黔西南州引種金銀花中藥質(zhì)量檢測研究

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(1.黔西南州食品藥品檢驗檢測中心， 貴州 興義 562400； 2.黔西南州天地藥業(yè)貿(mào)易有限公司， 貴州 興義 562400)

黔西南州引種金銀花中藥質(zhì)量檢測研究

范紅梅1，劉志海1，金昭1，趙列香2

(1.黔西南州食品藥品檢驗檢測中心， 貴州 興義 562400； 2.黔西南州天地藥業(yè)貿(mào)易有限公司， 貴州 興義 562400)

以3年不同批次的加工藥材為試驗材料，采用HPLC法，對其綠原酸和木犀草苷的含量進行了測定，旨在評估黔西南州引種金銀花的中藥材質(zhì)量，為其質(zhì)量檢測及引種栽培提供科學依據(jù)。結(jié)果表明，檢測色譜系統(tǒng)的適用性優(yōu)良，檢測條件的精密度和穩(wěn)定性好；3年不同批次的引種金銀花中綠原酸的含量為2.4%～4.2%，木犀草苷含量為0.067%～0.137%，均明顯高于藥典規(guī)定含量，質(zhì)量優(yōu)良。

HPLC法； 綠原酸； 木犀草苷； 金銀花

金銀花又名忍冬、雙花等，為忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾或帶初開的花，傳統(tǒng)以花蕾入藥，是常用大宗中藥材，主產(chǎn)于山東、河南、湖北等地。金銀花藥用價值高，耐旱、耐寒、抗鹽堿、抗風沙，是防風固沙、保持水土、綠化荒山的良好生態(tài)植物[1]。金銀花味甘，性寒，歸肺、心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、疏散風熱之功效，用于治療癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風熱感冒、溫病發(fā)熱等癥[2]?，F(xiàn)代藥理及臨床研究表明，金銀花對于多種病菌有較強的抗菌作用和較好的治療效果。有關(guān)金銀花及同屬植物的化學成分研究有很多報道，從金銀花中分離鑒定的化學成分類型較多，主要有揮發(fā)油類[3-5]、有機酸類[6-9]、黃酮類[10]和環(huán)烯醚萜類[11-12]等。貴州省黔西南州在“石漠化”攻堅扶貧過程中，成功總結(jié)出了中海拔地區(qū)的金銀花種植模式，據(jù)不完全統(tǒng)計，截止2014年全州種植面積7 330 hm2左右。近年來，隨著產(chǎn)業(yè)發(fā)展及藥用習慣的規(guī)范，黔西南州金銀花引種試種栽培也時有發(fā)生。2012年黔西南州天地藥業(yè)貿(mào)易有限公司從山東省平邑引種金銀花(忍冬)到黔西南州進行種植試驗。本研究旨在跟蹤和檢測引種金銀花質(zhì)量，以期對金銀花的引種和技術(shù)檢測提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

供試材料為黔西南州引種忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的加工藥材，由黔西南州天地藥業(yè)貿(mào)易有限公司提供。

1.2 試藥與儀器

綠原酸(含量96.6%)，木犀草苷(含量94.0%)，均購自中國食品藥品檢定研究院。乙腈(色譜純)、水(超純水)、磷酸、乙醇、冰醋酸、甲醇均為為分析純。Waters e 2695型高效液相色譜儀，Empower色譜數(shù)據(jù)工作站，電子天平，電熱恒溫干燥箱。

1.3 方 法

1.3.1 綠原酸含量測定

1) 色譜條件：Gemini-NX 5 u C18110 A(250×4.6 mm)色譜柱，以乙腈∶0.4%磷酸溶液(13∶87)為流動相，柱溫30 ℃；流速1 mL/min；進樣量10μL；檢測波長327 nm。

2) 對照品溶液的制備：精密稱取綠原酸對照品適量，加50%甲醇制成每1 mL含45.2μg的溶液，上機測定。

3) 供試品溶液的制備：取金銀花粉末(過4號篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入 50%甲醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35 kHz)30 min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻、濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，上機測定。

4) 線性關(guān)系的考察：分別吸取綠原酸對照品溶液2，5，10，20，25μL注入液相色譜儀，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，以對照品進樣量為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)，計算回歸方程。

5) 精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，記錄綠原酸峰面積。

6) 重復性試驗：精密稱取同一批金銀花粉末6份，按1.3.1 3)項下方法操作，制備供試品溶液，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，計算其含量。

7) 穩(wěn)定性考察：取同一批金銀花供試品溶液，在0，2，4，8，12，24 h，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，記錄綠原酸峰面積。

8) 加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品金銀花藥材6份，每份約0.25 g，加入同等量的綠原酸對照品，按1.3.1 3)項方法操作，制備供試品溶液，按1.3.1 1)項下進行色譜分析，記錄峰面積，計算回收率。

