體腔積液薄層液基細胞涂片免疫組化染色方法研究

王小梅

體腔積液薄層液基細胞涂片免疫組化染色方法研究

王小梅

目的 對體腔積液薄層液基細胞涂片免疫組化染色最佳方式進行研究分析。方法 收集有組織學對照的惡性胸水68例，每例選12張石蠟切片，作為A組，將每例胸水用薄層液基細胞術(shù)制片36張，隨機平均分成B、C、D三組，比較并進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果 A組的診斷準確率是100%，B組準確率是99.4%，C組準確率是92%，D組準確率是90%，其中A組與B組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），B組與C、D兩組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。結(jié)論 免疫組化雙重染色診斷率優(yōu)于單純免疫組化染色及免疫組化，在數(shù)量有限的TCT涂片中能夠發(fā)揮比較好的效果，為臨床診斷提供參考依據(jù)。

肺癌；體腔積液；薄層液基細胞學檢查；抗原修復；退色；免疫組化

薄層液基細胞技術(shù)（Thin-layer cytology test，TCT）在上世紀90年代開始流行，最初是在婦科宮頸細胞學檢查中使用，效果突出［1］。后來該技術(shù)被應用于其他非婦科細胞學檢查中［2-4］，相比傳統(tǒng)的脫落細胞學涂片，優(yōu)點在于背景清晰、顯微鏡觀察效果好、血液成分少、薄層，但是在癌性體腔積液TCT檢查中的立體感沒有傳統(tǒng)涂片好。使用蘇木精-伊紅（Hematoxylin-eosin，HE）染色癌細胞與間皮細胞難度較大，對癌細胞分類困難。IHC染色需要先使用HE染色，否則TCT涂片的癌細胞和疑似癌細胞不清楚，不同褪色方式會出現(xiàn)不同結(jié)果［5-8］。胸水TCT涂片IHC染色診斷難度大，需要詳細的進行分類，此次對雙重免疫組化染色的效果進行了研究分析，獲得了比較好的效果，現(xiàn)進行以下報道。

1　材料與方法

1.1材料

根據(jù)2009年3月～2012年3月我院的68例肺癌伴胸水轉(zhuǎn)移送檢病例進行研究分析，患者年齡45～70歲，有64例CT表明肺內(nèi)占位病變。有9例患者鎖骨上窩淋巴結(jié)腫大。經(jīng)HE染色和IHC染色確診，13例鱗狀細胞癌，40例腺癌，6例腺鱗癌，9例神經(jīng)內(nèi)分泌癌；此次研究使用的TCT制片設備是康柏液基細胞制片機及配套耗材，由湖南長沙康柏恩醫(yī)療科技公司提供，所選試劑均購于福州邁新公司。

1.2方法

收集有組織學對照的惡性胸水68例，每例選12張石蠟切片，作為A組，將每例胸水用薄層液基細胞術(shù)制片36張，隨機平均分成B、C、D三組；B組經(jīng)蘇木精-伊紅（HE）染色及檸檬酸或EDTA修復退色，做免疫組化雙重染色，C組經(jīng)HE染色，用鹽酸方法退色，做免疫組化染色，D組不經(jīng)HE染色，直接做免疫組化。將結(jié)果與A組組織病理診斷比較并進行統(tǒng)計學分析。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

A組的診斷準確率是100%，B組準確率是99.4%，C組準確率是92%，D組準確率是90%，其中A組與B組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），B組與C、D兩組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。詳見表1。

表1　檢出結(jié)果對比

3　討論

臨床中，TCT檢查在腫瘤疾病的診斷、鑒別以及腫瘤分類中能夠發(fā)揮較好的效果。臨床上肺癌伴胸水轉(zhuǎn)移患者手術(shù)機會比較少，多數(shù)以化療和放療為主，對于這部分患者，首先要明確患者是否有胸水轉(zhuǎn)移，以便對腫瘤進行分類。臨床一般以活檢組織病理診斷檢查，但活檢的影響因素眾多，所以難度很大，所以臨床多以胸水檢查來替代其診斷和分類。不管是采取TCT檢查涂片方式，還是傳統(tǒng)涂片檢查方式，通過HE染色診斷后，還需要使用免疫組化染色，才可以更好的分析間皮細胞，對腫瘤類型以及來源進行分析。TCT涂片中的細胞體態(tài)多樣化，各種細胞形態(tài)可以表達CR以及MC，除此之外還能夠?qū)堑鞍證K等抗原成分進行表達。但同一張TCT涂片上使用一種抗原，如CK，無法對間皮細胞和癌細胞進行區(qū)分。

