ATR-FTIR技術在進口血竭摻偽鑒別中的應用

李 夢 劉 杰 呂曉娜 李紅霞 楊瑤珺 王文祎

(北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京，100102)

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中藥研究

ATR-FTIR技術在進口血竭摻偽鑒別中的應用

李 夢 劉 杰 呂曉娜 李紅霞 楊瑤珺 王文祎

(北京中醫(yī)藥大學中藥學院，北京，100102)

目的：利用傅里葉變換衰減全反射紅外光譜技術(ATR-FTIR)對進口血竭中的摻偽物質(zhì)進行快速鑒別。方法：根據(jù)進口血竭與松香、達瑪樹脂、國產(chǎn)血竭對照藥材的紅外光譜對比圖來對進口血竭中的摻偽物質(zhì)進行快速鑒別。結果：27批進口加工血竭中有13批摻入了松香，3批摻入了達瑪樹脂，4批為國產(chǎn)血竭冒充，嚴重影響了進口血竭的質(zhì)量。結論：傅里葉變換衰減全反射紅外光譜技術操作快速簡便，適合中藥的快速鑒別。

進口血竭；傅里葉變換衰減全反射紅外光譜技術；摻偽物質(zhì)鑒別。

血竭，習稱“進口血竭”，為棕櫚科植物麒麟竭DaemonoropsdracoBl.果實中滲出的樹脂經(jīng)加工制成[1]。為貴重藥材，具有活血化瘀、消腫止痛、收斂止血、補血等功效。龍血竭，習稱“國產(chǎn)血竭”，為百合科植物劍葉龍血樹[2]Dracaenacochinensis(Lour)S.C.Chen含脂木材經(jīng)提取得到的樹脂，其功效與進口血竭相似。進口血竭價格昂貴，與國產(chǎn)血竭價格相差甚遠，均摻偽嚴重。本實驗應用傅里葉變換衰減全反射紅外光譜技術(ATR-FTIR)對27批進口血竭中的摻偽物質(zhì)進行鑒別，以實現(xiàn)進口血竭的快速鑒別，并與高效液相色譜法測出的結果相對比，以使ATR-FTIR鑒定得到的結果更具有說服力。

1 ATR-FTIR對進口血竭摻偽物質(zhì)鑒別

1.1 儀器及檢測條件 儀器：Thermo Nicolet紅外光譜儀，紅外光譜儀衰減全反射附件，DTGS檢測器，ATR附件檢測范圍：4000～650.0 cm-1，光譜分辨率4 cm-1，掃描信號累加16次。

1.2 樣品及制備 進口血竭樣本27批，編號為J1-J27。國產(chǎn)血竭樣本46批，編號為G1-G46。樣本采集自河北安國、安徽亳州、桂林、哈爾濱、河南等地。將收集好的樣品粉碎，過4號篩，置干燥器中。

圖1 進口血竭的紅外光譜圖

1.3 儀器穩(wěn)定性考察 以國產(chǎn)血竭G1為例。對樣品粉末連續(xù)掃描5次，對所得到的譜圖進行相似度比較，其相關系數(shù)為0.999 9，結果表明，儀器具有良好的穩(wěn)定性和精密度。

1.4 樣品重現(xiàn)性考察 以國產(chǎn)血竭G1為例。對樣品粉末重復掃描5次，對所得到的譜圖進行相似度比較，其相關系數(shù)為0.998 0～0.999 9，結果表明，樣品重現(xiàn)性良好，符合實驗要求。

1.5 ATR-FTIR測定 在采集數(shù)據(jù)前，按儀器測試要求將金剛石ATR附件水平放置于FTIR儀的樣品倉中。將上述樣品粉末置于金剛石與校正壓力裝置之間的凹槽內(nèi)，每次所用機械校正壓力保持不變，分別對各樣品進行ATR-FTIR測定。每個樣品測定前均對背景進行掃描。

1.6 數(shù)據(jù)分析 采用OMNIC操作軟件對樣品進行數(shù)據(jù)采集和圖譜預處理，預處理包括基線校正和平滑處理。

1.6.1 進口血竭的標準紅外光譜圖 以進口血竭對照藥材為例，掃描紅外光譜，得到進口血竭的標準光譜圖。見圖1。

1.6.2 進口血竭摻偽物質(zhì)鑒別 分別對27批次進口血竭與松香、達瑪樹脂、國產(chǎn)血竭對照藥材用傅里葉-衰減全反射紅外光譜儀進行掃描，得到其紅外光譜圖，通過對比紅外圖譜中的特征峰，可以鑒別進口血竭中是否摻入了松香、達瑪樹脂以及國產(chǎn)血竭。通過對比紅外光譜分析圖，可得到摻偽情況表。見表1。

表1 進口血竭摻偽情況表

2 高效液相色譜法對進口血竭摻偽物質(zhì)鑒別

2.1 儀器與試劑

2.1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀；色譜柱：Agilent TC-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；Sartorious BP110S分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司)；KQ5200E超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；銅沖。

