血小板血型抗體與妊娠次數(shù)及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)關(guān)系的研究

湯潔，趙瑩瑩，魏威，閆素文，張寧

（中國(guó)人民解放軍第202醫(yī)院優(yōu)生優(yōu)育研究所，遼寧 沈陽(yáng) 110003）

血小板血型抗體與妊娠次數(shù)及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)關(guān)系的研究

湯潔，趙瑩瑩，魏威，閆素文，張寧

（中國(guó)人民解放軍第202醫(yī)院優(yōu)生優(yōu)育研究所，遼寧 沈陽(yáng) 110003）

目的：檢測(cè)血小板血型抗體在孕婦血清中的表達(dá)情況，分析其與妊娠次數(shù)及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系。方法：選擇2015年4月至12月，在解放軍第202醫(yī)院優(yōu)生優(yōu)育研究所進(jìn)行產(chǎn)前檢查的100例初產(chǎn)婦、100例經(jīng)產(chǎn)婦（妊娠次數(shù)≥2次）及100例診斷為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者為研究對(duì)象，收集其孕齡第16～28周的外周血血樣，利用固相凝集法檢測(cè)各組血清中血小板抗體的表達(dá)情況。結(jié)果：初產(chǎn)婦組、經(jīng)產(chǎn)婦組及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組分別檢測(cè)出血小板血型抗體陽(yáng)性5、14和26例，卡方分析結(jié)果顯示妊娠次數(shù)及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)生率與血小板血型抗體陽(yáng)性率呈顯著相關(guān)性（P＜0.05）。結(jié)論：采用固相凝集法篩查產(chǎn)前血小板血型抗體表達(dá)情況可為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)提供診斷和治療依據(jù)。

血小板血型抗體；復(fù)發(fā)性流產(chǎn)；固相凝集法；產(chǎn)前篩查

復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion，RSA）是指與同一性伴侶連續(xù)發(fā)生2次或2次以上妊娠并自然流產(chǎn)者。其病因復(fù)雜，包括遺傳因素、內(nèi)分泌因素、感染因素、內(nèi)生殖器官解剖異常以及自身免疫因素等，但仍有60%～80%的患者病因不明，稱(chēng)為原因不明復(fù)發(fā)性流產(chǎn)。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，生殖免疫學(xué)已成為闡述其發(fā)生發(fā)展的重要切入點(diǎn)［1］。母胎血小板血型不合的妊娠可使母體產(chǎn)生抗胎兒血小板抗體，導(dǎo)致胎兒血小板破壞，使胎兒或新生兒血小板數(shù)目減少，從而引發(fā)早期流產(chǎn)、新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜或復(fù)發(fā)性流產(chǎn)［2］。因此對(duì)適齡孕婦，特別是診斷為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者產(chǎn)前進(jìn)行血小板血型抗體的篩查及研究有著極其重要的作用。為進(jìn)一步探討血小板血型抗體與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的關(guān)系，本研究采用固相凝集法，檢測(cè)了孕齡為16～28周的100例初產(chǎn)婦、100例經(jīng)產(chǎn)婦（妊娠次數(shù)≥2次）和100例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清標(biāo)本中血小板血型抗體的表達(dá)情況，及血小板血型抗體陽(yáng)性率與妊娠次數(shù)及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象和標(biāo)本采集選擇2015年4月至12月在解放軍第202醫(yī)院優(yōu)生優(yōu)育研究所就診的初產(chǎn)婦100例，年齡24～34歲；經(jīng)產(chǎn)婦100例（陽(yáng)性對(duì)照），年齡26～38歲；復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦100例，年齡25～34歲。經(jīng)產(chǎn)婦組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠次數(shù)≥2次；（2）無(wú)不良妊娠史。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠28周前連續(xù)2次以上（含2次）自然流產(chǎn)；（2）流產(chǎn)原因?yàn)榉桥咛ミz傳因素、母體因素和胚胎異常因素。收集各組孕婦孕齡第16～28周的外周血，離心后收集血清標(biāo)本。

