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    美國(guó)黑莓組織培養(yǎng)一次成苗研究

    2016-12-04 03:06:08貴州省植物園貴陽(yáng)550004
    種子 2016年10期
    關(guān)鍵詞:成苗黑莓莖段

    , , , (貴州省植物園, 貴陽(yáng) 550004)

    美國(guó)黑莓組織培養(yǎng)一次成苗研究

    文光琴,張群英,廖優(yōu)江,聶飛
    (貴州省植物園, 貴陽(yáng) 550004)

    以美國(guó)黑莓納瓦好(Navaho)帶芽莖段為外植體,研究一次成苗的最佳程序。結(jié)果表明,在不添加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的MS培養(yǎng)基上,初代培養(yǎng)可使外植體萌發(fā)、伸長(zhǎng)(生長(zhǎng))形成嫩枝,將嫩枝剪成帶1~2枚葉片的莖段(以下簡(jiǎn)稱插條),再扦插到MS培養(yǎng)基上,如此多次繼代后,在MS培養(yǎng)基上會(huì)有部分生根,將生根的完整植株移栽。未生根的無(wú)根苗如上述再扦插到MS培養(yǎng)基上,完成一次成苗。也可以把一部份插條扦插到1/2 MS+6-BA 0.01 mg/L+IBA 0.3 mg/L的生根培養(yǎng)基上同時(shí)完成繼代、伸長(zhǎng),生根,生根率可達(dá)100%,另一部份出瓶移栽,也可將無(wú)根嫩莖用IBA 0.1%快浸處理后扦插在苔蘚中,生根率達(dá)90%以上。將生根植株移栽到森林腐植土上,成苗率達(dá)100%。

    黑莓; 短枝扦插; 一次成苗

    美國(guó)黑莓納瓦好(Navaho)屬薔薇科(Rosaceae)懸構(gòu)子屬(Rubus)多年生的落葉灌木果樹(shù),黑莓果實(shí)為聚合漿果,富含多種維生素和礦物質(zhì),在醫(yī)藥、保健、化妝品等方面有特殊用途,1993年被聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)稱為“第三代新興水果”[1]。黑莓納瓦好生長(zhǎng)快、分枝多,管理粗放,既可作庭園綠化樹(shù)種,又可廣泛用于沙荒地改造,具有很高的生態(tài)效益[2]。1994年江蘇省中國(guó)科學(xué)院植物研究所首次從美國(guó)農(nóng)業(yè)部柯互利斯種質(zhì)保存中心引進(jìn)納瓦好,2000年,貴州省麻江縣引種栽培成功,2006年江蘇省農(nóng)林廳組織的專家鑒定,美國(guó)黑莓納瓦好果實(shí)酸甜爽口,鮮食加工皆宜,耐旱,耐-15 ℃低溫,能安全越冬,適宜栽培地域廣泛。目前,黑莓納瓦好的繁殖主要還是以扦插繁殖為主,有關(guān)黑莓組織培養(yǎng)報(bào)道甚少[3-10],一次成苗更是未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)主要研究如何縮短納瓦好培育時(shí)間、增加繁殖系數(shù)、提高生根率、移栽成苗率,以達(dá)到既降低育苗成本,又能一次成苗的目的,旨在為納瓦好新品種種源快速繁殖,實(shí)現(xiàn)工廠育苗提供可靠的技術(shù)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料及處理

    外植體選用貴州省麻江縣黑莓種植基地中1年生黑莓納瓦好長(zhǎng)勢(shì)好、基本一致的枝條,剪去枝條上葉片和葉柄,留下中部莖段,在洗滌劑中浸泡10 min,并用軟毛刷清洗莖干在流水中沖洗20 min,枝條剪成長(zhǎng)2 cm左右?guī)?~2腋芽。

    表1 不同消毒劑對(duì)外植體發(fā)芽效果的影響

    消毒劑類型接種數(shù)(個(gè))滅菌時(shí)間發(fā)芽數(shù)(個(gè))污染數(shù)(個(gè))灼傷數(shù)(個(gè))發(fā)芽率(%)75%乙醇301min30075%乙醇3010s226260.1%HgCl23010min1947630.1%HgCl2305min20646675%乙醇,3010s234376及0.1%HgCl25min