根據(jù)研究來看，HE染色，檸檬酸以及EDTA修復褪色做雙重免疫組的染色方式比較優(yōu)秀，準確率比較高，使用鹽酸褪色常規(guī)免疫組化染色緊隨其后，沒有使用HE染色的準確率最低。對其原因進行分析，筆者認為，前面的兩種方式都有HE染色步驟，使用顯微鏡來篩選合格的TCT涂片，B組的抗原熱修復不會對抗原成分產(chǎn)生損壞，同時也不會阻礙抗原抗體的結(jié)合；C組使用了鹽酸和草酸進行褪色，導致了抗原成分被破壞，所以準確率有所下降［6］，容易出現(xiàn)假陰情況；D組沒有使用HE染色，顯微鏡下無法篩選，所以合格涂片率低，診斷準確率也低。

此次研究中，A組的診斷準確率是100%，B組準確率是99.4%，C組準確率是92%，D組準確率是90%，其中A組與B組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），B組與C、D兩組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P均＜0.05）。說明使用免疫組化雙重染色的方式準確率最高，應用于體腔積液TCT診斷具有比較好的效果，在數(shù)量有限的TCT涂片中能夠發(fā)揮比較好的效果。所以臨床中我們推介在進行體腔積液檢查時，選擇這種檢驗方式。

［1］馬博文，楊凡.液基薄層細胞制片技術(shù)在非婦科標本中的應用［J］.診斷病理學雜志，2010，17（1）：63-66.

［2］戴芳，楊舉倫，王麗，等.淋巴組織細針吸取細胞HE染片褪色后作免疫組化的體會［J］.西南國防醫(yī)藥，2010，20（2）：178-180.

［3］王興波，任仕俊，陳懷敏，等.抗原熱修復退色法在HE切片改做免疫組化染色中的探索［J］.臨床與實驗病理學雜志，2012，28（10）：1176-1177.

［4］朱淑玲，楊清緒.原位雜交與免疫組織化學雙標記技術(shù)的應用價值［J］.中國基層醫(yī)藥，2010，17（11）：1447-1448.

［5］覃小梅，劉勇，陸穎.外周血異型淋巴細胞檢測的臨床意義［J］.檢驗醫(yī)學與臨床，2011，8（15）：1882-1883.

［6］周曉倩.液基細胞薄層涂片技術(shù)的臨床應用價值［J］.中國當代醫(yī)藥，2012，19（3）：99-100.

［7］李小華，張云霄，冬國友，等.全自動制片染色系統(tǒng)制作優(yōu)質(zhì)液基細胞片方法的探討［J］.山西醫(yī)藥雜志，2013，42（24）：1433-1434.

［8］歐陵斌，楊曉斌，柏彬，等.4種液基細胞制片的比較［J］.臨床與實驗病理學雜志，2013，29（4）：457-459.

Analysis of the Thin Layer Liquid Based Cytology Smear Method of the Body Cavity Effusion

WANG Xiaomei Department of Pathology，F(xiàn)ourth Hospital of Daqing City，Daqing Heilongjiang 163712，China

Objective To study the best method for the immunohistochemistry staining of thin layer liquid based cytology.Methods To collect histological control of malignant pleural effusion in 68 cases，12 cases of each piece of paraffin as group A，each thoracic water with ThinPrep cell production in 36，which were randomly divided into B，C，D groups，compare and analyze the data.Results The diagnostic accuracy rate of group A was 100%，the accuracy rate of group B was 99.4%，the accuracy rate of group C was 92%，the accuracy rate of group D was 90%，compared with group B，the difference between group A was not statistically significant（P＞ 0.05），Group B and between the C，D groups，there were statistically significant differences（P＜ 0.05）.Conclusion The diagnostic rate of double staining of immunohistochemistry is better than that of simple immunohistochemical staining and immunohistochemistry，which can exert a good effect in the limited amount of TCT smear，which can provide reference for clinical diagnosis.

Lung cancer，Cavity effusion，Thin-layer cytology test，Antigen repairing，F(xiàn)ade，Immunohistochemistry

R730.4

A

1674-9316（2016）20-0179-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.20.114

大慶市第四醫(yī)院病理科，黑龍江 大慶 163712