1.2儀器與試劑固相凝集法血小板血型抗體檢測(cè)試劑盒和指示細(xì)胞購(gòu)自長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司，TXL-4平板式血小板專(zhuān)用低速離心機(jī)購(gòu)自長(zhǎng)沙湘智離心機(jī)儀器有限公司。

1.3實(shí)驗(yàn)方法向反應(yīng)孔中滴加50 μl血小板懸液，輕搖反應(yīng)板約10 s。用平板式低速離心及以50×g離心5 min，使血小板固定在反應(yīng)孔底部。倒出反應(yīng)孔中液體，并用滴管滴加洗滌工作液清洗3次，最后一次洗滌后將反應(yīng)板置于吸水紙上吸干殘余液體。而后立即向每個(gè)反應(yīng)孔中滴加100 μl低離子強(qiáng)度溶液，并分別向反應(yīng)孔中加入50 μl患者血清樣本、陽(yáng)性對(duì)照及陰性對(duì)照。將反應(yīng)孔用封口膠封好，輕搖混勻后置于濕盒中37℃水浴孵育30 min。取出已孵育完畢的反應(yīng)板，棄去封口膠，洗滌反應(yīng)板5次。立即加入50 μl抗人IgG及50 μl指示紅細(xì)胞，輕輕振蕩混勻。200×g離心5 min。將檢測(cè)孔與對(duì)照孔的結(jié)果進(jìn)行比較，判讀并記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.4結(jié)果判定陽(yáng)性結(jié)果：指示紅細(xì)胞平鋪在反應(yīng)孔底部表面，若指示紅細(xì)胞只結(jié)合到部分孔底，并且結(jié)合區(qū)域比陰性對(duì)照大為弱陽(yáng)性，表明患者血清中含有血小板血型抗體。陰性結(jié)果：指示紅細(xì)胞在反應(yīng)孔底部中央形成紅細(xì)胞聚集，表明患者血清不含血小板血型抗體。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料相關(guān)性分析采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

初產(chǎn)婦、經(jīng)產(chǎn)婦及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清中分別檢測(cè)出血小板血型抗體陽(yáng)性例數(shù)、血小板血型抗體陽(yáng)性率的具體結(jié)果見(jiàn)表1。初產(chǎn)婦與經(jīng)產(chǎn)婦血小板血型抗體陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 4.711，P=0.030）；初產(chǎn)婦與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦血小板血型抗體陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 16.835，P＜0.01）。經(jīng)產(chǎn)婦與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦血小板血型抗體陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.500，P=0.034），見(jiàn)表1。

表1　3組孕婦血小板血型抗體陽(yáng)性率比較

3　討論

妊娠是一個(gè)復(fù)雜而又協(xié)調(diào)的過(guò)程，從免疫學(xué)角度看，正常妊娠過(guò)程中母體對(duì)胚胎半同種異體抗原表現(xiàn)為妊娠免疫耐受狀態(tài)。而自然流產(chǎn)則是多種原因?qū)е履柑ソ缑婷庖吣褪苁Ш獾慕Y(jié)果。目前認(rèn)為復(fù)發(fā)性流產(chǎn)與母胎界面免疫耐受失衡導(dǎo)致的母胎免疫排斥密切相關(guān)，除此之外母胎界面過(guò)強(qiáng)的炎癥反應(yīng)也是導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的始動(dòng)因素。CD4+T細(xì)胞在母胎界面免疫耐受中發(fā)揮著巨大的作用。既往研究認(rèn)為妊娠期母體對(duì)胎兒的半同種異體抗原的免疫耐受有賴(lài)于Th1/Th2細(xì)胞的免疫平衡，正常妊娠時(shí)Th1/Th2平衡偏向Th2，Th1處于抑制狀態(tài)，從而保護(hù)胎兒免受Th1細(xì)胞的攻擊。若Th1/Th2平衡偏向Th1，則將導(dǎo)致復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生。近年來(lái)，越來(lái)越多的研究表明血小板血型抗體與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)密切相關(guān)，其可能的機(jī)制為胎兒與母親血小板血型不合，當(dāng)胎盤(pán)破裂時(shí)，胎兒的血小板進(jìn)入母體血液，使母體產(chǎn)生血小板血型抗體，進(jìn)而導(dǎo)致流產(chǎn)。本研究與既往文獻(xiàn)相符，初產(chǎn)婦血清中血小板血型抗體陽(yáng)性率為5%左右［3］；且經(jīng)產(chǎn)婦血清中血小板血型抗體的陽(yáng)性率較初產(chǎn)婦顯著增高［2，4］。既往文獻(xiàn)顯示，血小板血型抗體主要成分為IgG抗體，其在妊娠第14周即可通過(guò)母胎免疫屏障，使胎兒體內(nèi)血小板破壞，進(jìn)而導(dǎo)致胎兒或新生兒血小板減少，引起早期流產(chǎn)和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)［5］。因此，在早期流產(chǎn)和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者孕14周后篩查血小板血型抗體就顯得尤為重要［6-7］。

