經(jīng)皮電刺激聯(lián)合減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)完全性脊髓損傷大鼠膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及RhoA表達(dá)的影響

蔡洪梅，王維，馬頔，王文娟，易添，周曉紅

經(jīng)皮電刺激聯(lián)合減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)完全性脊髓損傷大鼠膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及RhoA表達(dá)的影響

蔡洪梅1，王維2，馬頔1，王文娟2，易添1，周曉紅2

（錦州醫(yī)科大學(xué) 1.研究生院；2.附屬第一醫(yī)院康復(fù)科，遼寧 錦州 121000）

目的研究經(jīng)皮電刺激聯(lián)合減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)完全性脊髓損傷大鼠膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（GDNF）及RhoA表達(dá)的影響，探討其存在的可能機(jī)制。方法將108只成年雌性SD大鼠隨機(jī)均分為6組：正常組（A組）、假損傷組（B組）、損傷組（C組）、電刺激組（D組）、訓(xùn)練組（E組）、電刺激+訓(xùn)練組（F組）。術(shù)后第5天對(duì)D、E、F組進(jìn)行相應(yīng)的干預(yù)治療，在治療前后對(duì)所有大鼠進(jìn)行BBB評(píng)分，并檢測(cè)治療1、3、7、14、21、28 d后損傷脊髓處的GDNF與RhoA的表達(dá)。結(jié)果從治療第7天開始，與C組比較，D、E、F組的BBB評(píng)分、GDNF表達(dá)都增高（P＜0.05），RhoA的表達(dá)降低（P＜0.05），且F組BBB評(píng)分、GDNF、RhoA表達(dá)差異更為顯著（P＜0.01）；正常組與假損傷組比較，BBB評(píng)分、GDNF、RhoA表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。結(jié)論經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練能有效改善損傷脊髓的功能重建，其作用機(jī)制與GDNF、RhoA的表達(dá)變化有關(guān)；經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的治療作用更明顯，并適合長(zhǎng)時(shí)間使用。

經(jīng)皮電刺激；減重跑臺(tái)訓(xùn)練；完全性脊髓損傷；膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子；RhoA

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脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）作為一種高致殘性疾病，造成患者肢體感覺(jué)、運(yùn)動(dòng)功能障礙等生理?yè)p傷的同時(shí)還給心理帶來(lái)嚴(yán)重壓力，對(duì)其回歸社會(huì)有很大的影響。大量研究［1］表明SCI危害巨大主要源于繼發(fā)性損傷，即神經(jīng)元繼發(fā)性凋亡和脊髓損傷局部微環(huán)境的形成。經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練作為干預(yù)治療措施已被證實(shí)對(duì)改善SCI后遺癥、促進(jìn)患者回歸社會(huì)家庭有效［2］。但對(duì)兩者的聯(lián)合應(yīng)用目前未見相關(guān)報(bào)道。

近年來(lái)，研究［3］發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（glial cell line?derived neurotrophic factor，GDNF）可維持脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元存活，抗神經(jīng)元凋亡，實(shí)現(xiàn)運(yùn)動(dòng)功能重建，RhoA在軸突再生抑制性因子誘導(dǎo)脊髓神經(jīng)元細(xì)胞骨架塌陷的過(guò)程中起到關(guān)鍵作用［4］，針對(duì)GDNF和RhoA相關(guān)藥物與基因重組治療脊髓損傷的研究成為了熱點(diǎn)，但其給藥途徑和安全性問(wèn)題也相繼出現(xiàn)［5］，因此，本實(shí)驗(yàn)將經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練聯(lián)合應(yīng)用于脊髓損傷大鼠模型，檢測(cè)脊髓損傷大鼠GDNF、RhoA在脊髓中的表達(dá)，探討經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)脊髓損傷存在的可能機(jī)制，為臨床研究開辟新思路提供相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料

經(jīng)皮電刺激儀，自制減重跑臺(tái)訓(xùn)練器，Bio?rad蛋白電泳裝置，Bio?rad半干轉(zhuǎn)印儀，搖床，Anti?RhoA（北京博奧森生物技術(shù)有限公司），Anti?GDNF（生工生物工程有限公司），SABC?POD（兔lgG）試劑盒、DAB顯色試劑盒、ECL試劑盒（博士德生物工程有限公司）。4.0%水合氯醛（0.4 g、10 mL生理鹽水配制，過(guò)濾，現(xiàn)用現(xiàn)配），青霉素鈉（80萬(wàn)U，10 mL生理鹽水配制），PBS，肝素鈉等。

