大株紅景天對百草枯中毒鼠肺組織NF-kβ表達(dá)的影響

張 濤 曲 艷 王 曄

昆明醫(yī)科大學(xué)附屬延安醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科，云南 昆明 650051

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大株紅景天對百草枯中毒鼠肺組織NF-kβ表達(dá)的影響

張 濤 曲 艷*王 曄

昆明醫(yī)科大學(xué)附屬延安醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科，云南 昆明 650051

目的:探討大株紅景天(Rosin)對百草枯中毒鼠肺核結(jié)合因子-kβ(NF-kβ) 表達(dá)的影響。方法:120只SD雄性大鼠分為正常對照組(C)120只、百草枯中毒組(PQ)50只及大株紅景天組(Rosin)50只。PQ組和Rosin組一次性灌胃PQ25mg/kg染毒，C組予等體積生理鹽水灌胃。其中Rosin組于染毒前15min以Rosin 10mg/kg靜脈注射保護(hù)，以后每日1次給藥直至處死前；PQ組、C組分別在同時(shí)間點(diǎn)予與等體積生理鹽水。觀察各組大鼠在中毒后12h、1d、3d、5d、7d肺組織病理改變，檢測肺泡灌洗液中NF-kβp65表達(dá)。結(jié)果:C組肺組織結(jié)構(gòu)基本完整，PQ組炎性細(xì)胞浸潤明顯增多，肺組織損傷程度加重，Rosin組肺組織損傷程度較輕。PQ組NF-kβp65表達(dá)較C組顯著增加，Rosin組降低。結(jié)論:NF-kβ在百草枯所致大鼠肺損傷中起重要作用，大株紅景天降低肺組織NF-kβ水平，減輕百草枯中毒大鼠的肺組織損傷。

百草枯；核結(jié)合因子-kβ；大株紅景天

百草枯(Paraquat，PQ)是目前廣泛使用的有機(jī)雜環(huán)類接觸性除草劑，人類中毒后可引起多臟器功能損害，其中以急性肺損傷(Acute Lung Injury，ALI)表現(xiàn)最為突出[1]。近年來對百草枯中毒機(jī)制已進(jìn)行了廣泛的研究，但是對于百草枯中毒所致急性肺損傷的預(yù)防和治療，仍未找到行之有效的方法。本實(shí)驗(yàn)通過建立急性百草枯中毒大鼠模型，研究大株紅景天(Rosin)對急性百草枯中毒大鼠 NF-kβ表達(dá)的影響，為臨床治療急性百草枯中毒尋求有效藥物依據(jù)。

1 材料及試劑

1.1 動物 清潔級SD雄性大鼠120只，體重200～250g，昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。

1.2 材料 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的百草枯溶液(山東三元工貿(mào)有限公司)，試驗(yàn)前將質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20%的PQ稀釋為1%。大株紅景天注射液(5mL/支，云南聯(lián)頓醫(yī)藥有限公司)。NF-kβ試劑盒(大連寶生物)，Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(凱基)。

2 方法

2.1 分組及給藥 120只SD雄性鼠隨機(jī)分成3組：①PQ組：50只予質(zhì)量分?jǐn)?shù)為l%的PQ(25mg/kg)一次性灌胃染毒造模。②Rosin組：50只靜脈注射Rosin 10mg/kg，15min后予質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%的PQ(25mg/kg)一次性灌胃染毒造模。③正常對照組(C組)：20只給予相應(yīng)體積的生理鹽水灌胃造模。PQ組和C組分別在同時(shí)間點(diǎn)予與等體積生理鹽水靜脈注射。

2.2 HE染色肺組織 分別在實(shí)驗(yàn)開始后第12h、1d、3d、5d及7d處理大鼠，肺組織取材后，常規(guī)石蠟切片，HE染色。

2.3 采用ELISA方法檢測肺泡灌洗液中PMN的NF-kβ p65表達(dá)：

2.4 NF-kβp65表達(dá)方法 采用SPSS13.5統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以表示，方差齊時(shí)采用LSD-t檢驗(yàn)，方差不齊時(shí)采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 肺組織病理改變 C組大鼠的肺組織結(jié)構(gòu)完整，無炎癥細(xì)胞滲出。PQ組，肺間隔增厚，肺泡壁斷裂，大量炎癥細(xì)胞浸潤，且隨時(shí)間的延長炎性細(xì)胞浸潤增多，肺組織損傷程度加重。Rosin組肺組織有同PQ組相似的病理表現(xiàn)，但對應(yīng)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，肺組織損傷程度較輕。詳見圖1、圖2、圖3。

3.2 肺泡灌洗液中NF-kβp65表達(dá) 由表1可知，紅景天可改善百草枯中毒肺泡灌洗液在PMN的kβp65表達(dá)。

表1 肺泡灌洗液中NF-kβp65表達(dá)

組別時(shí)間點(diǎn)例數(shù)NF-κβ陽性率/%C組12h109.05±1.951d107.98±1.563d108.50±2.33PQ組12h1016.92±4.53#1d1021.55±5.78#3d1030.43±7.15#5d1015.46±3.67#7d1011.84±2.87Rosin組12h1013.14±3.10#△1d1019.55±4.54#△3d1024.62±6.45#△5d1012.83±2.72#△7d108.36±2.45