    注:發(fā)芽率(%)=發(fā)芽數(shù)÷接種數(shù)×100%。

    表2 不同光照強(qiáng)度對(duì)出芽及褐化的影響

    光強(qiáng)度(lx)培養(yǎng)時(shí)間抽梢時(shí)間出芽數(shù)(個(gè))出芽率(%)生長(zhǎng)情況褐化暗培養(yǎng)7d轉(zhuǎn)入1500lx培養(yǎng)1528100芽綠色☆1007d轉(zhuǎn)入1500lx培養(yǎng)2025芽綠色☆1500302520淺綠色☆☆2000302513淡淺綠色☆☆☆300030308淡淺綠色☆☆☆

    注:☆褐化較輕;☆☆褐化重;☆☆☆褐化極嚴(yán)重。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 組培室培養(yǎng)

    1) 培養(yǎng)條件控制:培養(yǎng)室溫度(25±1)℃,濕度70%左右,常規(guī)管理,光照14 h/d,光照強(qiáng)度1 500~2 000 lx。

    2) 培養(yǎng)基配制:基本培養(yǎng)基為MS附加不同濃度生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑6-BA、IBA,蔗糖濃度30%(生根培養(yǎng)基蔗糖濃度20%),瓊脂6%,pH值為5.8。

    3) 培養(yǎng)用三角瓶的選擇:初代培養(yǎng)用50 mL三角瓶裝培養(yǎng)基250 mL,每處理10瓶,每瓶1株,3個(gè)重復(fù),繼代、生根培養(yǎng)用200 mL罐頭瓶,每瓶2個(gè)莖段,每處理3次重復(fù)。

    4) 培養(yǎng)前的消毒與滅菌:用4種消毒劑對(duì)外植體莖段進(jìn)行消毒,最后用無(wú)菌水沖洗6次,濾紙吸干表面水份,15 d后觀察生長(zhǎng)情況。

    5) 莖段在不同光照條件下的培養(yǎng):將消毒滅菌后的莖段在無(wú)菌條件下植入培養(yǎng)基中,分別進(jìn)行暗培養(yǎng)(7 d后移至1 500 lx)、100 lx光照培養(yǎng)(7 d后移至1 500 lx)、1 500 lx光照培養(yǎng)、2 000 lx光照培養(yǎng)、3 000 lx光照培養(yǎng),光照時(shí)間14 h/d,培養(yǎng)30 d后觀察發(fā)芽數(shù),褐變情況。

    6) 無(wú)菌苗在不同培養(yǎng)基中的培養(yǎng):將無(wú)菌苗剪成帶1~2枚葉片的莖段,接種在5種不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比的培養(yǎng)基上,每個(gè)處理10個(gè)樣品,3次重復(fù),45 d后觀察生長(zhǎng)情況。

    1.2.2移栽馴化

    1) 基質(zhì)消毒:在塑料大棚內(nèi),將過(guò)篩1 cm的森林腐殖土、田園土、蛭石按一定比例混合,待pH值調(diào)至5.8左右裝入塑料容器杯內(nèi),放在準(zhǔn)備好的苗床上。配50%多菌靈1 000倍液,用灑水壺均勻澆灌在苗床上,然后用塑料膜立即扣上小拱棚,消毒24 h,揭開(kāi)塑料膜敞氣24 h,每個(gè)處理10~15杯,3次重復(fù)。

    2) 苔蘚消毒:將苔蘚浸泡在50%多菌靈1 000倍液中10 h,撈出后稍瀝干水(用手捏擠不出水為準(zhǔn))鋪在苗床上壓平壓實(shí),厚度10 cm,也可上容器杯備用。