1.2動(dòng)物及分組

SPF級(jí)成年雌性SD大鼠108只，體質(zhì)量200～220 g，購(gòu)自遼寧省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物資源中心，由錦州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心喂養(yǎng)管理，室溫保持在20～25℃。

將108只成年雌性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為6組：正常組（A組）、假損傷組（B組）、損傷組（C組）、電刺激組（D組）、訓(xùn)練組（E組）、電刺激+訓(xùn)練組（F組），每組18只，干預(yù)治療1、3、7、14、21、28 d 6個(gè)時(shí)間點(diǎn)各3只。

1.3大鼠模型的制作

將C、D、E、及F組大鼠用自配的4.0%水合氯醛（3 mL/kg）腹腔注射麻醉。麻醉成功后放于大鼠手術(shù)臺(tái)上俯臥固定，以T10為中心，背部剃毛，常規(guī)消毒?？v行依次切開皮膚及皮下組織，剝離椎旁肌肉并暴露棘突與椎板，咬除T9～11椎板，暴露T10段脊髓，用尖銳刀片自背側(cè)至腹側(cè)快速橫斷脊髓，這時(shí)大鼠出現(xiàn)雙后肢快速收縮痙攣，尾巴痙攣性左右擺動(dòng)，造模成功，再檢查脊髓兩斷端確認(rèn)是否橫斷完全。壓迫止血后，逐層縫合切口，手術(shù)全程嚴(yán)格按無(wú)菌操作。術(shù)后立即給予青霉素鈉8萬(wàn)U、生理鹽水2 mL 1次，皮下注射，稍按摩注射部位以助吸收。獨(dú)籠飼養(yǎng)，每日早晚各1次按摩擠壓膀胱助大鼠排尿，至排尿反射恢復(fù)；皮下注射青霉素鈉8萬(wàn)U，1次/d，維持1周。注意觀察手術(shù)切口愈合情況，下肢、尾巴有無(wú)潰爛、自噬。假損傷組大鼠不做脊髓橫斷，其余同上述操作，A組大鼠不做任何特殊處理。除A組外，所有大鼠在手術(shù)前后各禁食水12 h，預(yù)防手術(shù)并發(fā)癥的產(chǎn)生。如有死亡或不適合繼續(xù)實(shí)驗(yàn)的大鼠及時(shí)同條件補(bǔ)充。

1.4干預(yù)方法

1.4.1經(jīng)皮電刺激：術(shù)后第5天對(duì)D組和F組大鼠進(jìn)行電刺激，將大鼠放于固定器內(nèi)，正極接T10位置的皮膚，負(fù)極接右下肢小腿位置的皮膚。刺激頻率10 Hz，疏密波脈沖電流3～8 mA，強(qiáng)度以引起肌肉收縮為宜，電刺激1次/d，每次30 min［6］。C組與相同的電刺激儀相連，但不給予刺激。

1.4.2減重跑臺(tái)訓(xùn)練：術(shù)后第5天對(duì)E組和F組大鼠進(jìn)行減重跑臺(tái)訓(xùn)練。訓(xùn)練設(shè)備是在大鼠跑步機(jī)的基礎(chǔ)上自制減重裝置，在跑步機(jī)上方置兩根帶有夾子的魚線，一根夾于大鼠項(xiàng)背部，控制前肢負(fù)重，另一根（長(zhǎng)度可調(diào)）夾于尾部，控制后肢負(fù)重并根據(jù)后肢恢復(fù)情況調(diào)節(jié)減重量［7］。跑步機(jī)平板的速度為8～12 m/min，減重為大鼠體質(zhì)量的30%～70%，速度與減重根據(jù)各組大鼠具體運(yùn)動(dòng)情況做適當(dāng)調(diào)整。訓(xùn)練時(shí)間為30 min/d，分3次進(jìn)行，每次10 min，間隔5 min。在實(shí)驗(yàn)前所有大鼠做跑臺(tái)適應(yīng)性訓(xùn)練，以熟悉跑臺(tái)環(huán)境，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用細(xì)木棍給予大鼠適當(dāng)刺激以保證訓(xùn)練量。

1.5大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)定量表（Bosso?Beattie?Bresnahan locomotor rating scale，BBB）

該評(píng)定法有21項(xiàng)，0～21分，分?jǐn)?shù)越高表明下肢運(yùn)動(dòng)功能越好。本實(shí)驗(yàn)中各組大鼠于造模前后進(jìn)行BBB評(píng)分，造模前各組大鼠均達(dá)到21分。0分作為橫斷脊髓造模成功的標(biāo)準(zhǔn)，＞0分視為造模失敗并同條件增補(bǔ)。取材前對(duì)各時(shí)間點(diǎn)大鼠進(jìn)行BBB評(píng)分，以對(duì)比脊髓損傷后的運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。所有評(píng)分都是由熟悉評(píng)定方法但不了解實(shí)驗(yàn)分組的3名成員進(jìn)行，取平均值作為最終評(píng)定得分。

