不同豬場豬偽狂犬病凈化效果與探討

王建輝 胡斐元 劉劍峰 王慧 魏恒 魏勇 姜寧（，江蘇省睢寧縣動物疫病預(yù)防控制中心 00；，南京農(nóng)業(yè)大學 004）

不同豬場豬偽狂犬病凈化效果與探討

王建輝1胡斐元1劉劍峰2王慧1魏恒1魏勇1姜寧1
（1，江蘇省睢寧縣動物疫病預(yù)防控制中心 221200；2，南京農(nóng)業(yè)大學 210014）

筆者通過開展不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場偽狂犬病野毒抗原和抗體監(jiān)測、凈化試驗，建立不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場偽狂犬病監(jiān)測方案和免疫程序，為不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場提供一個實用、經(jīng)濟、簡單的偽狂犬病毒凈化方案，以供生產(chǎn)參考。

豬偽狂犬??；凈化效果；試驗

豬偽狂犬病 （PR）是由偽狂犬病毒 （PRV）引起的家畜和多種野生動物共患傳染病，豬感染后主要引起母豬的繁殖障礙、流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎以及仔豬的高病死率，是生豬主要疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失[1]。PR凈化技術(shù)在歐美等發(fā)達國家比較成熟，甚至在美國和荷蘭等國家通過實施凈化根除計劃已成功地消滅該病[2]。我國也將PR列入優(yōu)先防治病種之一[3]，要求通過開展綜合凈化技術(shù)，有效控制該病的發(fā)生和流行。睢寧縣是全國生豬養(yǎng)殖、調(diào)運大縣，2012年生豬飼養(yǎng)量達到172.3萬頭，出欄119.7萬頭，年出欄500頭以上的場 （戶）達到185個，其中年出欄萬頭豬場6個，年出欄3000頭以上的豬場36個，生豬規(guī)模養(yǎng)殖比重達到87%。筆者通過開展不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場偽狂犬病野毒抗原和抗體監(jiān)測、凈化試驗，建立不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場偽狂犬病監(jiān)測方案和免疫程序，為不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場提供一個實用、經(jīng)濟、簡單的偽狂犬病毒凈化方案，以供生產(chǎn)參考。

1 試驗材料

1.1 試驗場所選擇

A場為母豬存欄2000頭以上豬場，其中種公豬50頭；B場為母豬存欄50～100頭豬場，其中種公豬10頭 （種公豬精液為種豬人工授精站提供）；C場為母豬存欄0～50頭豬場，其中種公豬5頭 （種公豬精液為種豬供精站提供）。

1.2 試劑與器材

試劑盒：豬偽狂犬病野毒抗原ELISA診斷試劑盒及豬偽狂犬病抗體ELISA診斷試劑盒均購自美國IDEXX生物科技有限公司。

疫苗：偽狂犬gE基因缺失弱毒疫苗。

設(shè)備：上?？迫AKHB ST-360酶標儀和IKA多 (單)通道移液器等。

2 試驗方法

2.1 野毒抗體流行病學調(diào)查

采集試驗場所有后備豬、種公豬以及能繁母豬的血液，分離血清，采用豬偽狂犬病野毒抗原ELISA診斷試劑盒及豬偽狂犬病抗體ELISA診斷試劑盒檢測豬場種豬群中豬偽狂犬病感染情況，并統(tǒng)計結(jié)果。

2.2 凈化方案建立與實施

根據(jù)豬偽狂犬病野毒抗體流行病學調(diào)查結(jié)果，根據(jù)感染程度不同將豬場分為3個級別：低風險豬場 （野毒感染率≤1%）、中風險豬場 （野毒感染率1～10%）以及高風險豬場（野毒感染率≥10%）。根據(jù)豬偽狂犬野毒不同感染強度制定不同的豬偽狂犬凈化措施如下。

2.2.1 低風險場 （野毒感染率≤1%）

豬場不使用疫苗免疫接種，采取血清學普查，如果發(fā)現(xiàn)血清學陽性立即隔離/淘汰該豬。

數(shù)值計算和實驗結(jié)果與第2節(jié)中的理論分析相符合，由于少模光纖的模場面積大于單模光纖，且傳輸?shù)恼荒Ｊ蕉嘤趩文９饫w，在干擾因素恒定的情況下使用少模光纖接收可以顯著提高光耦合效率，因此采用少模光纖進行信號光接收可以提高接收端的信噪比，增強鏈路的穩(wěn)定性，改善接收端性能.容易推測，提高模式數(shù)量，如采用四模光纖，能夠進一步增加系統(tǒng)的魯棒性，但相應(yīng)的在空間光通信系統(tǒng)中也必須換用基于四模光纖的EDFA和波分多路復(fù)用(Wavelength Division Multiplex，WDM)等.