    3) 有根組培苗移栽:將生根組培苗從瓶中取出,在50%多菌靈1 000倍液中洗凈附著在根部的瓊脂,然后單株移栽到消過(guò)毒的4種基質(zhì)容器中,澆足定根水立即扣上塑料膜小拱棚,并蓋上遮陰網(wǎng),以后每隔7 d澆1次KH2PO4300倍液,30 d后揭膜,50 d后揭開(kāi)遮陽(yáng)網(wǎng)觀察生長(zhǎng)情況。

    4) 無(wú)根組培苗移栽:將4~5 cm高的無(wú)根組培苗在50%多菌靈1 000倍液中洗凈瓊脂用0.1%IBA溶液快浸30 s后插入苔蘚或河沙中,扣上小拱棚,并蓋上遮陽(yáng)網(wǎng),45 d后觀察生長(zhǎng)情況。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同消毒劑對(duì)外植體發(fā)芽的影響

    表1結(jié)果表明,用75%乙醇先滅菌10 s,再用0.1%HgCl2滅菌5 min,發(fā)芽個(gè)數(shù)達(dá)到23個(gè),發(fā)芽率為76%,污染數(shù)為4個(gè),灼傷數(shù)為3個(gè),此方法效果最好。

    2.2不同光照強(qiáng)度對(duì)出芽及褐變的影響

    從表2可看出,暗培養(yǎng)和弱光培養(yǎng)7 d后轉(zhuǎn)入1 500 lx光培養(yǎng)抽芽顏色綠色,在組培中光的作用并不是提供光合作用的能源,因?yàn)榕囵B(yǎng)基中已有足夠的碳源利用,這時(shí)細(xì)胞是處在瓶養(yǎng)的條件下,因此,光對(duì)器官的作用是一種誘導(dǎo)反應(yīng),器官發(fā)生開(kāi)始1周不需要光,反而有光培養(yǎng)的誘導(dǎo)受到抵制,但是當(dāng)芽萌動(dòng),開(kāi)始抽梢0.5 cm時(shí)又得移到1 500 lx光照下培養(yǎng),芽抽梢更快,25 d后芽伸長(zhǎng)[2],所以芽在黑暗和弱光下培養(yǎng)可降低多酚的養(yǎng)化速度[12]。

    2.3 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比對(duì)成苗時(shí)間的影響

    由表3可看出,1#初代培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng),大部分生根要70 d左右,隨著代數(shù)增加培養(yǎng)時(shí)間縮短,大部分生根只需50 d左右,生根率58.6%,沒(méi)有生根的剪成帶2枚葉片的莖段再接種到MS培養(yǎng)基上,50 d左右又可扦插或生根。1個(gè)芽1年增殖625株,可增殖4~5代。2#、3#、4#誘導(dǎo)出的叢生芽,但莖細(xì)弱,葉片小,直接用于生根和移栽,生根率和移栽成苗率會(huì)下降,因此在增殖和生根之間,還需要一個(gè)壯苗培養(yǎng)的過(guò)程,使葉片變大,莖桿粗壯,因此成苗時(shí)間需要120~140 d,以4#為例,全年只能完成3代培養(yǎng),1年1個(gè)芽增殖216~256株。5#、6#、7#將無(wú)菌生根植株一部分剪成1~2枚葉的莖段,扦插在原生根培養(yǎng)基上繼代,一部分從瓶中取出移栽到基質(zhì)中,由于莖桿粗壯,葉片大,在瓶?jī)?nèi)生根率達(dá)100%,能在同一培養(yǎng)基上完成扦插、伸長(zhǎng),移栽。所需時(shí)間50 d左右,以6#為例,組培苗生長(zhǎng)整齊,根系發(fā)達(dá),1個(gè)芽1年完成6~7代,增殖729株??偟膶?duì)比初代培養(yǎng)應(yīng)以1#培養(yǎng)基為好,多代繁殖后1次成苗培養(yǎng)基應(yīng)以6#為佳。