1.6蛋白檢測(cè)

各組大鼠均于末次干預(yù)治療24 h后（即術(shù)后6、8、12、19、26、33 d）進(jìn)行取材，每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)3只大鼠，其中1只用于免疫組化檢測(cè)，另外2只用于

Western blot檢測(cè)。

1.6.1免疫組化檢測(cè)GDNF蛋白表達(dá)：用過(guò)量的4.0%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，依次剪開胸部的皮膚、肌肉、胸骨，暴露心臟，自心尖部插管直至主動(dòng)脈后固定，剪開右心耳，灌注加入1 mL肝素鈉的生理鹽水（約200 mL）直到有澄清液從右心耳流出，肝臟、腸系膜變白，再改用經(jīng)過(guò)濾的4℃4%多聚甲醛（約300 mL）灌注，直到肝臟、四肢變硬。拆除灌注裝置，剪下T10上下各2 cm的胸段脊髓，用彎眼科剪小心剔除椎板取出脊髓，放入4%多聚甲醛4℃恒溫固定，更換多聚甲醛液1次/d，連續(xù)3 d，于錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科包埋成蠟塊。按照試劑盒說(shuō)明書行免疫組織化學(xué)染色：切片、烤片、脫蠟、3%H2O2滅活、抗原修復(fù)、封閉血清、一抗4℃孵育過(guò)夜、滴加二抗、DAB顯色、蘇木精染色、脫水封片。400倍放大，隨機(jī)選4個(gè)視野，觀察胞質(zhì)內(nèi)棕黃色纖維狀的GDNF陽(yáng)性表達(dá)，應(yīng)用Image?Pro Plus 6.0彩色病理圖文分析系統(tǒng)（Olympus公司），測(cè)定GDNF的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。

1.6.2Western blot檢測(cè)RhoA蛋白表達(dá)：用過(guò)量的4.0%水合氯醛進(jìn)行腹腔麻醉大鼠，剪下T10上下各1 cm的胸段脊髓，小心剔除椎板取出脊髓，經(jīng)1次PBS清洗掉血液等后放入標(biāo)記好的2 mL EP管內(nèi)，置于-80℃保存?zhèn)溆?，整個(gè)過(guò)程在冰上作業(yè)并在5 min內(nèi)完成。然后蛋白定量制樣、灌膠、加樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、加一抗置于4℃過(guò)夜、加適當(dāng)濃度的二抗、ECL顯色曝光，經(jīng)定影處理后掃描分析。

1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2　結(jié)果

因麻醉意外死亡3只，膀胱破裂造成4只死亡，腸梗阻死亡6只，均于造模后5 d內(nèi)死亡。以上大鼠均同條件及時(shí)補(bǔ)充。

2.1各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分及分析

與C組比較，D、E、及F組從治療3 d開始（即術(shù)后第8天）BBB評(píng)分升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與D組和E組比較，治療7 d開始（即術(shù)后第12天）F組的BBB評(píng)分升高（P＜0.05）。說(shuō)明電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練均能改善脊髓損傷大鼠下肢的運(yùn)動(dòng)功能，并且聯(lián)合運(yùn)用對(duì)大鼠下肢功能重建的恢復(fù)更為顯著；治療7 d開始（即術(shù)后第12天），D組與E組BBB評(píng)分比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明電刺激療法比減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)脊髓損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)作用更明顯；而A組與B組比較，BBB評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），說(shuō)明假損傷造模方法對(duì)該實(shí)驗(yàn)研究未造成影響。見表1。

表1　各組大鼠各時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分比較Tab.1　Comparison of BBB score in each rat group at each time point

2.2各組大鼠在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)GDNF、RhoA蛋白表達(dá)

與B組比較，C組GDNF的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)呈先升高后降低的趨勢(shì)，在術(shù)后第19天達(dá)到高峰，術(shù)后第33天降低到正常水平，說(shuō)明GDNF在脊髓損傷后短期內(nèi)有反應(yīng)性升高，但維持時(shí)間不長(zhǎng)，并由此推測(cè)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，損傷組GDNF的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)有可能會(huì)低于正常水平。與C組比較，D、E、F組GDNF的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與D組和E組比較，F(xiàn)組升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練都能增加脊髓損傷大鼠脊髓處GDNF的分泌，聯(lián)合運(yùn)用更為顯著。D組與E組比較陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明電刺激療法比減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)GDNF的表達(dá)影響更明顯。見表2。