本研究利用固相凝集法檢測(cè)了100例初產(chǎn)婦、100例經(jīng)產(chǎn)婦和100例復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清標(biāo)本中血小板血型抗體的表達(dá)情況，結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清標(biāo)本中的血小板血型抗體陽(yáng)性率顯著高于初產(chǎn)婦和（或）經(jīng)產(chǎn)婦，提示血小板血型抗體在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清中陽(yáng)性表達(dá)率的升高可能與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。值得注意的是，與既往文獻(xiàn)相似，本研究顯示經(jīng)產(chǎn)婦血清標(biāo)本中的血小板血型抗體陽(yáng)性表達(dá)率亦顯著高于初產(chǎn)婦，提示血小板血型抗體與妊娠次數(shù)密切相關(guān)［2］。

綜上所述，本研究檢測(cè)了初產(chǎn)婦、經(jīng)產(chǎn)婦和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)孕婦血清標(biāo)本中血小板血型抗體的表達(dá)，并進(jìn)一步卡方檢驗(yàn)分析了各組間差異的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果顯示，血小板血型抗體與妊娠次數(shù)和復(fù)發(fā)性流產(chǎn)密切相關(guān)。孕期篩查血小板血型抗體，對(duì)防治復(fù)發(fā)性流產(chǎn)有著重要的意義。

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（楊秀梅編輯）

Relationship between Platelet-specific Alloantibody and Gravidity or Recurrent Spontaneous Abortion

TANG Jie，ZHAO Yingying，WEI Wei，YAN Suwen，ZHANG Ning
（Department ofAristogenesis，No.202 Hospital of PLA，Shenyang 110003，China）

Objective：To investigate the expression of platelet-specific alloantibody in the sera of primipara，pluripara，and recurrent spontaneous abortion（RSA）patients，and analyze the relationship between platelet-specific alloantibody and gravidity or RSA.Methods：A total of 100 primipara，100 pluripara（gravidity≥2）and 100 RSA patients who

prenatal examination in department of aristogenesis，No.202 Hospital of PLA from Apr 2015 to Dec 2015 were recruited.The blood samples were collected during 16-28 weeks of pregnancy，and the expression of platelet-specific alloantibody was detected by solid-phase red cell adherence assay.Results：There were 5 positive platelet-specific alloantibody in primipara group，14 in red all pluripara group，and 26 in RSA group.Platelet-specific alloantibody was significantly associated with gravidity and the incidence of RSA（P＜0.05）by chi-square analysis.Conclusion：Screening the expression of platelet-specific alloantibody during pregnancy can provide evidence for the diagnosis and treatment of RSA.

platelet-specific alloantibody；recurrent spontaneous abortion；solid-phase red cell adherence assay；prenatal screen

R714.21

A

1008-2344（2016）06-0445-02

10.16753/j.cnki.1008-2344.2016.06.008

軍隊(duì)臨床高新技術(shù)重大項(xiàng)目（No.2010gxjs003）

湯潔（1964—），女（漢），副主任技師.研究方向：復(fù)發(fā)性流產(chǎn)免疫失衡的分子機(jī)制.E-mail:yicongtang@hotmail.com

2016-05-16