HPLC法同時測定壯藥冰糖草中野黃芩苷和蒙花苷的含量Δ

馬雯芳，鄧慧連，唐玉榮，蔡　毅（廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧　530001）

HPLC法同時測定壯藥冰糖草中野黃芩苷和蒙花苷的含量Δ

馬雯芳＊，鄧慧連，唐玉榮，蔡毅#（廣西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南寧530001）

目的：建立同時測定壯藥冰糖草中野黃芩苷、蒙花苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜法。色譜柱為Phenomenex C18，流動相為乙腈-0.05%磷酸（梯度洗脫），流速為1.0 ml/min，檢測波長為330 nm，柱溫30℃，進樣量為10 μl。結(jié)果：野黃芩苷、蒙花苷檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.015 8～0.316 8 mg/ml（r=0.999 9）、0.000 5～0.010 4 mg/ml（r=0.999 7）；精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗的RSD＜3%；加樣回收率分別為99.56%～102.38%（RSD=1.07%，n=6）、95.14%～98.29%（RSD=1.24%，n=6）。結(jié)論：該方法操作簡便，穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于冰糖草中野黃芩苷、蒙花苷含量的同時測定。

冰糖草；野黃芩苷；蒙花苷；高效液相色譜法

冰糖草，又稱野甘草、土甘草，為玄參科植物野甘草Scoparia dulcis Linn.的全草，是壯族地區(qū)常用的一味壯藥，其味甜，性涼，具有清熱毒、除濕毒、通氣通水道的功效［1］。目前，該藥已有生藥學(xué)［2］和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究［3］等相關(guān)報道，并收錄于《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》（第二卷）［1］。本研究以野黃芩苷、蒙花苷作為指標(biāo)成分，建立了用高效液相色譜法（HPLC）同時測定冰糖草中野黃芩苷和蒙花苷含量的方法，在現(xiàn)有的基礎(chǔ)上進一步補充、完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1　材料

1.1儀器

1100型HPLC儀，包括G-1311A高壓四元泵、G-1314A單波長檢測器、G-1379A在線真空脫氣機、G-1311A標(biāo)準(zhǔn)自動進樣器、G-1316A智能化柱溫箱、1100 Series色譜工作站（美國Agilent公司）；CG-16W型高速微量離心機（北京醫(yī)用離心機廠）；BP211D型電子分析天平（德國Sartorius公司）。

1.2試劑

野黃芩苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110842-201106，純度：92.1%）；蒙花苷對照品（上海源葉生物科技有限公司，批號：20110828，純度：97.0%）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純凈水。

1.3藥材

冰糖草（見表1）采自廣西各地，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)蔡毅教授鑒定為真品。

表1　冰糖草來源Tab 1　Results of recovery test

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件

色譜柱：Phenomenex C18（250 mm×4.60 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.05%磷酸（B），梯度洗脫（0～12 min，21%A；13～20 min，21%→28%A）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：330 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μl。

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液精密稱取野黃芩苷、蒙花苷對照品7.92、0.26 mg，分別置于25 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，搖勻，即得野黃芩苷、蒙花苷質(zhì)量濃度為0.316 8、0.010 4 mg/ml的單一對照品溶液。

2.2.2供試品溶液稱取樣品干燥粗粉0.30 g，精密稱定，置于100 ml錐形瓶中，精密加入50%甲醇20 ml，回流提取1 h，放冷，補足損失質(zhì)量，濾過，濾液備用。取上述濾液1 ml，以離心半徑為3 cm、10 000 r/min離心10 min，取上清液，即得。

2.3系統(tǒng)適用性試驗

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜。結(jié)果，理論板數(shù)以野黃芩苷和蒙花苷峰計分別＞3 000、5 000；分離度均＞1.5，各成分基線分離良好。色譜見圖1。

圖1　高效液相色譜圖A.野黃芩苷對照品；B.蒙花苷對照品；C.供試品；1.野黃芩苷；2.蒙花苷Fig 1　HPLC chromatogramsA.scutellarin control；B.linarin control；C.test sample；1.scutellarin；2. linarin

2.4線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.1”項下野黃芩苷、蒙花苷單一對照品溶液0.5、1、2、4、8、10 ml，分別置于10 ml量瓶中，加流動相定容，制成系列單一對照品溶液。精密量取上述系列單一對照品溶液各10 μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以野黃芩苷、蒙花苷質(zhì)量濃度（x，μg/ml）為橫坐標(biāo)、峰面積（y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程為y=2 605.71x－14.50（r= 0.999 9）、y=2 029.65x+0.41（r=0.999 7）。結(jié)果表明，野黃芩苷、蒙花苷檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.015 8～0.316 8、0.000 5～0.010 4 mg/ml。

