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    色素上皮衍生因子在腎癌組織中的表達及臨床意義

    2016-12-05 05:05:30李龔龍鄭艷麗喬慶東徐萬海
    腫瘤基礎與臨床 2016年5期
    關鍵詞:腎癌免疫組化腎臟

    李龔龍,鄭艷麗,喬慶東,徐萬海

    (1.新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院泌尿外一科,河南 新鄉(xiāng) 453000;2.新鄉(xiāng)醫(yī)學院外國語言學系,河南 新鄉(xiāng) 453003;3. 哈爾濱醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院泌尿外科,黑龍江 哈爾濱 150000)

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    色素上皮衍生因子在腎癌組織中的表達及臨床意義

    李龔龍1,鄭艷麗2,喬慶東1,徐萬海3

    (1.新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院泌尿外一科,河南 新鄉(xiāng) 453000;2.新鄉(xiāng)醫(yī)學院外國語言學系,河南 新鄉(xiāng) 453003;3. 哈爾濱醫(yī)科大學第四附屬醫(yī)院泌尿外科,黑龍江 哈爾濱 150000)

    目的 探討腎癌組織中色素上皮衍生因子(PEDF)的表達及臨床意義。方法 應用免疫組化方法檢測46例腎癌及10例癌旁正常腎臟組織中PEDF蛋白的表達情況,分析PEDF表達與臨床病理參數(shù)的關系。結果 46例腎癌組織標本中,PEDF陽性表達率為23.9%,明顯低于癌旁正常腎臟組織的100.0%,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。在腎癌組織中,PEDF蛋白的表達與浸潤深度及病理學分期有關(P<0.05)。結論 腎癌組織中PEDF蛋白的陽性表達降低,對腎癌預后的判斷有一定的參考價值。

    腎癌;色素上皮衍生因子;免疫組化

    腫瘤的生長、轉移和復發(fā)依賴于新生血管的形成。腫瘤的血管生成受到包括血管內皮生長因子vascular endothelial growth factor,VEGF)在內的血管生成刺激因子和色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)在內的血管生成抑制因子的嚴格調控。PEDF是目前已知最強的內源性血管生成抑制因子,PEDF在一系列腫瘤中都存在表達下調的現(xiàn)象,但PEDF在腎癌組織中的表達情況,國內尚未見報道。本研究旨在應用免疫組化方法檢測腎癌組織中PEDF蛋白的表達,揭示其表達與臨床病理參數(shù)的相關性,以期為腎癌患者的預后判斷和臨床治療提供理論依據(jù)。

    1 資料和方法

    1.1 一般資料 入組2006年1月至2009年9月哈爾濱醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院手術切除的腎癌組織標本46例,男33例,女13例;年齡42~82歲,中位年齡58.9歲;病理證實均為腎癌,其中腎透明細胞癌39例,嗜色細胞癌4例,嫌色細胞癌3例;參照2002年AJCC推薦TNM分期標準[1]:Ⅰ期18例,Ⅱ期7例,Ⅲ期11例,Ⅳ期10例。對照組為10例癌旁正常腎組織。1.2 主要試劑 鼠抗人PEDF多克隆抗體(美國Chemicon公司,工作濃度1:200);兩步法免疫組化試劑山羊抗鼠IgG抗體(北京中杉金橋生物技術有限公司,工作濃度1:500);濃縮型DAB試劑盒(北京中杉金橋生物技術有限公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 染色方法 將腎癌組織和正常腎臟組織切片均經過質量分數(shù)4%中性甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋、切片。切片按常規(guī)依次二甲苯脫蠟,體積分數(shù)100%~80%梯度酒精水化;體積分數(shù)3% H2O2室溫孵育10 min,加入修復液,高壓鍋高壓2 min,PBS沖洗3次,每次5 min,加入鼠抗人PEDF多克隆抗體,4 ℃冰箱過夜,PBS沖洗3次,每次5 min,DAB顯色,自來水沖洗10 min,蘇木素復染,自來水再次沖洗10 min,蒸餾水洗滌,體積分數(shù)80%~100%梯度酒精脫水,二甲苯透明,樹膠封片,烤片。

    1.3.2 結果判定 以PEDF陽性細胞所占百分比為指標,PEDF陽性表達為在細胞漿內充滿棕黃色顆粒。PEDF染色結果判定:陽性細胞百分比<5%為0分、5%~<25%為1分、25%~<50%為2分、≥50%為3分,0、1分為陰性,2、3分為陽性。

    1.3.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 19.0進行統(tǒng)計學分析,計數(shù)資料比較應用χ2檢驗或Fisher精確概率法,檢驗水準α=0.05。

    2 結果

    2.1 PEDF蛋白在不同腎臟組織中的表達 正常腎臟組織和腎癌組織中PEDF蛋白陽性表達為細胞漿內著色。根據(jù)染色結果,46例腎癌組織標本中PEDF陽性表達率為23.9%(11/46),明顯低于癌旁正常腎臟組織的100.0%(10/10),差異有統(tǒng)計學意義(χ2=20.290,P<0.05)。見圖1~3。

    圖1 腎癌組織中PEDF蛋白的陽性表達(SP,×200)

    圖2 正常腎臟組織中PEDF蛋白的陽性表達(SP,×200)

    圖3 腎癌組織中PEDF蛋白的陰性表達(×200)