2.2.2 中風險場 （野毒感染率1～10%）

按照 “首次檢測→隔離/淘汰→免疫→二次檢測→隔離/淘汰→再次檢測→淘汰”等步驟進行凈化。具體步驟如下。

（1）首次檢測。對全部種豬和后備豬作1次偽狂犬病野毒感染檢測，陰性者留作種用。

（2）隔離/淘汰。野毒感染檢測陽性者及時淘汰，或立即免疫基因缺失疫苗進行隔離飼養(yǎng)，間隔4～6周后加強免疫1次作為商品豬出欄。

（3）二次檢測。按照免疫程序每3個月免疫1次。間隔6個月再次進行一次野毒感染普檢，再次淘汰/隔離陽性豬。

（4）再次檢測。連續(xù)2次檢測結(jié)果均為陰性者，以后每12個月進行一次抽檢，每次每群抽檢30～60頭份，不足30頭者全部檢測。若抽檢出現(xiàn)野毒感染陽性，則全群檢測并淘汰/隔離陽性豬。

當減少到一定程度時 （野毒感染率≤1%），可按低風險場凈化方案操作處理。

2.2.3 高風險場 （野毒感染率≥10%）

（1）暫停向外供應(yīng)種豬。

（2）淘汰/隔離陽性種公豬、后備母豬及所有能繁母豬，按照免疫程序每3個月免疫一次陰性種公豬和后備母豬，并持續(xù)監(jiān)測陰性種公豬和后備母豬偽狂犬病野毒抗原和抗體水平，淘汰/隔離陽性種公豬和后備母豬，逐步建立不同養(yǎng)殖規(guī)模豬偽狂犬病野毒陰性繁殖群和生產(chǎn)群。每次樣品的采集、檢測、陽性豬的處理均應(yīng)在10d內(nèi)完成。

（3）根據(jù)豬場淘汰母豬的標準逐步淘汰陽性經(jīng)產(chǎn)母豬（年淘汰33.3%），由經(jīng)檢測為豬偽狂犬陰性后備母豬補欄。

（5）間隔6個月進行一次野毒感染普檢，每次每群抽檢30～60頭份，不足30頭者全部檢測。當減少到一定程度時（野毒感染率1～10%），按中度感染場凈化方案操作處理。

2.3 飼養(yǎng)管理

試驗期間豬場按正常生產(chǎn)流程管理，每周兩次消毒，每年全場滅鼠2次。

2.4 測定指標

測定試驗場種公豬、能繁母豬、后備母豬凈化前后偽狂犬病野毒陽性率和免疫抗體水平，試驗場凈化前后的生產(chǎn)成績進行比較，研究豬偽狂犬凈化后對豬場生產(chǎn)成績的影響。

3 結(jié)果與分析

3.1 凈化前豬偽狂犬普查結(jié)果

對3個試驗場中的所有種豬及后備豬進行采樣，豬偽狂犬野毒gE抗體檢測試劑盒 （IDEXX）進行g(shù)E抗體檢測，其檢測結(jié)果見表1。由表1可知，A場陽性率高達80%以上，為高風險豬場；B、C場陽性率在1～10%之間，為中風險豬場。

隨機抽取3個試驗場中10%的種公豬、能繁母豬、后備母豬的血樣，采用豬偽狂犬病抗體ELISA診斷試劑盒檢測豬群豬偽狂犬免疫抗體水平，其檢測結(jié)果見表2。由表2可知，3個試驗場的免疫抗體水平均較高，其中場A免疫抗體合格率達90%以上；B、C場達100%，說明3個試驗場均能按照規(guī)范要求對豬群進行豬偽狂犬病免疫，日常管理比較到位。

表1 凈化前種豬群豬偽狂犬野毒陽性檢測結(jié)果

表2 凈化前種豬群豬偽狂犬免疫抗體檢測結(jié)果

3.2 凈化實施1年后的豬偽狂犬野毒陽性檢測結(jié)果

根據(jù)普查結(jié)果確定豬偽狂犬凈化程序：A場使用高風險豬場凈化程序，即立即暫停向外供應(yīng)種豬，淘汰/隔離陽性種公豬、后備母豬及所有能繁母豬，按照免疫程序?qū)﹃幮苑N公豬和后備母豬進行免疫，免疫接種3個月后對豬只進行豬偽狂犬病野毒抗原和抗體水平檢測，根據(jù)檢測結(jié)果繼續(xù)對陰性種公豬和后備母豬進行免疫，直至野毒感染率減少到10%以下，按中低度感染場凈化方案操作處理，以此逐步建立規(guī)模豬場偽狂犬病野毒陰性繁殖群和生產(chǎn)群。B、C場使用中風險豬場凈化程序，淘汰/隔離全部陽性種公豬、后備母豬及能繁母豬，陰性者留作種用，立即按照免疫程序?qū)﹃幮苑N公豬和后備母豬進行免疫，免疫接種半年后對豬只進行豬偽狂犬病野毒抗原和抗體水平檢測，根據(jù)檢測結(jié)果繼續(xù)對陰性種公豬和后備母豬進行免疫，不斷淘汰陽性種公豬、后備母豬及能繁母豬，逐步建立不同養(yǎng)殖規(guī)模豬偽狂犬病野毒陰性繁殖群和生產(chǎn)群。由表3可知，B場和C場經(jīng)過2次淘汰，已經(jīng)全為陰性；A場經(jīng)過淘汰所有陽性種公豬、能繁母豬及后備母豬，并加強豬偽狂犬基因缺失苗后，實現(xiàn)了后備母豬及公豬偽狂犬野毒陽性率的大幅度降低。