    表3 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑配比對(duì)成苗時(shí)間的影響

    編號(hào)培養(yǎng)基增殖方式有效增殖數(shù)苗高(cm)成苗所需時(shí)間(d)繼代壯苗培育生根全年完成代數(shù)1#Mg/LMS+0扦插叢生5.215.745~5040~454~52#MS+6?BA1+NAA0.1叢生芽4.133.245~5040~4540~453~43#MS+6?BA2+NAA0.1叢生芽3.823.145~5040~4540~453~44#MS+6?BA1+NAA0.1+GA3叢生芽6.214.445~5040~4540~453~45#1/2MS+IBA0.1+6?BA0.01扦插4.895.550~555~66#1/2MS+IBA0.3+6?BA0.01扦插5.375.945~506~77#1/2MS+IBA0.5+6?BA0.01扦插4.285.150~555~6

    注:有效增殖數(shù),能形成單芽,易抽梢展時(shí)的芽體;增殖方式:叢生芽,芽分化為叢生狀,扦插,將無(wú)菌嫩芽剪成帶1~2葉的莖段扦插,苗成單株或多株向上直立生長(zhǎng),葉片大,莖桿粗。

    表4 不同基質(zhì)對(duì)組培苗生長(zhǎng)的影響

    基質(zhì)移栽數(shù)成苗數(shù)(個(gè))成苗率(%)苗高(cm)側(cè)須根數(shù)(根)生長(zhǎng)情況森林腐殖土505010015.36.12葉片大,莖粗,已抽梢田園土302066.712.13.72葉片一般,莖粗蛭石302893.310.55.22葉片一般,莖細(xì),已抽梢苔蘚303686.76.55.38葉片較小,莖細(xì)

    2.4 不同基質(zhì)對(duì)組培苗生長(zhǎng)的影響

    由表4可知,森林腐殖土疏松肥沃、透氣性好,pH值適合,生長(zhǎng)快,發(fā)根多。田園土土壤較板結(jié),透氣性較差,澆水多時(shí)易爛根,但土壤較肥沃。蛭石透水,保水性好,病蟲(chóng)害少,但肥力較差,只有靠人工追肥。苔蘚未腐爛前,透水,保水較好,但養(yǎng)分低,苗木生長(zhǎng)勢(shì)差。綜合以上因子認(rèn)為,基質(zhì)對(duì)黑莓生長(zhǎng)排列為:森林腐殖土gt;蛭石gt;田園土。蛭石和苔蘚加強(qiáng)養(yǎng)分管理,苗木質(zhì)量會(huì)有所提高。

    3 結(jié)論與討論

    試驗(yàn)結(jié)果表明,美國(guó)黑莓納瓦好通過(guò)組織培養(yǎng)能完成一次成苗,培養(yǎng)過(guò)程簡(jiǎn)單,培養(yǎng)時(shí)間短,適用范圍廣,移栽成活容易,遺傳性狀穩(wěn)定,枝條生長(zhǎng)迅速,能實(shí)現(xiàn)工廠化生產(chǎn),滿足市場(chǎng)對(duì)苗木的需求。

    培養(yǎng)時(shí)需要注意:1) 外植體接種后1周內(nèi)暗培養(yǎng)和弱光下培養(yǎng)可防止褐變; 2) 一次成苗初代培養(yǎng)用不加生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑MS培養(yǎng)基培養(yǎng)和1/2 MS+6-BA 0.01 mg/L+IBA 0.3 mg/L進(jìn)行短枝扦插,腋芽伸長(zhǎng),生根一次完成,效果好。3) 初代培養(yǎng)時(shí)間還有進(jìn)一步縮短的空間。

    [1]孫俊秀.第三代水果樹(shù)莓[J].四川烹飪高等??茖W(xué)校學(xué)報(bào),2005(1):18.

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    (本欄目責(zé)任編輯:周忠燕)

    Study on Direct Plantlet Formation for Tissue Culture of American Blackberry

    WENGuangqin,ZHANGQunying,LIAOYoujiang,NIEFei

    2016-06-28

    文光琴(1977—),女,工程師,研究方向:種苗繁育及栽培技術(shù)研究。

    聶 飛(1965—),男,研究員,研究方向:種質(zhì)資源與栽培技術(shù)研究及推廣。

    10.16590/j.cnki.1001-4705.2016.10.121

    S 663.2

    A

    1001-4705(2016)10-0121-04

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