干片法與氣相色譜法兩種方法測(cè)試酒精結(jié)果比較及實(shí)際應(yīng)用

華 星，荊成寶，劉 婕，唐麟成

（陜西省安康市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 安康 725000）

干片法與氣相色譜法兩種方法測(cè)試酒精結(jié)果比較及實(shí)際應(yīng)用

華 星，荊成寶，劉 婕，唐麟成

（陜西省安康市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，陜西 安康 725000）

目的：探究對(duì)比干片法與氣相色譜法兩種方法對(duì)血液酒精的測(cè)試結(jié)果。用同一患者的血清，血漿，全血分別用兩種方法檢測(cè)得出的結(jié)果比較。方法：選擇來(lái)我院體檢的健康志愿者與疑似酒精中毒病患100例，碘伏消毒后同時(shí)抽取肝素鈉抗凝管和普通生化真空管取得血液后得到全血，血漿和血清。分別采用干片法和氣相色譜法對(duì)血清酒精濃度進(jìn)行檢測(cè)，并對(duì)比檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果：干片法與氣相色譜法對(duì)血漿可檢測(cè)的范圍更大，通過(guò)統(tǒng)計(jì)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，氣相色譜法全血檢測(cè)的均值顯著高于干片法和氣相色譜法中血漿、血清檢測(cè)的結(jié)果。并且干片法回收率及用時(shí)均顯著低于氣相色譜法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05)。結(jié)論：干片法對(duì)血清酒精濃度的測(cè)試具有操作簡(jiǎn)便、環(huán)保等顯著優(yōu)勢(shì)，結(jié)果的準(zhǔn)確度相對(duì)較低。而氣相色譜法操作結(jié)果準(zhǔn)確度高，但檢測(cè)成本高。兩種檢測(cè)方法對(duì)酒精的檢測(cè)結(jié)果具備統(tǒng)一的同向性，且伴有一定的差異性，可以根據(jù)實(shí)際情況對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行選擇。

酒精測(cè)試； 干片法； 氣相色譜法； 變異系數(shù)； 回收率

本文通過(guò)對(duì)比干片法與氣相色譜法兩種方法對(duì)血液酒精的測(cè)試，得到一些結(jié)論，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源：選擇來(lái)我院體檢的健康志愿者與疑似酒精中毒病患100例，經(jīng)碘酒對(duì)皮膚消毒后取得血液，并常規(guī)分離得到血清、血漿以及全血。

1.2 儀器與試劑：美國(guó)強(qiáng)生（VITROS）350干化學(xué)儀配套酒精檢測(cè)干片試劑，以及北京北分天普儀器技術(shù)有限公司SP－2100A氣相色譜儀。

1.3 檢驗(yàn)方法：其中強(qiáng)生350只用血清和血漿，氣相色譜法用同一患者的血清，血漿，全血三種標(biāo)本類型檢測(cè)。

1.3.1 干片法：①原理：配套的試劑是一種干燥的、具有多涂層的，并且在支撐基片上涂油分析成分的化學(xué)干片。這些干片帶有染色劑、粘合劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、蛋白質(zhì)以及聚合物交叉連接劑，在使用過(guò)程中起到主要作用。當(dāng)100μl的血清滴加在干片上，血清會(huì)迅速逐層分布。這時(shí)血清中的酒精就會(huì)被酒精脫氫酶氧化為乙醛，同時(shí)二磷酸砒啶核苷酸就會(huì)被分解為煙酰胺腺嘌呤二核苷酸。最后通過(guò)340mm的波長(zhǎng)對(duì)整個(gè)化學(xué)過(guò)程進(jìn)行檢測(cè)，并根據(jù)二磷酸砒啶核苷酸在一個(gè)單位時(shí)間內(nèi)減少量以及摩爾吸光系數(shù)對(duì)酒精濃度進(jìn)行測(cè)定。②整個(gè)測(cè)試過(guò)程按照儀器以及實(shí)際說(shuō)明說(shuō)進(jìn)行操作，一般用時(shí)5min。

