆粒注射技術(shù)將自體脂肪顆粒移植于大鼠背部皮下；或者通過脂肪抽吸技術(shù)獲得人的脂肪顆粒，然后采用脂肪注射技術(shù)將脂肪顆粒移植在裸鼠背部皮下。大鼠自體脂肪組織取材的部位多以腹股溝區(qū)域脂肪墊為常見[20]。在自體脂肪移植術(shù)后取材的時(shí)間選擇上，多數(shù)實(shí)驗(yàn)研究將時(shí)間選擇在3-6個(gè)月之間。在脂肪移植術(shù)后的3個(gè)月內(nèi)，脂肪組織的吸收一般比較嚴(yán)重，而移植脂肪組織的量通常在脂肪移植術(shù)后3個(gè)月后保持穩(wěn)定。因此，本次實(shí)驗(yàn)選擇在自體脂肪移植術(shù)后的90 d進(jìn)行取材，這樣可以更加準(zhǔn)確地反映移植脂肪組織真實(shí)的吸收率、存活率，貼近臨床應(yīng)用，與臨床實(shí)際觀察結(jié)果保持一致。

3.3 丹紅對(duì)自體脂肪顆粒移植的影響

近些年來，中藥對(duì)人體疾病的治療越來越受到了中外學(xué)者的重視，中藥的研究開展得越來越深入，許多中藥的藥理功效得到了較廣泛的認(rèn)同。臨床治療氣虛血瘀的病證，常配伍使用丹紅，通過益氣而達(dá)活血之效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明，丹紅對(duì)心血管系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、物質(zhì)代謝、肝腎功能及腫瘤治療等均可發(fā)揮良好的作用，丹紅能夠擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，改善心臟功能，可使減少的血細(xì)胞數(shù)恢復(fù)正常，可以增加機(jī)體抗缺氧能力，可以保護(hù)細(xì)胞，延長細(xì)胞壽命[20]。

基于丹紅較為明確的藥理機(jī)制和藥物效果，本研究將丹紅應(yīng)用在提高自體脂肪顆粒移植存活率的研究中，結(jié)果顯示丹紅注射液能顯著提高SD大鼠自體脂肪顆粒移植的存活率。本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)丹紅注射液提高自體脂肪移植存活率做了定性研究，丹紅在自體脂肪移植術(shù)后的最佳給藥方式、最佳劑量范圍以及最佳用藥頻率、持續(xù)時(shí)間等定量結(jié)果尚不清楚，在本實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，丹紅是否還能夠更好地提高自體脂肪組織移植的存活率？丹紅與其他中藥如當(dāng)歸等的配伍方能否更加有利于提高自體脂肪移植組織的存活率？這些問題均有待于今后更進(jìn)一步的研究探討，使該方法能夠更好地應(yīng)用于臨床，增加脂肪移植組織的存活率，提高自體脂肪移植修復(fù)技術(shù)的成功率。

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Influence of Danhong injection on the survival rate of fat particle auto-transplantation in rats

JIA Yao1, WANG Peng1,2, CHEN Xihang1,2, WU Chengxing3*

(1DepartmentofPlasticSurgery,FirstHospitalofShanxiMedicalUniversity,Taiyuan030001，China;2FirstClinicalMedicalCollegeofShanxiMedicalUniversity;3PlasticSurgery,ShanxiDayiHospital;*Correspondingauthor,E-mail:591292983@qq.com)

ObjectiveTo investigate the influence of Danhong injection on the survival rate of fat particle auto-transplantation.MethodsAutologous fat particle transplantation rat model was established，and then divided into three groups:model group, low dose group and high dose group. The rat were given different doses of astragalus membranaceus injection by intramuscular injection in experiment groups and nothing in control group. The expression level of VEGF in blood serum was detected. Fat grafts were collected 90 d after the autologous fat transplantation to calculate the survival rate. The adipocyte morphology and density of blood vessels of the fat transplant were observed by HE staining. Immunohistochemical staining of vascular endothelial cells factor Ⅷ was used to observe the capillary growth and density.ResultsAt 90 d after the fat particle transplantation, the survival rates of fat transplant in experiment groups were higher than that in control group(P<0.05). ELISA showed the levels of VEGF expression in experimental groups were higher than that in control group(P<0.05). HE staining showed the number, the shape, the degree of fat transplant fibrosis were better in experimental groups than that in control group. Immunohistochemical staining of vascular endothelial cells factor Ⅷshowed newborn microvessel densities in experimental groups were higher than in control group.ConclusionDanhong injection can significantly promote the survival rate of autologous fat particle transplant in SD rats.

autologous fat transplantation； Danhong injection； vascular endothelial growth factor； angiogenesis； survival rate; rats

山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院院青年基金資助項(xiàng)目(YQ1313);山西醫(yī)科大學(xué)校青年基金資助項(xiàng)目(02201311)

賈垚,女，1983-01生，碩士，主治醫(yī)師，E-mail：591292983@qq.com

2016-08-12

R622.9

A

1007-6611(2016)11-0982-06

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.11.005