血栓通注射液對血管性癡呆大鼠的行為學(xué)改善作用研究*

王金鑫，楊紅云，郭虹，柴麗娟，張玥，王少峽，胡利民

（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津市中藥藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，教育部方劑學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300193）

血栓通注射液對血管性癡呆大鼠的行為學(xué)改善作用研究*

王金鑫，楊紅云，郭虹，柴麗娟，張玥，王少峽，胡利民

（天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津市中藥藥理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，教育部方劑學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300193）

[目的]探討注射用血栓通（凍干）對血管性癡呆（VD）大鼠行為學(xué)的改善作用。[方法]將SD大鼠隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組、模型組、他克林組、血栓通組，每組20只，采用結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈的的方法復(fù)制VD大鼠模型，以他克林為對照，通過對給藥期間各組大鼠死亡率和體質(zhì)量的變化，觀察生存質(zhì)量的變化；通過水迷宮和Y迷宮的方法分別觀察術(shù)后20 d各組大鼠行為學(xué)的變化。[結(jié)果]與模型組比較，各組間死亡率及體質(zhì)量變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降，表現(xiàn)為穿過平臺的次數(shù)減少（P＜0.01）；與模型組比較，血栓通可以使模型大鼠穿過平臺次數(shù)增加（P＜0.01），和陽性對照藥物他克林藥效相當(dāng)；Y迷宮中，與模型組比較，低劑量組的空間記憶能力明顯提高（P＜0.05）。[結(jié)論]注射用血栓通（凍干）對VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有改善作用。

血管性癡呆；行為學(xué)；水迷宮；注射用血栓通

血管性癡呆（VD）是由多次腦卒中或長期慢性腦缺血所致的大腦皮質(zhì)獲得性高級功能進(jìn)行性衰退性疾病[1－3]。其臨床的主要表現(xiàn)為記憶力下降，表情淡漠或呆滯，人格的改變等[4－5]。隨著中國老齡化社會的到來，近年VD的發(fā)病率明顯上升，所以尋找有效預(yù)防和治療VD的藥物迫在眉睫。三七為五加科植物三七[Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen]的干燥根和根莖。主要功效為散瘀止血，消腫定痛，在臨床上及制劑方面應(yīng)用都非常廣泛。注射用血栓通（凍干），采用三七主根為原料制成，主要成分為三七總皂苷，具有活血祛瘀，通脈活絡(luò)，擴(kuò)張血管，改善腦供血、增加腦灌注、減輕缺血所致病理損害，降低膽固醇，抑制血小板聚集，降低血黏度等多種作用，在臨床中應(yīng)用廣泛。注射用血栓通對VD是否具有治療和改善作用還未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過對大鼠雙側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎，建立VD大鼠模型。觀察注射用血栓通對血管性癡呆大鼠的神經(jīng)保護(hù)性作用，為注射用血栓通在VD中的臨床應(yīng)用提供科學(xué)理論依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動物健康雄性SPF級SD大鼠80只，體質(zhì)量250～280 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供（科學(xué)研究用SPF級SD大鼠，合格證號：11400700091178）。

1.1.2藥品及試劑注射用血栓通（凍干）：廣西梧州制藥股份有限公司生產(chǎn)（批號：13102015），他克林：Sigma公司生產(chǎn)，其他為市售分析純。

1.2方法

1.2.1分組及給藥SD大鼠進(jìn)鼠后使其適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境1周，然后將大鼠按體質(zhì)量由大到小排列，然后隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組、模型組、他克林組、注射用血栓通組，每組20只。二次手術(shù)后第2天開始給藥，連續(xù)給藥至取材。注射用血栓通用生理鹽水溶解，進(jìn)行腹腔注射，劑量50 mg/kg；假手術(shù)組和模型組腹腔注射等量的生理鹽水；他克林用生理鹽水配成混懸液，進(jìn)行腹腔注射，劑量10 mL/kg。

1.2.2模型復(fù)制方法參照文獻(xiàn)[6]，將SD大鼠用10%的水合氯醛進(jìn)行麻醉（3 mL/kg，），仰臥于固定臺上，固定四肢，頸部備皮并用碘伏進(jìn)行消毒，頸部正中切口，分離左側(cè)頸總動脈，用4號線結(jié)扎，縫合皮膚，1周后重新麻醉，分離右側(cè)頸總動脈并用4號線進(jìn)行結(jié)扎，縫合皮膚，兩次手術(shù)縫合傷口后都要在切口處局部注射硫酸慶大霉素0.2萬U。假手術(shù)組只分離頸總動脈，穿線但不結(jié)扎，其他處理一樣。

1.2.3檢測方法

1.2.3.1水迷宮檢測水迷宮實(shí)驗(yàn)是研究大鼠的海馬等腦區(qū)受到損害后的學(xué)習(xí)、記憶和空間定向以及認(rèn)知能力的實(shí)驗(yàn)。分為環(huán)境熟悉、定位巡航和空間探索3個階段。第一階段主要使大鼠熟悉實(shí)驗(yàn)環(huán)境及實(shí)驗(yàn)人員；定位航行階段，主要記錄大鼠的逃避潛伏期的變化；空間探索階段，主要記錄大鼠穿過平臺的次數(shù)。