3.3 凈化實施1年后豬偽狂犬免疫抗體檢測結(jié)果

凈化實施1年后，隨機采集3個試驗場10%的后備母豬，種公豬以及能繁母豬血樣進行豬偽狂犬免疫抗體檢測，其檢測結(jié)果見表4。由表4可知，A場種公豬經(jīng)3次凈化后，免疫抗體水平為100%，與凈化前持平；能繁母豬按照試驗方法中高風險場標準予以全部淘汰；后備母豬2次凈化后的免疫抗體水平為100%，比凈化前提高了7.23%；A場第3次凈化后免疫抗體水平為100%，比凈化前提高了6.38%。B、C場種公豬、能繁母豬和后備母豬經(jīng)2次凈化后的免疫抗體水平均為100%，均與凈化前的免疫抗體水平持平。

3.4 A場凈化實施1年半后偽狂犬病野毒檢測結(jié)果

在B、C場偽狂犬病野毒陽性率降為0之后，A場繼續(xù)按照 “首次檢測→隔離/淘汰→免疫→二次檢測→隔離/淘汰→再次檢測→淘汰”等步驟繼續(xù)進行凈化，凈化實施1年半后，采集全部種豬血樣進行檢測，檢測結(jié)果見表5，由表5可知，A場所有種豬均為陰性。

3.5 凈化前后豬場生產(chǎn)成績分析

按照既定的凈化方案逐步實施豬場的凈化后，A場能繁母豬配種率從90%提高到98%，提高8%；返情率下降2%；準產(chǎn)率提高5%；母豬窩產(chǎn)仔數(shù)平均增加1頭；窩弱仔數(shù)減少3頭；窩活仔數(shù)平均增加1頭；窩斷奶仔豬數(shù)增加1.5頭；產(chǎn)房成活率提高3%。B場能繁母豬配種率從92%提高到96%，提高4%；返情率下降6%；準產(chǎn)率提高4%；母豬窩產(chǎn)仔數(shù)平均增加1頭；窩弱仔數(shù)減少3頭；窩活仔數(shù)平均增加1頭；窩斷奶仔豬數(shù)增加1頭；產(chǎn)房成活率提高6%。C場能繁母豬配種率持平；返情率下降15%；準產(chǎn)率持平；母豬窩產(chǎn)仔數(shù)平均增加1頭；窩弱仔數(shù)減少1頭；窩活仔數(shù)平均增加1頭；窩斷奶仔豬數(shù)增加1頭；產(chǎn)房成活率提高2%。3個試驗場能繁母豬的生產(chǎn)繁殖性能均有明顯提高，凈化試驗達到了預(yù)期效果。

4 小結(jié)與討論

豬偽狂犬病 （PR）廣泛分布于世界范圍內(nèi)。特別是在豬群密集地區(qū)易發(fā)病。20世紀60年代以前，在東歐之外的地方?jīng)]有這種疾病，但在20世紀80年代末這種病已經(jīng)擴展到全球。最近幾十年來，由于不斷出現(xiàn)的各種控制措施和全國性的消除計劃推行，在世界上的一些地區(qū)，PR已實現(xiàn)在家豬中的凈化，比如歐洲的奧地利、塞浦路斯、捷克共和國、丹麥、芬蘭、德國、匈牙利、盧森堡、荷蘭、瑞典、瑞士、英國以及美洲的加拿大、新西蘭和美國[4]。然而至今為止PR仍然是我國養(yǎng)豬業(yè)最重要的疫病之一，尤其是2011年后出現(xiàn)的PRV突變強毒株，造成了嚴重的經(jīng)濟損失[5-7]。