與C組比較，F(xiàn)組從治療3 d開始（即術(shù)后第8天）RhoA的表達(dá)降低（P＜0.05），并且隨著治療時(shí)間延長(zhǎng)差異更顯著（P＜0.01）；與D組和E組比較，F(xiàn)組RhoA的表達(dá)降低（P＜0.01）。與C組比較，D、E組在治療7 d（即術(shù)后第12天）開始RhoA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練的聯(lián)合運(yùn)用，比兩者中任何一種單一療法對(duì)RhoA的表達(dá)影響都顯著，并適合長(zhǎng)時(shí)間堅(jiān)持使用。從治療7 d（即術(shù)后第12天）開始，D組與E組比較RhoA表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明電刺激療法對(duì)RhoA的表達(dá)影響更顯著。D、E、F組RhoA的表達(dá)在治療3～7 d迅速降低并達(dá)高峰，隨后雖然其表達(dá)量在繼續(xù)降低，但降低速度變緩，說(shuō)明早期治療對(duì)RhoA表達(dá)的影響較為明顯。見表3。

表2　各組大鼠免疫組化法檢測(cè)GDNF的表達(dá)比較Tab.2　Comparison of GDNF expression in each group by immunohistochemistry

表3　各組大鼠Western blot檢測(cè)RhoA表達(dá)比較Tab.3　Comparison of RhoA expression in each group by Western blot

3　討論

隨著醫(yī)療技術(shù)的不斷發(fā)展，單一的治療方法已不再適應(yīng)臨床需求。本實(shí)驗(yàn)將經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練聯(lián)合作用于脊髓損傷大鼠，從而探討聯(lián)合療法的作用效果。經(jīng)皮電刺激可通過(guò)抑制炎性因子及瘢痕形成、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)因子分泌改善脊髓的繼發(fā)性損傷；減重跑臺(tái)訓(xùn)練是利用特殊的減重裝置，將上肢懸吊以減輕雙下肢負(fù)重，達(dá)到脊髓損傷后下肢的行走、肌力、感覺(jué)等功能逐漸恢復(fù)的一種康復(fù)訓(xùn)練方法［8］。目前，減重跑臺(tái)訓(xùn)練多用于不完全脊髓損傷及腦卒中患者的康復(fù)，而用于完全性脊髓損傷的研究較少。其作用機(jī)制可能與通過(guò)感覺(jué)信息的傳入，刺激損傷部位神經(jīng)元軸突再生，從而促進(jìn)神經(jīng)環(huán)路的形成有關(guān)［9］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，D、E組大鼠BBB得分均高于C組，說(shuō)明電刺激和減重跑臺(tái)訓(xùn)練都可促進(jìn)完全性SCI大鼠下肢運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)；D、E組GDNF與RhoA的表達(dá)變化也表明電刺激和減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)損傷脊髓的作用與GDNF和RhoA有關(guān)；F組的BBB得分、GDNF分泌和RhoA表達(dá)與C組比較都有明顯的差異，而且優(yōu)于D、E 2組，另外還發(fā)現(xiàn)F組BBB得分、GDNF分泌和RhoA表達(dá)早期的變化速度較快，之后趨于平穩(wěn)但仍與C組差異顯著。由此說(shuō)明電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練的聯(lián)合療法治療效果更明顯，且早期治療作用顯著并適合長(zhǎng)期使用。

GDNF來(lái)源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，由134個(gè)氨基酸組成，分子量為（33～35）×103，是TGF?β超家族的亞家族，在脊髓中分布廣泛，其在正常大鼠脊髓后角中的含量較高。GDNF是一個(gè)較新的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，近些年引起研究者的廣泛關(guān)注，大量在體和體外實(shí)驗(yàn)都已表明，GDNF可維持損傷脊髓神經(jīng)元的存活，促進(jìn)軸突再生，減輕神經(jīng)元繼發(fā)性凋亡，對(duì)脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)發(fā)揮著至關(guān)重要的作用［10］。RhoA是小G蛋白超家族中Rho家族的Rho亞族中的成員，激活后的RhoA主要與下游的ROCK（即Rho激酶）結(jié)合影響肌動(dòng)-球蛋白系統(tǒng)，最終導(dǎo)致生長(zhǎng)錐的塌陷，抑制神經(jīng)軸突再生［11?12］。而有研究［13］發(fā)現(xiàn)脊髓繼發(fā)性損傷的重要抑制因子（MAG、Nogo?A、Omgp等）都會(huì)通過(guò)影響RhoA信號(hào)通路發(fā)揮抑制作用，因此抑制RhoA的表達(dá)成為了阻斷脊髓繼發(fā)性損傷的關(guān)鍵。