1.2.3.2Y迷宮檢測Y迷宮實(shí)驗(yàn)是評價動物空間記憶能力的實(shí)驗(yàn)，主要用于測試實(shí)驗(yàn)動物的短期記憶能力。Y迷宮是將大鼠放在Y形迷宮一個特定的臂末端，自動記錄5 min內(nèi)大鼠進(jìn)入各個臂的順序和次數(shù)。記錄實(shí)際交替數(shù)，并計(jì)算自發(fā)交替百分?jǐn)?shù)，記錄總進(jìn)臂數(shù)作為自發(fā)活動的指標(biāo)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，死亡率統(tǒng)計(jì)采用百分比表示，其他數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。各組死亡率之間的差異進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，各組大鼠的體質(zhì)量變化和逃避潛伏期變化用重復(fù)測量的方差分析；各組大鼠穿越平臺次數(shù)和Y迷宮自發(fā)交替百分?jǐn)?shù)先檢測其正態(tài)性及方差齊性，如果符合正太分布且方差齊則各組間比較采用單因素方差分析，然后用Newman－Keuls檢驗(yàn)進(jìn)行組間兩兩比較，若不符合正態(tài)分布或方差不齊，則采用秩和檢驗(yàn)，P＜0.05位差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組大鼠死亡率及體質(zhì)量變化成模后，統(tǒng)計(jì)各組大鼠在給藥期間的死亡率，經(jīng)卡方檢驗(yàn)，各組在實(shí)驗(yàn)各個時期的死亡率沒有差異。從給藥期間各組大鼠的體質(zhì)量變化中可以看出，血栓通組在各個時期的體質(zhì)量變化與模型組相比沒有差異。見表1、表2。

表1　各組大鼠死亡率統(tǒng)計(jì)Tab.1　Morality of rats in each group%

表2　各組大鼠體質(zhì)量變化（±s）Tab.2　Body weight of rats in each group（±s）g

表2　各組大鼠體質(zhì)量變化（±s）Tab.2　Body weight of rats in each group（±s）g

組別動物數(shù)第1周第2周第3周第4周假手術(shù)組16274±18.4 266±16.7 327±18.9 345±26.4模型組19272±15.5 267±23.0 305±23.8 332±36.5他克林組（10 mL/kg）17271±15.5 257±10.6 276±38.9 300±41.7血栓通組（50 mg/kg）16271±15.0 271±15.0 257±16.6 292±22.7組別動物數(shù)第5周第6周第7周第8周假手術(shù)組16357±26.3 390±19.8 408±28.2 424±34.4模型組19351±25.9 373±29.0 382±25.4 391±25.1他克林組（10 mL/kg）17311±49.4 335±58.8 339±60.3 347±68.4血栓通組（50 mg/kg）16307±23.2 324±29.0 355±41.4362±48.6

2.2水迷宮結(jié)果統(tǒng)計(jì)從水迷宮中得到兩組數(shù)據(jù)，分別是定位航行階段各組逃避潛伏期的變化（見表3）和空間探索階段各組穿越平臺的次數(shù)（見表4）。從各組逃避潛伏期的變化來看，第1次定位航行時模型組與假手術(shù)組相比較，逃避潛伏期有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），表明模型組巡航能力的下降；各組進(jìn)入平臺期之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？臻g探索階段，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降，表現(xiàn)為穿過平臺的次數(shù)減少（P＜0.01）；與模型組比較，血栓通組可以使大鼠穿過平臺次數(shù)增加（P＜0.01），和陽性對照藥物他克林藥效相當(dāng)。

表3　各組大鼠逃避潛伏期的變化（±s）Tab.3　Escape latency of rats in each group（±s）

表3　各組大鼠逃避潛伏期的變化（±s）Tab.3　Escape latency of rats in each group（±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05。

組別動物數(shù)逃避潛伏期（s）第1次第2次第3次第4次第5次假手術(shù)組1655.8±28.94 19.8±18.63 16.3±16.4817.4±14.9310.3±10.37模型組1968.9±29.16*34.9±29.85 22.2±21.1523.7±21.9311.9±13.04他克林組（10 mL/kg）1756.3±31.11 31.2±26.52 27.7±26.0816.4±15.4717.0±19.17血栓通組（50 mg/kg）1769.1±25.86*40.2±34.00 28.6±30.7328.5±27.3920.7±20.22

表4　各組大鼠穿過平臺的次數(shù)（±s）Tab.4　Through the platform number of rats in each group（±s）

表4　各組大鼠穿過平臺的次數(shù)（±s）Tab.4　Through the platform number of rats in each group（±s）

注：與假手術(shù)組比較，##P＜0.01；與模型組比較，**P＜0.01。

組別動物數(shù)穿過平臺次數(shù)（次）假手術(shù)組162.6±1.58模型組191.3±0.50##他克林組（10 mL/kg）173.7±1.65**血栓通組（50 mg/kg）153.4±0.88**