表3 凈化實施1年后種豬群豬偽狂犬野毒陽性檢測結(jié)果

表4 凈化實施1年后豬群豬偽狂犬免疫抗體檢測結(jié)果

表5 A場凈化結(jié)束后種豬群豬偽狂犬野毒陽性檢測結(jié)果

表6 豬偽狂犬病毒凈化前后種豬群生產(chǎn)成績對比分析表

減群和免疫接種疫苗是防控以及凈化該病的主要措施。Ketusing N[8]等利用北美動物疾病傳播模型 （The North American Animal Disease Spread Model(NAADSM)的計算機仿真模型，對比了泰國兩省份不同策略 （包括減群、限制區(qū)域活動、疫苗免疫、豬群規(guī)模、檢測等）的豬偽狂犬凈化成效。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，減群對PRV凈化的影響最大，限制感染豬群的區(qū)域次之。最后評估結(jié)果是減群，聯(lián)合限制區(qū)域活動，配合感染豬群周邊16km內(nèi)的疫苗免疫是泰國兩省份進行PRV凈化的最有效手段。PRV疫苗主要包括自然弱毒疫苗、滅活疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗以及基因工程缺失苗等。其中基因缺失苗在豬偽狂犬病毒凈化中起著至關(guān)重要的作用，包括減少陽性種豬的散毒，區(qū)別疫苗和野毒株等。張錦余[9]等采取了 “篩查一撲殺，淘汰一持續(xù)監(jiān)測一凈化”及 “免疫、檢疫、消毒、隔離”等綜合措施成功凈化了一個600頭基礎(chǔ)母豬的種豬場。本試驗通過制定合理的免疫程序，定期進行疫苗免疫，監(jiān)測淘汰陽性豬，并做好妊娠母豬分娩前后及仔豬的日常飼養(yǎng)管理工作，加強豬場消毒，3個試驗場PR野毒平均陽性率下降76.3%。

豬偽狂犬野毒抗體檢測對豬偽狂犬的凈化尤為重要，因為偽狂犬gE抗體ELISA檢測試劑盒能區(qū)分偽狂犬病野毒和疫苗毒所產(chǎn)生的抗體，通過檢測可獲知豬是否被偽狂犬病野毒所感染。蔣建國等[10]針對廣西某偽狂犬病發(fā)病豬場，采用PRV gE抗體ELISA檢測試劑盒對該場免疫豬偽狂犬病基因缺失疫苗的豬群進行3次野毒感染檢測，經(jīng)過動態(tài)監(jiān)測、加強綜合防控和逐步淘汰措施，使該豬場成為偽狂犬病陰性豬場。本試驗應(yīng)用ELISA試劑盒檢測了試驗場的種公豬、能繁母豬和后備母豬，結(jié)果顯示：規(guī)模最大的A場PR野毒陽性率遠遠高于B、C場，分析原因：A場由于規(guī)模較大，豬場工作人員和生豬流動也較大，豬場日常管理存在較多漏洞；且由于A場豬精液來源于本場種公豬，精液質(zhì)量難以保證；相反，B、C場由于規(guī)模較小，人員和生豬流動較小，易于管理，且兩場的豬精液均來源于質(zhì)量有保證的公豬站，以上是造成A場PR野毒陽性率遠遠高于B、C場的主要原因。

試驗表明，在3個試驗場PR凈化后，哺乳仔豬成活率保持在95%以上，其中A場仔豬成活率提高3%，B場仔豬成活率提高6%，C場仔豬成活率提高2%，之所以會有較大的差距，分析原因：A場由于規(guī)模較大，各項生產(chǎn)指標的提高比較緩慢；B場由于凈化前成活率指標較低，所以隨著凈化的實施，仔豬成活率提升較快；C場由于凈化前成活率指標已經(jīng)較高，所以成活率提高不多，但可以看出，隨著凈化的實施，C場成活率指標已經(jīng)提高到一個較高的水平。說明不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場由于野毒感染程度不同，所采取的凈化方案不同，其凈化效果顯著，較適用于當前農(nóng)村不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式豬場偽狂犬病凈化工作。

任何一種疾病暴發(fā)都可以給豬場帶來嚴重危害，都會使豬場的經(jīng)濟受到重創(chuàng)。PRV與藍耳病毒 (PRRSV)、圓環(huán)病毒(PCV)、豬瘟病毒 (HCV)、口蹄疫病毒 (FMDV）等協(xié)同作用時，更易引起疫苗免疫失敗，所以控制與凈化好其他疫病是控制與凈化PR的基礎(chǔ)。因此，不同飼養(yǎng)規(guī)模和模式的豬場根據(jù)本場的疫病流行的特點和造成PR暴發(fā)的原因，結(jié)合生產(chǎn)實施采取綜合措施來控制與凈化PRV，才能真正做到清內(nèi)源和防外源，達到凈化目的。

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[10]蔣建國,張顯浩,李冰,等.廣西某集約化豬場豬偽狂犬病的監(jiān)測及凈化[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技,2014,39(4)：15-17.

項目資金來源：江蘇省三新工程項目SXGC[2015]054。