經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練作為物理治療方法安全性較高，也已應(yīng)用于臨床，但未見其對(duì)GDNF、RhoA影響的報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)探討了經(jīng)皮電刺激和減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)脊髓損傷后運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的作用機(jī)制是否與促進(jìn)損傷脊髓中GDNF的分泌和抑制RhoA的表達(dá)有關(guān)。實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，D、E組與C組的比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明經(jīng)皮電刺激和減重跑臺(tái)訓(xùn)練一方面可通過(guò)促進(jìn)GDNF的分泌抵抗運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的凋亡，刺激軸突再生，另一方面，通過(guò)抑制RhoA的表達(dá)，切斷繼發(fā)性SCI抑制因子發(fā)揮抑制作用的信號(hào)通路，最終達(dá)到改善運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的目的。

本次實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)橫斷脊髓損傷大鼠模型進(jìn)行經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練的不同干預(yù)設(shè)計(jì)，評(píng)定大鼠干預(yù)前后的BBB評(píng)分來(lái)反映脊髓損傷大鼠運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)情況，同時(shí)檢測(cè)干預(yù)后損傷脊髓組織中GDNF和RhoA的表達(dá)變化，結(jié)果說(shuō)明經(jīng)皮電刺激與減重跑臺(tái)訓(xùn)練都能有效改善損傷脊髓的功能重建，其作用機(jī)制與GDNF、RhoA的表達(dá)有關(guān)；且兩種方法的聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的治療作用更明顯，并適合長(zhǎng)時(shí)間使用。但由于實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)等原因，本實(shí)驗(yàn)未能監(jiān)測(cè)更長(zhǎng)時(shí)間的使用結(jié)果及停止干預(yù)治療后的隨訪，故經(jīng)皮電刺激及減重跑臺(tái)訓(xùn)練對(duì)完全性脊髓損傷大鼠的長(zhǎng)期效應(yīng)還需要進(jìn)一步研究。

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（編輯武玉欣）

Effects of Transcutaneous Electrical Stimulation and Combination Body Weight Supported Treadmill Training on Glial Cell Line?derived Neurotrophic Factor and RhoA in Transection Spinal Cord Rats

CAI Hongmei1，WANG Wei2，MA Di1，WANG Wenjuan2，YI Tian1，ZHOU Xiaohong2
（1.Graduate School，Jinzhou Medical University，Jinzhou 121000，China；2.Department of Rehabilitation，The First Affiliated Hospital，Jinzhou Medical University，Jinzhou 121000，China）

ObjectiveTo study the effects of transcutaneous electrical stimulation and combination body weight supported treadmill training on glial cell line?derived neurotrophic factor（GDNF）and RhoA in rats with spinal cord transection，and explore their possible mechanism.Methods A total of 108 adult female SD rats were randomly divided into 6 groups：normal group（A group），sham injured group（B group），injured group（C group），electrical stimulation group（D group），training group（E group）and electrical stimulation+training group（F group）.After 5 days of sur?gery corresponding intervention treatment for the D，E，F(xiàn) groups，Bosso?Beattie?Bresnahan locomotor rating scale for open field（BBB scale）was assessed.The expression of GDNF and RhoA in spinal cord tissue were measured 1，3，7，14，21 and 28 d after treatment.ResultsCompare with C group，the scores of BBB and levels of GDNF were increased（P＜0.05），and the levels of RhoA were reduced（P＜0.05）in D，E，F(xiàn) groups since 7 d after treatment，and the BBB scales，levels of GDNF，RhoA in F group was more obviously（P＜0.01）.There were no statistical differenc?es of the BBB scales，levels of GDNF，and RhoA between normal group with sham injured group（P＞0.05）.ConclusionTranscutaneous electri?cal stimulation and body weight supported treadmill training can effectively improve the injured spinal cord function reconstruction，and their mech?anism may be associated with the expression of GDNF and RhoA in injured spinal cord.The combination therapy of electrical stimulation and body weight supported treadmill training is more apparent for motor function recovery of rats，which is suitable for long time use.

transcutaneous electrical stimulation；body weight support treadmill training；complete spinal cord injury；glial cell line?derived neurotrophic factor；RhoA

R493

A

0258-4646（2016）09-0838-05

10.12007/j.issn.0258?4646.2016.09.016

蔡洪梅（1987-），女，碩士研究生.

王維，E-mail：dubutianxia315@163.com

2015-11-28

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