2.3Y迷宮結(jié)果從Y迷宮中得到自發(fā)交替百分比（見表5）。與模型組比較，血栓通組自發(fā)交替百分比明顯增多（P＜0.05），說明血栓通對慢性腦缺血大鼠空間記憶障礙有改善作用。

表5　Y迷宮中自發(fā)交替百分?jǐn)?shù)（±s）Tab.5　Spontaneous alternation percentage of Y-maze（±s）

表5　Y迷宮中自發(fā)交替百分?jǐn)?shù)（±s）Tab.5　Spontaneous alternation percentage of Y-maze（±s）

注：與模型組比較，*P＜0.05。

組別動物數(shù)穿過平臺次數(shù)（次）假手術(shù)組853.8±24.5*模型組954.5±34.9*他克林組（10 mL/kg）942.4±31.1*血栓通組（50 mg/kg）567.2±19.6*

3　討論

VD是指各種腦血管病引起腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合征，VD在歐洲和美國是僅次于阿茨海默氏病的第2位的最常見癡呆[7]。然而由于生存環(huán)境、生活方式、體質(zhì)差異等原因,在亞洲及許多發(fā)展中國家,VD的發(fā)病率超過了阿茨海默氏病[8-9]。隨著中國老齡化社會的到來，VD的發(fā)病率也在逐年提高，VD已經(jīng)成為威脅老年人身心健康的主要因素。因此筆者對VD的研究也具有十分重要的臨床及社會現(xiàn)實(shí)意義。

以往大量臨床及科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[10-16]證明VD的致病過程與多種因素相關(guān)，主要的致病機(jī)制包括：炎性、凋亡、氧化應(yīng)激、突觸結(jié)構(gòu)和功能異常、中樞膽堿能及單胺能系統(tǒng)神經(jīng)遞質(zhì)功能紊亂、能量代謝障礙等。目前臨床常用的癡呆治療藥物[17-21]有：抗氧化劑、神經(jīng)營養(yǎng)藥物、膽堿酯酶抑制劑、鈣通道阻滯劑、中醫(yī)中藥等，但這些藥物的長期治療效果有待進(jìn)一步論證。

本實(shí)驗(yàn)通過對SD大鼠兩側(cè)頸總動脈永久性結(jié)扎，得到VD模型。通過記錄給藥期間的死亡率和體質(zhì)量變化，考察血栓通對VD大鼠生存質(zhì)量的影響；采用水迷宮和Y迷宮的行為學(xué)方法，考察其對學(xué)習(xí)和記憶能力的影響。實(shí)驗(yàn)表明，血栓通組的水迷宮的穿越平臺次數(shù)及Y迷宮的自發(fā)交替百分比較模型組有明顯的提高，說明血栓通對血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)及記憶有明顯的改善作用。筆者的研究為注射用血栓通在VD中的臨床應(yīng)用提供了一定的科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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（本文編輯：馬英，滕曉東）

Study of the behavioral improvement effects of Xueshuantong for injection on vascular dementia rats

WANG Jin-xin,YANG Hong-yun,GUO Hong,CHAI Li-juan,ZHANG Yue,WANG Shao-xia,HU Li-min
（Institute of Traditional Chinese Medicine,Tianjin Key Laboratory of Chinese Medicine Pharmacology, Key Laboratory of Pharmacology of Traditional Chinese Medical Formulae,Ministry of Education, Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To research the behavioral improvement effects of Xueshuantong for injection(lypolized)in curing vascular dementia(VD)rats.[Methods]SD rats were randomly divided into 4 groups(n＝20 per group):Sham group,Model group,Tacrine (Control)group and Xueshuantong group.All groups in addition to sham group

a surgery called bilateral common carotid artery occlusion(BCCAO)to establish VD models.The survival quality of all rats was recorded.Water morris and Y-maze were taken to be behavioral test.[Results]Compared with model group,there was no statistical significance among all groups in death rate and weight’s change of rat.Compared with sham group,learning and memory ability of model group dropped with a reduced number of crossing the platform(P＜0.01)in water morris test.Compared with model group,Xueshuantong could increase the number of crossing the platform(P＜0.01)in water morris test which is the same as Tacrine group.Compared with model group,spatial memory ability of low dose group (Xueshuantong)obviously improved in Y-maze test.[Conclusion]Xueshuantong for injection(lypolized)could improve learning and memory ability of VD rats.

vascular dementia；behavioral test；water morris,；Xueshuantong for injection

R749.1

A

1672-1519（2016）11－0682－04

“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)課題（2012ZX09 101201－004）；天津市應(yīng)用基礎(chǔ)與前沿技術(shù)研究計(jì)劃（14JCYBJC28900）；廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃（14125008－2－5）。

王金鑫（1990－），男，碩士研究生，研究方向?yàn)槟X血管病及糖尿病并發(fā)癥。

王少峽，E－mail:wangshaoxia1@163.com。

（2016-04-26）