    2.2 PEDF蛋白表達與臨床病理參數(shù)的關系 在腎癌組織中,PEDF蛋白的表達與患者的年齡、性別、淋巴結浸潤、靜脈浸潤、腫瘤大小和遠處轉移無關(P>0.05),而與浸潤深度及病理學分期有關(P<0.05)。見表1。

    表1 PEDF蛋白表達與腎癌臨床病理參數(shù)的關系

    3 討論

    腎癌是最常見泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤之一,占成人惡性腫瘤的2%~3%[2]。外科手術是腎癌治療的首選方法,但術后復發(fā)和遠處轉移是影響腎癌療效的關鍵因素,早期腎癌患者在根治性腎切除術后約30%將發(fā)生復發(fā)和遠處轉移[3]。腎癌的復發(fā)、遠處轉移與腎癌細胞向靜脈、淋巴結和鄰近器官的侵襲有關。新生血管形成是腫瘤生長的必要條件,同時也為腫瘤的侵襲、轉移和復發(fā)提供了可能[4]。通過抑制腫瘤新生血管形成,切斷腫瘤的營養(yǎng)供應和遷移通道,從而使腫瘤處于“休眠”狀態(tài),不對人體造成危害,這是目前腫瘤治療的新策略。PEDF最早是由胎兒視網(wǎng)膜色素上皮細胞的培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的[5],是維持角膜無血管狀態(tài)的重要因子。PEDF是一種多功能蛋白,能夠促進腫瘤細胞分化成熟、誘導腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤細胞新生血管形成。PEDF是目前所知的生物學活性最強的內源性血管生成抑制因子,并且其只抑制新生血管的生成,對原來的血管結構不產生影響[6-7],是腫瘤靶向治療的理想生物因子。

    研究表明PEDF在一系列的腫瘤疾病中都存在表達下調的現(xiàn)象,如胰腺癌[8]、乳腺癌[9]、神經膠質瘤[10]、卵巢癌[11]等,但PEDF在腎癌組織中的表達情況,國內還未見報道。本研究應用免疫組化方法對46例腎癌及10例癌旁正常腎臟組織中PEDF蛋白的表達情況進行檢測。結果顯示:46例腎癌組織標本中PEDF陽性表達率為23.9%,明顯低于癌旁正常腎臟組織的100.0%,說明PEDF表達的缺失與腎癌的發(fā)生發(fā)展有著緊密的聯(lián)系,與相關報道一致。

    研究證明,胰腺癌[12]、神經膠質瘤[10]、非小細胞肺癌[13]、乳腺癌[9]中PEDF在低分級腫瘤組織中表達明顯高于高分級腫瘤組織,且PEDF表達水平與患者腫瘤復發(fā)和轉移明確相關。本研究的另一個目的是了解PEDF表達與腎癌患者臨床預后的關系。46例腎癌組織標本中PEDF蛋白表達與患者的年齡、性別、淋巴結浸潤、腫瘤大小、遠處轉移無關,而與腎周筋膜浸潤、臨床分期等多種臨床病理因素密切相關。T1、T2期與T3、T4相比,PEDF陽性率高于后者,Ⅰ~Ⅱ期患者PEDF陽性率高于Ⅲ~Ⅳ期患者。由此可以看出,PEDF表達的下降與腎癌患者臨床分期和預后相關,為腎癌臨床診斷和判斷患者預后提供了新的指標。PEDF蛋白表達與遠處轉移無關,這可能因為樣本量較小,只有1例遠處轉移患者,存在一定的誤差。

    綜上所述,PEDF蛋白的表達與腎癌的發(fā)病和預后有關。但由于樣本量較小,研究有一定的局限性。

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    Expression of Pigment Epithelium-derived Factor in the Renal Cell Carcinoma Tissues

    Li Gonglong1,Zheng Yanli2,Qiao Qingdong1,Xu Wanhai3

    (1.DepartmentofUrinarySurgery,XinxiangCentralHospital,Xinxiang453000,China;2.DepartmentofForeignLanguages,XinxiangMedicalCollege,Xinxiang453003,China;3.DepartmentofUrinarySurgery,theForthAffiliatedHospital,HarbinMedicalUniversity,Harbin150000,China)

    Objective To research the expression and clinical significance of pigment epithelium-derived factor (PEDF) protein in renal cell carcinoma tissues.Methods Immunohistochemistry methods was used to detect the expression of PEDF protein in the 46 cases of renal cell carcinoma tissues and 10 cases of normal kidney tissues, and then the relationship between expression of PEDF protein and pathological parameters were analyzed.Results The positive rate of PEDF expression was 23.9% in the renal cell carcinoma tissues, and was 100.0% in the normal kidney tissues, respectively (P<0.05). PEDF expression was related to tumor depth of invasion, venous invasion and clinical stage (P<0.05).Conclusion Reduction of the PEDF expression level in the renal cell carcinoma tissues, has a vital clinical significance to become judges the patient prognosis.

    renal cell carcinoma; pigment epithelium-derived factor; immunohistochemistry

    李龔龍(1982-),男,碩士,主治醫(yī)師,主要從事泌尿外科工作。E-mail:519105523@qq.com

    徐萬海(1974-),男,博士,主任醫(yī)師,博士生導師,主要從事泌尿生殖系腫瘤及腎上腺腫瘤的臨床與基礎研究。

    10.3969/j.issn.1673-5412.2016.05.003

    R737.11;R730.23

    A

    1673-5412(2016)05-0377-03

    2016-05-22)

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