1.3.2 氣相色譜法：①原理：（原理太簡(jiǎn)單請(qǐng)?jiān)敿?xì)說(shuō)明）通過(guò)色譜圖的分析，依據(jù)“物質(zhì)的濃度（C）＝物質(zhì)的比例系數(shù)（F）×色譜峰面積（A）”得到結(jié)果，則有Ci ＝Fi×Ai，Cs＝Fs×As。其中分別為組分i和內(nèi)標(biāo)物s的濃度，而是組分i和內(nèi)標(biāo)物s的比例系數(shù)，Ai和As是組分i和內(nèi)標(biāo)物s的氣象色譜峰面積，通過(guò)兩式轉(zhuǎn)換得到Ci/Cs＝Fi/Fs×Ai/As，F(xiàn)i/Fs＝Ci/Cs×As/Ai。Fi/ Fn稱為相對(duì)校正因子，只需通過(guò)配制抑制濃度的組分i和內(nèi)標(biāo)物s，平衡后測(cè)定兩峰面積值，就可以對(duì)相對(duì)校正因子進(jìn)行計(jì)算。最后轉(zhuǎn)換得到待測(cè)物濃度公式：Ci＝f×Ai/A×Cs。②色譜條件：柱溫150℃、進(jìn)樣室以及檢測(cè)器溫度為190℃，載氣（氮?dú)猓┡c氫氣流速比為2：3。從柱頭直接進(jìn)樣，進(jìn)樣量為1μl。③根據(jù)氣相色譜原理對(duì)酒精濃度進(jìn)行計(jì)算，每個(gè)樣本進(jìn)行兩次得到結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)注差（±s）表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 干片法與氣相色譜法測(cè)定酒精濃度的回收率：對(duì)所有參與者分離得到的血清進(jìn)行混合，分別采用兩種方法配制回收樣品：其中基礎(chǔ)樣品為0.9Ml＋0.1ML回收樣品①～⑤，加入的酒精濃度標(biāo)準(zhǔn)液為0.02Ml、0.04ML、0.06ML、0.08mL以及0.1ML，生理鹽水濃度為0.08ML、0.06ML、0.04ML、0.02ML以及0ML。通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品2次測(cè)試求得平均值，對(duì)回收率進(jìn)行計(jì)算。見(jiàn)表1、2。

表1 干片法測(cè)定酒精濃度的回收率（mg/dl，×10－2)

表2 氣相色譜法檢測(cè)酒精濃度的回收率（mg/dl，×10－2)

2.3 干片法與氣相色譜法檢測(cè)結(jié)果：干片法與氣相色譜法對(duì)血漿可檢測(cè)的范圍更大，其中氣相色譜法全血檢測(cè)的均值稍高于干片法和氣相色譜法中血漿、血清檢測(cè)的結(jié)果。見(jiàn)表3。

干片法血清與血漿、氣相色譜法血清與血漿之間檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有差異，而干片法以及氣相色譜法檢測(cè)的血漿、血清結(jié)果與氣相色譜法全血檢測(cè)的結(jié)果存在顯著差異。差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表3 干片法與氣相色譜法檢測(cè)結(jié)果

表4 兩組檢測(cè)均值對(duì)比（n，±s)

表4 兩組檢測(cè)均值對(duì)比（n，±s)

組別　　干片法血清和血漿氣相色譜法血清與血漿干片法血清與氣相色譜法血清氣相色譜法血漿與干片法血漿T值　0.792　0.749　1.815　1.694 P值　0.429　0.455　0.071　0.09組別　　氣相色譜法血清與全血?dú)庀嗌V法血漿與全血干片法血清與氣相色譜法全血干片法血漿與氣相色譜法全血T值　25.532　25.014　26.770　26.034 P值　0.000　0.000　0.000　0.000

2.4 干片法與氣相色譜法回收率、用時(shí)長(zhǎng)短對(duì)比：干片法回收率及用時(shí)均顯著低于氣相色譜法，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 兩組回收率、用時(shí)長(zhǎng)短對(duì)比（n，±s)

表5 兩組回收率、用時(shí)長(zhǎng)短對(duì)比（n，±s)

組別　　例數(shù)　　回收率（％）　　用時(shí)（min）干片法　100　101.9±0.94　5.12±0.78氣相色譜法　100　102.8±0.98　9.23±1.21 T值　?。?.628　28.549 P值　　－　0.000　0.000

