肥胖大鼠心外膜脂肪巨噬細(xì)胞和血清脂肪細(xì)胞因子水平特點(diǎn)

張彩坤 張豪英 邢冬杰 劉娟娟 王 楓

肥胖大鼠心外膜脂肪巨噬細(xì)胞和血清脂肪細(xì)胞因子水平特點(diǎn)

張彩坤 張豪英 邢冬杰 劉娟娟 王 楓

目的 探討肥胖大鼠心外膜脂肪（EAT）巨噬細(xì)胞（M）和血清脂肪細(xì)胞因子水平特點(diǎn)。方法 20只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為對照組和肥胖組，對照組飼以基礎(chǔ)飼料，實(shí)驗(yàn)組飼以高脂飼料。80天后取EAT并稱重，標(biāo)本行免疫組化檢測。檢測血清脂肪細(xì)胞因子瘦素、脂聯(lián)素和內(nèi)脂素。結(jié)果 肥胖組EAT質(zhì)量、M數(shù)目均高于對照組（P＜0.05）。肥胖組脂聯(lián)素水平低于對照組，而內(nèi)脂素、瘦素高于對照組（P＜0.05）。M數(shù)目與脂聯(lián)素呈負(fù)相關(guān)，與內(nèi)脂素、瘦素呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 肥胖大鼠EAT質(zhì)量增加，M數(shù)目增多，并且與全身慢性炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。

肥胖；心外膜脂肪；巨噬細(xì)胞

心外膜脂肪組織（epicardial adipose tissue，EAT）是胸廓內(nèi)的內(nèi)臟脂肪組織，覆蓋在心臟及大血管表面。EAT分泌多種促炎脂肪因子，與心血管危險因素以及冠狀動脈粥樣硬化關(guān)系密切［1］，而抗炎因子如脂聯(lián)素卻表達(dá)下降［2］。巨噬細(xì)胞（macrophages，M）在慢性低度炎癥性疾病如肥胖、動脈粥樣硬化等疾病的致炎作用中發(fā)揮重要作用［3］。本研究擬探討肥胖大鼠EAT中M和血清脂肪細(xì)胞因子水平，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物

選擇20只成年雄性SD大鼠，隨機(jī)分為對照組和肥胖組，對照組飼以基礎(chǔ)飼料，實(shí)驗(yàn)組飼以高脂飼料，自由進(jìn)飲及進(jìn)食。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1脂肪因子水平檢測 飼養(yǎng)80天后斷頭取血留大鼠血液標(biāo)本，血清轉(zhuǎn)移至凍存管，-80℃儲存。采用ELISA法檢測血清瘦素、脂聯(lián)素和內(nèi)脂素。

1.2.2取心外膜脂肪 取心外膜脂肪，稱重后將標(biāo)本裝入凍存管，液氮凍存10 min，然后置于深低溫冰箱中保存，待處理。

1.2.3免疫組化染色及M觀察 常規(guī)石蠟包埋，5μm厚連續(xù)切片。常規(guī)滴加兔抗鼠一抗（CD68抗體）、二抗生物素標(biāo)記山羊抗兔IgG，37℃孵育20分鐘。顯色劑顯色，蘇木精復(fù)染。光鏡下400×視野下每張切片隨機(jī)選取4個視野，計(jì)數(shù)M。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS 16.0軟件做統(tǒng)計(jì)分析。兩組之間比較采用t檢驗(yàn)。肥胖組EAT M與脂肪細(xì)胞因子行相關(guān)分析。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1　肥胖組和對照組血清脂肪細(xì)胞因子特點(diǎn)

2　結(jié)果

2.1兩組EAT質(zhì)量比較

肥胖組EAT質(zhì)量為（0.45±0.20）g，高于對照組（0.30±0.14）g（t=2.837，P=0.012）。

2.2兩組EAT M比較

肥胖組EAT M數(shù)目為（44.5±23.6）/mm2，高于對照組（20.7±10.5）/mm2（t=6.128，P=0.000）。

2.3兩組血清脂肪細(xì)胞因子比較

肥胖組脂聯(lián)素水平低于對照組，而內(nèi)脂素、瘦素高于對照組，見表1。

2.4肥胖組脂肪細(xì)胞因子與M數(shù)目相關(guān)性分析

M數(shù)目與脂聯(lián)素（r=-0.228，P=0.021）呈負(fù)相關(guān)，與內(nèi)脂素（r=0.192，P=0.036）、瘦素（r=0.247，P=0.017）呈正相關(guān)。

3　討論

先前大多數(shù)關(guān)于動脈粥樣硬化的研究專注于血管壁的病變，很少有研究探討冠脈周圍脂肪組織和動脈粥樣硬化之間的關(guān)系。本研究探討了胸腔內(nèi)重要的內(nèi)臟脂肪組織EAT，發(fā)現(xiàn)肥胖大鼠的EAT質(zhì)量高于對照組，提示EAT同其他部位的脂肪類似，在肥胖者中是增加的。作為一種內(nèi)臟脂肪，質(zhì)量的增加可能產(chǎn)生一系列的不良改變。有學(xué)者［4］報(bào)道，在豬的代謝綜合征模型中，過多的EAT損傷了冠脈對緩激肽的血管內(nèi)皮依賴性的血管舒張功能，但在較瘦豬中卻無這種現(xiàn)象。因此，減肥將有助于降低EAT質(zhì)量，是預(yù)防冠狀動脈粥樣硬化一個簡單、有效的方法。

