幽門螺桿菌感染與胃癌發(fā)生及預(yù)后的相關(guān)性研究*

帕提瑪·阿布力米提, 節(jié)陽華, 謝新梅, 張洪亮

新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院 腫瘤二科 (烏魯木齊 830000)

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·論 著·

幽門螺桿菌感染與胃癌發(fā)生及預(yù)后的相關(guān)性研究*

帕提瑪·阿布力米提, 節(jié)陽華, 謝新梅, 張洪亮△

新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院 腫瘤二科 (烏魯木齊 830000)

目的 探討幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)感染與胃癌發(fā)生及預(yù)后的關(guān)系。方法 選取胃癌組織標(biāo)本78例及其癌旁組織標(biāo)本26例，采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測胃癌組織和癌旁組織中Hp相對感染量，分析Hp相對感染量與胃癌患者臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。結(jié)果 胃癌組織Hp相對感染量明顯高于癌旁組織，且同一患者胃癌組織中Hp相對感染量亦高于其癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。胃癌組織中Hp相對感染量與患者臨床分期、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而與性別、年齡、組織學(xué)分型及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。生存分析結(jié)果顯示，患者生存率與胃癌組織中Hp相對感染量呈負(fù)相關(guān)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 Hp感染可能參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，可作為臨床上評估胃癌進(jìn)展和預(yù)后的潛在指標(biāo)。

幽門螺桿菌; 胃癌; 臨床病理特征; 預(yù)后

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2008年11月至2010年11月新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院病理科存檔的胃癌組織標(biāo)本78例，均經(jīng)石蠟包埋、10%甲醛固定，且術(shù)前未行任何放化療，其中男54例，女24例；年齡26～78歲，中位年齡61.5歲；根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(AJCC)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)[5]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅲ～Ⅳ期42例。同時選取上述標(biāo)本的癌旁組織26例，癌旁組織為切緣距癌灶邊緣>5 cm的非癌組織。每例標(biāo)本均由2位以上病理學(xué)專家診斷確診，且病理資料完整。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑和儀器 石蠟組織DNA提取試劑盒、實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)試劑盒及實(shí)時熒光定量PCR儀均由德國凱杰公司提供。

1.2.2 實(shí)時熒光定量PCR 首先進(jìn)行DNA提取，將石蠟組織切片，置入2 mL滅菌EP管后提取胃癌及癌旁組織標(biāo)本DNA，采用分光光度法測定DNA純度及質(zhì)量濃度，稀釋后進(jìn)行分裝，并置于-20 ℃冰箱保存。

HPYR1引物序列：

5′-AAT-TGGACAGCACCTTCTGG-3′

5′-GAGCCCTCAAAGAACTGCAC-3′；

內(nèi)參基因GAPDH引物序列：

(2)當(dāng)遇到鉆桿被卡住時，使用液壓絞車起拔鉆桿會有斷繩的危險(xiǎn)，由于鋼絲繩是一個彈性體，一旦出現(xiàn)斷繩，會對旁邊的操作者帶來極大的危險(xiǎn)。使用鋼球夾緊液壓起拔器時，鋼球只是鉆進(jìn)鉆桿，起拔力由液壓油缸提供，不存在危及操作者的危險(xiǎn)。

5′-GCTGGTG-CTCCAGGGGTCTTACT-3′

5′-TCAAC-GACCACTTTGTCAAGCTCA-3′

PCR產(chǎn)物大小分別為176 bp和121 bp，均由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。反應(yīng)體系：12.5 μL PCR預(yù)混液，7.5 μL去核糖核酸酶水(RNase-free water)，3.0 μL模板DNA(濃度≤10 μmol/L)，各1.0 μL的10 μmol引物，共25 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min、變性10 s，60 ℃退化延伸30 s，共40個循環(huán)?？瞻捉MHp相對感染量設(shè)為1，Hp陰性與陽性分別定為<1和>1，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。Hp相對感染量=2-△△Ct，△Ct=Ct目的-Ct內(nèi)參，△△Ct=△Ct目的-△Ct空白。

1.2.3 隨訪 以電話方式對患者進(jìn)行隨訪，若未取得聯(lián)系，可直接面訪或發(fā)郵件咨詢，隨訪截止至2015年11月。

1.3 觀察指標(biāo)

比較胃癌組織與癌旁組織Hp相對感染量，分析Hp相對感染量與胃癌患者臨床病理特征及預(yù)后的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 Hp相對感染量比較

胃癌組織Hp相對感染量為(8.69±6.48)，癌旁組織為(4.31±2.47)，二者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與癌旁組織相對應(yīng)的26例胃癌組織Hp相對感染量為(12.27±5.26)，明顯高于癌旁組織的Hp相對感染量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

2.2 Hp相對感染量與患者臨床病理特征的關(guān)系

胃癌組織中Hp相對感染量與患者臨床分期、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，而與性別、年齡、組織學(xué)分型及有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1 Hp相對感染量與患者臨床病理特征的關(guān)系±s)