2.5精密度試驗

取“2.2.1”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，野黃芩苷、蒙花苷峰面積的RSD分別為0.37%、0.78%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液（編號：1）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，野黃芩苷、蒙花苷峰面積的RSD分別為0.96%、2.24%（n=6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7重復(fù)性試驗

精密稱取同一批樣品（編號：1）適量，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，野黃芩苷、蒙花苷峰面積的RSD分別為2.82%、2.64%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.8加樣回收率試驗

取已知含量樣品（編號：1）6份，每份1 g，分別加入一定質(zhì)量的野黃芩苷、蒙花苷對照品，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結(jié)果見表2。

表2　加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）Tab 2　Results of recovery test（n=6）

2.9樣品含量測定

取3批樣品各適量，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算樣品含量，結(jié)果見表3。

表3　樣品含量測定結(jié)果（n=3）Tab 3　Results of content determination of samples（n=3）

續(xù)表3Continued tab 3

3　討論

清熱解毒類藥材常具有顯著的解熱藥理作用，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)野黃芩苷、蒙花苷常是解熱作用的物質(zhì)基礎(chǔ)。冰糖草臨床上具有顯著的解熱作用，在藥材主要有效成分尚未明確時，可以考慮將與清熱解毒作用密切相關(guān)的單體成分（野黃芩苷和蒙花苷）作為指標(biāo)，采用HPLC法進行質(zhì)量監(jiān)控，以補充現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)的不足。

冰糖草為一味常見的壯藥，分布于廣西各地，采收按傳統(tǒng)習(xí)慣為全年可采。由本研究結(jié)果可見，廣西各產(chǎn)地冰糖草藥材中野黃芩苷和蒙花苷的含量差異較大，分別在0.924 9～5.410 8 mg/g和0.043 2～0.235 7 mg/g之間；從不同采收季節(jié)及不同產(chǎn)地數(shù)據(jù)來看，規(guī)律不明顯。提示冰糖草最佳產(chǎn)地與采收季節(jié)應(yīng)綜合考慮臨床療效，才能得到可靠結(jié)果。

本試驗采用HPLC法，選擇Phenomenex C18為色譜柱、乙腈-0.05%磷酸梯度洗脫為流動相、330 nm為檢測波長，測定冰糖草中野黃芩苷和蒙花苷含量。結(jié)果表明，本方法操作簡便，穩(wěn)定性、重復(fù)性好，可用于冰糖草中野黃芩苷、蒙花苷含量的同時測定。

［1］廣西壯族自治區(qū)食品藥品監(jiān)督管理局.廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：第二卷［S］.南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2011：134.

［2］朱華，劉芯蕊，黃茂春，等.冰糖草的生藥學(xué)研究［J］.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，10（2）：63.

［3］馬雯芳，鄧慧連，蔡毅，等.壯藥冰糖草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)初步研究［J］.廣西中醫(yī)藥，2012，35（4）：51.

（編輯：張靜）

Simultaneous Determination of Scutellarin and Linarin in Zhuang Medicine Scoparia dulcis by HPLC

MA Wenfang，DENGHuilian，TANG Yurong，CAI Yi（School of Pharmacy，Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the simultaneous determination of scutellarin and linarin in Scoparia dulcis. METHODS：HPLC was performed on the column of Phenomenex C18with mobile phase of acetonitrile-0.05%phosphoric acid（gradient elution）at a flow rate of 1.0 ml/min，the detection wavelength was 330 nm，column temperature was 30℃，and the injection volume was 10 μl.RESULTS：The linear range was 0.015 8-0.316 8 mg/ml for scutellarin（r=0.999 9）and 0.000 5-0.010 4 mg/ml for linarin（r=0.999 7）；RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 3%；recoveries were 99.56%-102.38%（RSD=1.07%，n=6）and 95.14%-98.29%（RSD=1.24%，n=6），respectively.CONCLUSIONS：The method is simple with good stability and reprodicibility，and can be used for the simultaneous determination of scutellarin and linarin in S.dulcis.

Scoparia dulcis；Scutellarin；Linarin；HPLC

R927

A

1001-0408（2016）27-3845-03

10.6039/j.issn.1001-0408.2016.27.33

廣西“2011協(xié)同創(chuàng)新中心”項目（No.桂教科研〔2013〕20號）；廣西壯族自治區(qū)重點實驗室項目（No.桂科基字〔2014〕32號）；廣西重點學(xué)科（No.桂教科研〔2013〕16號）；廣西壯族自治區(qū)八桂學(xué)者項目

＊講師，博士。研究方向：中藥鑒定及質(zhì)量控制。電話：0771-3137585。E-mail：alswen@163.com

教授。研究方向：生藥鑒別。電話：0771-3137585。E-mail：caiyi118@163.com

（2015-07-18

2015-09-21）