2.1.2 試劑 甲醇(Fisher公司，色譜純)；屈臣氏蒸餾水；乙腈(Fisher公司，色譜純)；龍血素A對照品(批號為111660-200402，中國食品藥品檢定研究院)；龍血素B對照品(批號為111558-201006，中國食品藥品檢定研究院)；冰醋酸(分析純)；血竭素高氯酸鹽對照品(批號為110811-201105，中國食品藥品檢定研究院)。

2.2 進口血竭中血竭素含量的測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 按2015年版《中華人民共和國藥典》方法中的規(guī)定，填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鈉按50∶50的比例為流動相；以440 nm作為檢測波長；柱溫控制在40 ℃。計算得到的理論板數(shù)按血竭素峰應不低于4 000。

2.2.2 血竭素高氯酸鹽對照品溶液的制備 按2015年版《中華人民共和國藥典》方法中的規(guī)定，精密稱取進口血竭的血竭素高氯酸鹽對照品9 mg，放置于50 mL棕色量瓶中，加入3%的磷酸甲醇溶液使之溶解，并稀釋至刻度，待充分搖勻后再精密量取1 mL溶液置5 mL棕色量瓶中，加入甲醇試劑至刻度，搖勻，即得每1 mL中含血竭素26 μg的血竭素高氯酸鹽對照品。

2.2.3 供試品溶液的制備 按2015年版《中華人民共和國藥典》方法中的規(guī)定，取進口血竭樣品適量，研磨成細粉，精密稱取0.05～0.15 g，放置于具塞試管中，再加入精密量取的10 mL 3%磷酸甲醇溶液，密塞后振搖3 min，濾過，精密量取1 mL續(xù)濾液，放置于5 mL棕色量瓶中，加入甲醇試劑至刻度，搖勻，即得。分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各10 μL，將其注入到液相色譜儀，測定，即得。測得的樣品含量如表2所示。

表2 高效液相色譜法測得血竭素含量

3 討論

采用傅里葉-衰減全反射紅外光譜法，得到中紅外光譜圖。1 689.68 cm-1峰、784.53 cm-1峰、891.44 cm-1峰，為松香特征峰，以此來鑒別進口加工血竭；峰1 727.20 cm-1、1 692.36 cm-1、1 231.43 cm-1、783.9 cm-1、714.22 cm-1為達瑪樹脂特征峰，以此來鑒別進口加工血竭的輔料是否為達瑪樹脂；3362.21 cm-1峰為鑒別進口血竭、國產(chǎn)血竭的特征峰。

通過對比進口血竭、國產(chǎn)血竭、松香、達瑪樹脂的中紅外光譜圖，得出樣品J2、J4、J5、J8、J9、J13、J14、J15、J16、J17、J18、J19、J23、J24光譜圖中出現(xiàn)了松香的特征峰，分別為1 689.68 cm-1峰(強峰)、784.53 cm-1峰、891.44 cm-1峰，故此14批樣品中摻入了松香。

樣品J10、J26、J27加入的輔料為達瑪樹脂。因其紅外光譜圖中有達瑪樹脂特征峰1 727.20 cm-1、1 692.36 cm-1、1 231.43 cm-1、783.9 cm-1、714.22 cm-1，因此推斷此3批樣品為加入達瑪樹脂的進口加工血竭。

對比中紅外圖譜還發(fā)現(xiàn)樣品J6、J7、J21、J22，4批進口血竭經(jīng)掃描，得出國產(chǎn)血竭的中紅外光譜圖，該4批樣品實際為國產(chǎn)血竭，而且高效液相色譜法在J6、J7、J21、J22均未檢測出血竭素含量，即表明樣品并非進口加工血竭，傅里葉-衰減全反射紅外光譜法和高效液相色譜法測定的結果相互印證了結論的可靠性，能快速鑒定出進口血竭中摻入國產(chǎn)血竭的現(xiàn)象。

從以上結果可以看出市場上流通的進口血竭摻偽非常嚴重，嚴重影響了血竭質(zhì)量。同時也證明了傅里葉變換衰減全反射紅外光譜技術可以對進口血竭中的摻偽物質(zhì)進行快速鑒別，有一定實際應用，值得在中藥領域推廣應用。

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(2015-10-06收稿 責任編輯：洪志強)

ATR-FTIR Technique in Identification of Adulteration in Imported Draconis

Li Meng, Liu Jie, Lyu Xiaona, Li Hongxia, Yang Yaojun, Wang Wenyi

(SchoolofChinesePharmacy,BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100102,China)

Objective:Fourier transform attenuated total reflection infrared spectroscopy (ATR-FTIR) was applied for a quick identification of adulteration in imported draconis. Methods:The FTIR figures of imported dracosin, darma resin and Chinese dracosin were contrasted to quickly identify the adulteration in all the materials. Results:Rosin was mixed in 13 batches in all the 27 batches of imported draconis, resin in 3 batches and Chinese draconis was substituted in 4 batches. These seriously affected the quality of the imported draconis. Conclusion:Fourier transform attenuated total reflection infrared spectroscopy is easy and convenient for operation and is suitable for quick identification of traditional Chinese medicine (TCM).

Imported draconis; Attenuated total reflection fourier transform infrared spectroscopy (ATR-FTIR); Adulteration identification

北京中醫(yī)藥大學“重點學科”開發(fā)課題(編號：2013-2DXKKF-21)

R282.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2016.10.051