2.3 Hp相對感染量與患者預(yù)后的關(guān)系

根據(jù)Hp相對感染量，將78例胃癌患者分為A組(Hp<1)19例、B組(1

圖1 不同Hp相對感染量患者生存曲線比較

3 討論

胃癌是消化系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，多由飲食不節(jié)、Hp感染、胃黏膜上皮異常增生等因素引起。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國每年有470萬人因胃癌而死亡，約占全部惡性腫瘤死亡的59.2%[4]。Hp作為微需氧菌，定植于胃黏膜表面和黏膜層之間，通過分泌尿素酶而使胃黏膜屏障受損。其空泡毒素基因亦可使離子通透性發(fā)生變化，從而導(dǎo)致細(xì)胞空泡變性，損傷胃黏膜，引發(fā)糜爛或潰瘍。60%的Hp通過產(chǎn)生細(xì)胞毒素相關(guān)基因A(Cag A)而發(fā)揮細(xì)胞毒效應(yīng)，介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)[6]。Jiménez-Soto等[7]研究發(fā)現(xiàn)，慢性Hp感染與胃癌發(fā)生密切相關(guān)，其中以Cag A+Hp感染最為常見。作為胃癌發(fā)生的啟動因子之一，Hp持續(xù)感染可能通過誘發(fā)慢性胃炎而損傷胃黏膜細(xì)胞DNA，為癌癥發(fā)生提供先決條件，與Asaka等[8]對腸型胃癌與Hp感染關(guān)系的推斷相似，即慢性Hp感染-慢性淺表性胃炎(CSG)-慢性萎縮性胃炎(CAG)-腸上皮化生-異型增生-胃癌。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織與癌旁組織Hp相對感染量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且同一患者胃癌組織中Hp相對感染量明顯高于其癌旁組織，表明Hp可能在胃癌的發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮一定作用。

近年來研究[9]發(fā)現(xiàn)，Hp感染與胃癌浸潤及轉(zhuǎn)移密切有關(guān)。Qiu等[10]通過探討Hp感染與胃癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)Hp感染與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，其中Hp陰性者多見于N2和N3分期，陽性者多見于N0和N1分期。Meimarakis等[11]認(rèn)為，胃癌患者中Hp陰性者多見于T3分期，陽性者多見于T1和T2分期，提示Hp可誘導(dǎo)胃癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移。吳軍等[12]通過探討胃癌組織Hp感染與低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的相關(guān)性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Hp感染與胃癌組織有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤深度有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中Hp相對感染量與患者臨床分期、浸潤深度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，進(jìn)一步證實(shí)Hp參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移。

目前，關(guān)于Hp感染與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系尚存在一定爭議。與Hp陰性者相比，Hp陽性的胃癌患者預(yù)后更好[13]。Wang等[14]一項(xiàng)Meta分析表明，Hp感染在胃癌預(yù)后中起保護(hù)作用。Choi等[15]通過探討晚期或轉(zhuǎn)移胃癌患者Hp感染與化療療效的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)與Hp陰性者相比，Hp陽性者對化療更加敏感，且預(yù)后較好。Kim等[16]通過嚴(yán)格限定Hp感染狀態(tài)來評估Hp陰性胃癌患者的預(yù)后，發(fā)現(xiàn)Hp感染狀態(tài)并非是胃癌患者生存的預(yù)后因素。本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中Hp相對感染量與患者生存率呈明顯負(fù)相關(guān)，說明Hp感染量越多，患者預(yù)后越差。導(dǎo)致上述結(jié)果差異的原因可能與患者年齡、術(shù)前是否行Hp根治、臨床分期及治療療效有關(guān)。

綜上所述，Hp感染可能參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移，臨床上可作為評估胃癌進(jìn)展和預(yù)后的潛在指標(biāo)。

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The Correlation of Helicobacter Pylori Infection with the Occurrence and Prognosis of Gastric Cancer

Patima·Abulimiti, Jie Yanghua, Xie Xinmei, Zhang Hongliang△.

Second Department of Oncology, The Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine of Xinjiang Medical University, Urumchi 830000, China

Objective To explore the correlation of helicobacter pylori (Hp) infection with the occurrence and prognosis of gastric cancer. Methods 78 specimens of gastric cancer tissues and 26 specimens of paracarcinoma tissues were selected and the real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) was adopted to detect the Hp relative infection rate of those issue specimens. Then the analyses were made to explore the correlation of the Hp relative infection rate with the clinicopathologic features and prognosis of gastric cancer respectively. Results The Hp relative infection rate in gastric cancer tissues was significantly higher than that in paracarcinoma tissues, and it was also higher than that in paracarcinoma tissues in each individual patient (P<0.01). Meanwhile, the Hp relative infection rate in gastric cancer was significantly correlated with clinical staging, invasive depth and lymphatic metastasis respectively (P<0.01), but it was not significantly correlated with gender, age, histological classification, and distant metastasis respectively (P>0.05). The survival analysis results revealed that the survival rate of patients was negatively correlated with the Hp relative infection rate with statistical significance (P<0.05). Conclusion The Hp infection is probably involved in the occurrence, development and metastasis of gastric cancer, and it can be applied clinically as the potential indexes for assessing the progression and prognosis of gastric cancer.

Helicobacter pylori; Gastric cancer; Clinicopathological feature; Prognosis

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161027.1701.042.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.05.006

中國高校醫(yī)學(xué)期刊臨床專項(xiàng)資金(No:11525798)

R735.2

A

△通信作者：張洪亮，E-mail: zhanghongliang@csco.cn