3 討 論

隨著我國(guó)生活水平逐漸升高，越來(lái)越多的人自駕出行。這也在很大程度上增加了酒駕引起的交通事故，給社會(huì)以及家庭造成嚴(yán)重的危害。酒精在現(xiàn)階段是眾多酒類飲品中的必備成分，許多人員在過(guò)量飲用此類飲品后容易出現(xiàn)酒精中毒[1]。酒精檢測(cè)大于20mg/dl即為提示飲酒駕駛，大于80mg/dl即為醉酒駕駛。長(zhǎng)期、過(guò)量飲用酒類飲品會(huì)導(dǎo)致酒精在體內(nèi)聚集，從而對(duì)身體造成嚴(yán)重的傷害。尤其是酒精中毒后會(huì)引起高血壓、嚴(yán)重肝臟疾病以及長(zhǎng)期昏迷，并有可能造成死亡[2]。而酒駕者在高濃度的酒精作用下神經(jīng)系統(tǒng)被麻痹，進(jìn)而導(dǎo)致大腦反應(yīng)遲鈍以致肢體不受控制。飲酒與醉酒量刑不同，責(zé)任重大，需檢測(cè)者試驗(yàn)過(guò)程慎重細(xì)心，每次測(cè)定均需帶上已知濃度的酒精標(biāo)準(zhǔn)品與樣本同時(shí)檢測(cè)以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。一般，對(duì)酒精濃度的檢測(cè)方法以呼氣酒精分析、化學(xué)發(fā)光法，最主要的參考方法是氣相色譜法。因?yàn)闅庀嗌V法全血檢測(cè)相對(duì)其他檢測(cè)方法，檢測(cè)樣本而言具有準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性強(qiáng)，用血量少，中間環(huán)節(jié)少，等顯著優(yōu)勢(shì)，整個(gè)過(guò)程自動(dòng)化程度相對(duì)更高，這樣受外界因素影響程度更低，更有利于結(jié)果診斷。但是氣相色譜法在使用過(guò)程中需要?dú)庀嗌V儀，這就直接升高了檢測(cè)成本。而且檢測(cè)過(guò)程較長(zhǎng)，對(duì)于快速檢測(cè)是不利的。

本文通過(guò)對(duì)比干片法與氣相色譜法對(duì)血液酒精濃度的測(cè)試，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：干片法與氣相色譜法對(duì)血漿可檢測(cè)的范圍更大，通過(guò)統(tǒng)計(jì)對(duì)比發(fā)現(xiàn)，氣相色譜法全血檢測(cè)的均值顯著高于干片法和氣相色譜法中血漿、血清檢測(cè)的結(jié)果。并且干片法回收率及用時(shí)均顯著低于氣相色譜法。符合李芳等人的報(bào)道[3]。氣相色譜法作為最標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法，得到的結(jié)果準(zhǔn)確度更高、檢測(cè)范圍更廣。但是在整個(gè)過(guò)程中對(duì)樣品的處理以及相關(guān)色譜條件的要求上均存在較大的難度，不能再普通環(huán)境或水平下實(shí)施操作。尤其是在一些設(shè)備不健全的單位無(wú)法開(kāi)展檢測(cè)，這樣的樣品制備以及檢測(cè)過(guò)程都加長(zhǎng)了時(shí)間，這在很大程度上限制了氣相色譜法的應(yīng)用范圍。干片法在使用過(guò)程中不會(huì)對(duì)待測(cè)物質(zhì)產(chǎn)生干擾現(xiàn)象，并且對(duì)相對(duì)有干擾作用的物質(zhì)選擇性去除。整個(gè)反應(yīng)過(guò)程所用時(shí)間短，自動(dòng)加樣。最主要每個(gè)干片僅使用一次，避免樣本及干片間的結(jié)果干擾。整個(gè)操作過(guò)程耗時(shí)短、操作簡(jiǎn)單，干片的使用同時(shí)具有顯著的環(huán)保意識(shí)。目前對(duì)酒精濃度的測(cè)試主要是在酒駕中的測(cè)試，有效鑒定濃度范圍在20～80mg/dl間。因此，在能保證檢測(cè)力度的情況下以節(jié)約成本為主。除此之外，氣相色譜法肝素抗凝后全血檢測(cè)，應(yīng)用于公安機(jī)關(guān)酒駕定性重要依據(jù)，因其檢測(cè)一次需要1mL樣本，一般要保證兩次的檢測(cè)量還有樣本剩余保存量，大約需3～4mL血量。如果用血清或是血漿那就需要更多的血量才能分離出來(lái)。而且每次采血要求采雙管，檢測(cè)用一份，公安交警人員帶走一份，這是氣相色譜法用全血樣本檢測(cè)的一個(gè)最大好處，這樣可以最大程度節(jié)省用血量。

[1]Giasov ZA，MakhsumkhonovKA.Specific features of suicides committed in a state of alcoholic intoxication[J].Sud Med Ekspert，2015，58（3)：17～20.

[2]曹一顯，李良平.非酒精性脂肪性肝炎與內(nèi)皮功能異常和動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系[J].中華肝臟病雜志，2014，22（3)：205～208.

[3]鄧紅蓮，徐小作.利用氣相色譜法檢測(cè)食品中反式脂肪酸含量[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2009，8（7)：25～27.

1006－6233（2016)10－1745－03

A【doi】10.3969/j.issn.1006－6233.2016.10.071

陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目，（編號(hào)：2009k13－G6（7））