注：與正常組相比，#P<0.05；與PQ組相比，△P<0.05。

4 討論

目前百草枯中毒引起肺損傷認(rèn)為可能的發(fā)病機(jī)制有百草枯在肺內(nèi)的聚集、氧自由基的改變、脂質(zhì)過氧化致線粒體損傷、肺組織細(xì)胞內(nèi)鈣含量失衡、炎性細(xì)胞和免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子和趨化因子、DNA損傷等[2]。百草枯進(jìn)入機(jī)體后，造成機(jī)體一系列應(yīng)激反應(yīng)，炎癥介質(zhì)等多種生物學(xué)效應(yīng)因子被激活[3]。這些炎癥介質(zhì)在PQ中毒急性肺損傷及肺纖維化發(fā)生發(fā)展過程中起了重要作用[4]。許多致肺纖維化因子基因的啟動子區(qū)域也含有NF-κβ的固定的核苷酸κβ序列[5]，NF-κβ作為調(diào)節(jié)細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的樞紐型環(huán)節(jié)，它的活化可啟動眾多炎性細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，進(jìn)而形成“炎癥級聯(lián)反應(yīng)”啟動肺部炎癥，并通過正反饋的級聯(lián)放大效應(yīng)促進(jìn)肺部炎癥的發(fā)展[6]。在正常的生理狀態(tài)下，肺組織內(nèi)活性氧自由基的產(chǎn)生與清除保持動態(tài)的平衡[6]。有研究結(jié)果表明活性氧在細(xì)胞增殖、分化和凋亡調(diào)控中起到一定的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用[7-8]。百草枯作用于細(xì)胞內(nèi)的氧化還原反應(yīng)，生成大量氧自由基，通過肺泡Ⅱ型細(xì)胞的能量依賴性多胺攝取途徑導(dǎo)致肺損傷[9]。

中藥紅景天含有紅景天苷、紅景天素、多糖、18種氨基酸等有效成分。大株紅景天含有效成分較多，Rosin 是一種苯乙醇類化合物，是其活性成分之一。研究發(fā)現(xiàn)Rosin在肺、心、脾、腦組織中均有不同程度的分布，其中以肺分布較多，能清除自由基和防止自由基的形成，具有抗炎、抗缺 氧、抗腫瘤、抗衰老及抗肺纖維化等作用[10-12]。

本次研究結(jié)果表明，PQ組NF-κβp65水平明顯增加，且隨時(shí)間的延長炎性細(xì)胞浸潤增多，肺組織損傷程度加重，Rosin組鼠NF-κβp65表達(dá)降低，且隨時(shí)間的延長肺損傷化程度減輕。提示NF-κβp65可能參與PQ中毒急性肺損傷[13]，并可能進(jìn)而影響后期肺纖維化的形成[14]；紅景天可通過抑制細(xì)胞因子(肺核因子-κβ)表達(dá)及清除氧自由基的方式，對百草枯中毒引起肺損傷起到保護(hù)作用。

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(編輯：梁志慶)

Expression of Nuclear Factor Kappa β and Interleukin-1β in Lung Tissue of Paraquat Poisoned Rats and the Protection of Rosin

ZHANG Tao QU Yan*WANG Ye

Dept.of Emergency,Affiliated Yan’an,Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650051,China

Objective To investigate the expression of nuclear factor kappa β(NF-kβ)in lung tissue of acute paraquat poisoned rats and the protection of Rosin. Methods 120 male rats were randomly divided into 3 groups:normal control group(C20 rats),paraquat poisoning group(PQ50rats)and Rosin intervention group(Rosin 50rats).The PQ and Rosin group rats were given paraquat by gastric perfusion(25mg/kg); The C group rats were given saline by gastric perfusion．The rats in Rosin group were protected by intravenous injections of penis with Rosin (10mg/kg)15min before exposure of paraquat，once a day until killed. The PQ and C group rats were given saline. Histological changes of lung tissues were observed at different time of 12h、1d、3d 、5d and 7d after poisoned to determin expression of NF-kβP65.Results The degree lung injury in PQ group was higher than that in C group. But in Rosin group the degree of lung injury was lighter．Conclusions The content of NF-kβp65 in PQ group was higher than that in C group and that were lower in Rosin group.Conclusion NF-kβp65 could play an important role in lung injury of poisoned rats．Rosin may inhibit the expression of and NF-kβp65 and alleviate lung injury in acute paraquat poisoned rats．

Paraquat；NF-kappaB；Rosin

2016-10-09

云南省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究昆明醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合專項(xiàng)項(xiàng)目(2013FB190)

張濤(1973-)，男，漢族，本科，副主任醫(yī)師，研究方向?yàn)楹粑匕Y。E-mail:1261946839@qq.com

曲艷(1964-),女，漢族，本科，主任醫(yī)師, 研究方向?yàn)榧蔽Ｖ匕Y、中毒急救。E-mail:quyan1964@163.com

R285.5

A

1007-8517(2016)21-0032-03