1.3.2 木犀草苷含量測定

1) 色譜條件：采用Agilent ZORBAX SB-phenyl(4.6×250 mm)色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.5%冰醋酸溶液為流動相B，0～15 min流動相A(10%→20%)，流動相B(90%→80% )；15～30 min流動相A(20%)，流動相B(20%)，30～40 min流動相A(20%→30%)，流動相B(80%→70%)進行梯度洗脫，柱溫30 ℃；流速1 mL/min；進樣量10μL，檢測波長350 nm。

2) 對照品溶液的制備：精密稱取木犀草苷對照品適量，加70%乙醇制成每1 mL含35.5μg的溶液，上機測定。

3) 供試品溶液的制備：取金銀花粉末(過4號篩)約 2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率35 kHz)1 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾10 mL，回收溶劑至干，殘渣用70%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，上機測定。

4) 線性關(guān)系的考察：分別吸取木犀草苷對照品溶液2，5，10，20，25μL注入液相色譜儀，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，以對照品進樣量為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)，計算回歸方程。

5) 精密度試驗：精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣6次，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，記錄木犀草苷峰面積。

6) 重復性試驗：精密稱取同一批金銀花粉末6份，按1.3.2 3)項方法操作，制備供試品溶液，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，計算其含量。

7) 穩(wěn)定性考察：取同一批金銀花供試品溶液，在0，2，4，8，12，24 h，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，記錄木犀草苷峰面積。

8) 加樣回收試驗：精密稱取已知含量的樣品金銀花藥材6份，每份約1 g，加入同等量的木犀草苷對照品，按1.3.2 3)項方法操作，制備供試品溶液，按1.3.2 1)項下進行色譜分析，記錄峰面積，計算回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 系統(tǒng)適用性、精密度與穩(wěn)定性

按照1.3.1和1.3.2的操作，綠原酸和木犀草苷的色譜分離較好，峰形對稱(圖1～圖4)，不受試劑或樣品中其他物質(zhì)干擾，表明這2種中物質(zhì)的檢測色譜條件可行。綠原酸標準曲線為y=33 464x-5 742，R2=0.999 9；精密度檢測RSD值為0.7%；重復性檢測RSD值為1.1%；穩(wěn)定性檢測的RSD值為1.5%，添加回收率為95.1%。木犀草苷標準曲線為y=30 506x+2 107，R2=0.999 8；精密度檢測RSD值為0.4%；重復性檢測RSD值為1.7%；穩(wěn)定性檢測的RSD值為1.1%，添加回收率為92.1%。說明檢測系統(tǒng)精密度和穩(wěn)定性良好。

2.2 供試樣品的藥用質(zhì)量

3年內(nèi)不同批次樣品綠原酸的含量在2.4%～4.2%之間，是藥典規(guī)定含量的1.6～2.8倍；木樨草苷含量變化為0.067%～0.137%，是藥典規(guī)定含量的1.34～2.74倍，說明貴州黔西南州引種金銀花的中藥材質(zhì)量均已達到要求且質(zhì)量優(yōu)良。

圖1 綠原酸對照品色譜圖

圖3 木犀草苷對照品色譜圖

圖4 供試品木犀草苷色譜圖

3 討 論

3年的跟蹤檢測結(jié)果(表1)表明，黔西南州引種試驗所產(chǎn)金銀花主要成分綠原酸和木犀草苷的含量均符合《中國藥典》的要求(2015年版規(guī)定(綠原酸含量不得少于1.5%；木犀草苷含量不得少于0.050%)[13]，黔西南州引種金銀花試驗基本成功，從樣品含量結(jié)果可以看出，綠原酸含量雖有所降低，但遠高于《中國藥典》之規(guī)定，木犀草苷含量從引種第1年的0.137%(最高)到第3年的0.067%，逐年下降，是否由于黔西南州氣候、土壤等環(huán)境因素不利于有效成分木犀草苷的富集，還有待進一步考察研究。

表1 不同批次供試樣品的綠原酸和木犀草苷含量

年份批號 藥典規(guī)定含量① 供試樣品量 綠原酸(%)木犀草苷(%)綠原酸(%)木犀草苷(%)20132013064．20．1312013073．90．1372014201404≥1．5≥0．052．40．0952014052．70．10320152015053．00．067201505013．10．0832015062．70．072

注：“①”引自2015版《中華人民共和國藥典》。

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The Detection of Medical Quality for Honeysuckle Introduced in Southwest of Guizhou

FANHongmei1，LIUZhihai1，JINZhao1，ZHAOLiexiang2

2016-07-26

范紅梅(1964—)，女，貴州盤縣人；本科學士學位，副主任藥師，主要從事藥品檢驗、化學藥及民族藥研究工作。

10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.12.054

S 567.1+9

A

1001-4705(2016)-0054-03