本實(shí)驗(yàn)比較了肥胖組和對照組EAT M數(shù)目，發(fā)現(xiàn)肥胖組EAT的M高于對照組。張莉亞等［5］以小鼠為研究對象，取其附睪脂肪，發(fā)現(xiàn)肥胖小鼠附睪脂肪M浸潤程度要更嚴(yán)重，與本研究結(jié)果相似。有學(xué)者以冠心病患者為研究對象［6］，發(fā)現(xiàn)冠心病者冠脈外膜有大量M浸潤，在外膜與血管外脂肪交界處可見明顯M聚集帶。本實(shí)驗(yàn)同時發(fā)現(xiàn)肥胖組脂聯(lián)素水平較低，而內(nèi)脂素、瘦素較高，與前面的研究一致［7］。更重要的是，本研究發(fā)現(xiàn)，EAT中M數(shù)目與各種脂肪因子水平密切相關(guān)，提示M參與了肥胖大鼠的慢性全身炎癥。M是內(nèi)臟白色脂肪組織中內(nèi)脂素的主要來源［8］。瘦素是一種促炎因子，而脂聯(lián)素為一種抗炎因子，所以M數(shù)量與瘦素水平呈正相關(guān)，而與脂聯(lián)素呈負(fù)相關(guān)。在本研究中，可以推測，EAT作為一種圍繞在冠狀動脈周圍的內(nèi)臟脂肪，與冠狀動脈的解剖結(jié)構(gòu)關(guān)系密切，通過直接浸潤的旁分泌或滋養(yǎng)血管分泌途徑“由外到內(nèi)”作用于動脈管壁的各層結(jié)構(gòu)及全身，從而參與冠狀動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。因此，如何改善EAT以M作為標(biāo)志的慢性炎癥，對于肥胖者預(yù)防冠狀動脈粥樣硬化具有重要意義，這也是我們進(jìn)一步的研究目標(biāo)。

［1］Iacobellis G，Willens HJ.Echocardiographic epicardial fat： A review of research and clinical applications［J］.American Society of Echocardiography，2009，22（12）： 1311-1319.

［2］王現(xiàn)國，陳新忠，夏東升，等.冠心病患者冠脈病變程度與心外膜脂肪脂聯(lián)素表達(dá)的關(guān)系［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2012，29（6）：1181-1183.

［3］趙葦葦，胡仁明.關(guān)注巨噬細(xì)胞在慢性低度炎癥性疾病中的作用［J］.中華內(nèi)分泌代謝雜志，2011，27（3）：189-192.

［4］那順巴雅爾，吉木斯，牧仁，等.兩種小型豬代謝綜合征相關(guān)指標(biāo)的比較［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2016，26（5）：49-52.

［5］張莉亞，苗青，李益明，等.高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠中缺氧對胰島素抵抗及脂肪組織巨噬細(xì)胞浸潤的影響［J］.復(fù)旦學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2015，42（4）：467-472.

［6］陳新忠，周元，楊文忠，等.冠狀動脈外膜及外周脂肪對冠狀動脈粥樣硬化的影響［J］.臨床心血管病雜志，2009，25（2）：106-109.

［7］金善姬，熊英環(huán)，許梅花，等.脂肪細(xì)胞因子與胰島素抵抗及肥胖關(guān)系［J］.中國公共衛(wèi)生，2014，30（1）：50-52.

［8］賴愛萍，陳文鶴.內(nèi)脂素與肥胖及運(yùn)動關(guān)系研究進(jìn)展［J］.中國運(yùn)動醫(yī)學(xué)雜志，2011，30（1）：105-109.

Characteristics of Macrophage Infiltration in Epicardial Adipose Tissue and Fatty Cytokine Level in Serum in Obese Rats

ZHANG Caikun ZHANG Haoying XING Dongjie LIU Juanjuan WAGN Feng Department of Western Medicine Education，Shandong College of Traditional Chinese Medicine，Yantai Shandong 264100，China

Objective To explore the characteristics of macrophage infiltration in epicardial adipose tissue （EAT） and fatty cytokine level in serum in obese rats.Methods 20 adult male SD rats were randomly divided into the control group and the obese group.The control group were fed with basal diet and the obese group were fed with high fat diet.EAT were taken after 80 days and were weighed and detected by immunohistochemistry.Serum leptin，adiponectin and visfatin were detected.Results EAT weight and the number of macrophage in the obese group were significantly higher than the control group（P＜0.05）.The level of leptin and visfatin in the obese group were significantly higher and adiponectin was significantly lower than the control group（P＜ 0.05）.The number of macrophages was negatively correlated with adiponectin and was positively correlated with visfatin and leptin（P＜0.05）.Conclusion The weight of EAT and the number of macrophage in EAT in obese rats are increased，and macrophage is closely associated with chronic systemic inflammatory.

Obesity，Epicardial adipose tissue，Macrophage

R3

A

1674-9316（2016）20-0192-02

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.20.122

山東省教育廳科研計(jì)劃項(xiàng)目肥胖大鼠心外膜脂肪巨噬細(xì)胞 極性特點(diǎn)的研究（課題編號：J13LK55）

山東中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校西醫(yī)教學(xué)部，山東 煙臺 264100

張彩坤，E-mail：zhangcaikun666@aliyun.com