應(yīng)用自由絲狀體培育法篩選壇紫菜良種

褚茂兵，肖徐進，陳高峰，黃景選，郭安托

（蒼南縣水產(chǎn)研究所，浙江　蒼南　325802）

應(yīng)用自由絲狀體培育法篩選壇紫菜良種

褚茂兵，肖徐進，陳高峰，黃景選，郭安托

（蒼南縣水產(chǎn)研究所，浙江蒼南325802）

壇紫菜人工養(yǎng)殖自20世紀(jì)70年代初引進浙江省蒼南縣以來，養(yǎng)殖技術(shù)到如今已有了根本性的變革，養(yǎng)殖面積也已大大擴展，但苗種培育方式卻一直沒有改進。種質(zhì)異化、退化嚴重，病害頻發(fā)，嚴重制約了蒼南縣壇紫菜產(chǎn)業(yè)經(jīng)濟可持續(xù)發(fā)展。近年來，我們應(yīng)用自由絲狀體貝殼移植法對壇紫菜良種進行擴種和篩選試驗，取得了較好的效果?，F(xiàn)總結(jié)如下。

1　材料和方法

1.1種菜

A為沿浦本地養(yǎng)殖菜；B為平潭養(yǎng)殖菜；C為南麂野生菜；D為象山養(yǎng)殖菜。挑選成熟度好、健壯無病無爛、不附生雜藻的藻體，要求單株能剪取20 cm2有效葉片。

1.2海水

無工業(yè)污染的蒼南縣近岸海水。比重1.018～1.021，pH值7.9～8.1。海水經(jīng)沉淀過濾后，在培養(yǎng)用的三角燒瓶中煮沸，冷卻后添加適量營養(yǎng)液待用。

1.3培養(yǎng)容器

主要有500、1 000、2 000、3 000和5 000 mL的三角燒瓶。先把瓶子洗凈，再加需要量的培養(yǎng)海水作煮沸消毒處理，煮沸后瓶口馬上包扎雙層濾紙，然后冷卻待用。

1.4營養(yǎng)液

在1 000 mL淡水中溶解40 g硝酸鉀、40 g硝酸鈉、10 g磷酸二氫鉀、20 g乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）、0.8 g氯化鈣、2.5 g硫酸亞鐵、0.2 g硫酸錳，加熱溶化煮沸，冷卻后加入VB10.1g、VB120.25 mg。在棕色瓶中存放，一個月重配1次。每1 000 mL培養(yǎng)海水中滴加營養(yǎng)液1 mL，作為標(biāo)準(zhǔn)量。

2　試驗過程

2.1種菜的去污處理

上午把挑選的每樣種菜各3株洗凈，11：00—14：00日曬3 h，日曬溫度15～17℃，14：00—16：00進行無菌洗刷。然后，把經(jīng)此處理后藻體上富含果孢子囊部分的葉片剪取放入果孢子采集瓶中。

2.2果孢子采集

把經(jīng)除污處理的種菜，加入消毒海水，置于500 mL三角燒瓶里采集果孢子。每天多次搖動瓶子，務(wù)必使放散出的孢子不堆集，并在第3或4天以及第7天分兩次收集孢子水，收集時要刷干凈采集瓶的瓶底和瓶壁，然后計數(shù)水中孢子量，以此計算放散量，去掉每樣各一瓶放散量最少的。

2.3自由絲狀體的培養(yǎng)

2.3.1去污效果檢查階段（附壁培養(yǎng)），1月中旬到2月下旬以每瓶（1 000 mL三角燒瓶）投放果孢子50萬～100萬的量，進行分瓶培養(yǎng)，A、B、D各為8瓶，C為4瓶。這期間，培養(yǎng)海水中營養(yǎng)鹽含量為標(biāo)準(zhǔn)的1/4，水溫控制為15～20℃，光強1 000～2 000 lx，光照時間為24 h，每天搖瓶2次。快者4～5 h，慢者7～10 d，可以觀察到紅色絲狀絲出現(xiàn)在瓶底，并逐漸布滿瓶底，最后擴展到瓶壁，果孢子投放濃度越高出現(xiàn)時間越早。約20 d左右開始，會逐漸發(fā)現(xiàn)有雜藻污染的瓶子，至2月下旬結(jié)束此階段。

2.3.2擴大培養(yǎng)階段（懸浮培養(yǎng)）2月下旬到4月下旬，附壁培養(yǎng)階段結(jié)束后，去除有污染的瓶子，刷壁收集共得各樣自由絲狀體濕重（下同）為A 15 g、B 14 g、C 3 g、D 11 g。以每0.5 g（C樣）或1 g（A、B、D樣）濕重自由絲狀體加1 000 mL培養(yǎng)海水為比例進行擴大培養(yǎng)：第1個月每半月加一次標(biāo)準(zhǔn)營養(yǎng)液，第2個月每周加一次標(biāo)準(zhǔn)營養(yǎng)液，水溫控制在20℃，光強2 000 lx，光照時間24 h，每天搖瓶3～4次，每次100下，每半月更換培養(yǎng)海水50%。

2.4自由絲狀體的貝殼移植及培養(yǎng)

4月下旬，取4樣自由絲狀體各50 g，用切碎機切碎，裝入噴壺，加入育苗海水，充分攪勻后，均勻噴灑到池底的貝殼上。噴灑后蓋光48 h，再弱光培育7 d時間，防止藻段浮起。移植后約半個月時間可見苗，至7月上旬其生長發(fā)育程度已與傳統(tǒng)于2—3月采果孢子的貝殼絲狀體同步。8月上旬開始縮光培育（與大眾同樣），培育條件也相同。如此同傳統(tǒng)育苗法相比，可節(jié)省2個月（30%）貝殼管理時間，洗殼總次數(shù)也減少了30%。

2.5秋季采苗（采殼孢子）和海上養(yǎng)成

9月中旬（比海區(qū)大眾統(tǒng)一采苗時間遲一天）下午，取已完全成熟的貝殼絲狀體下海刺激，刺激時間為當(dāng)日傍晚16：30至次日4：30。刺激完后，每樣貝殼各放一桶，分別加清潔海水50 L，并取貝殼（與試驗組同樣量）于一桶作對照，觀察發(fā)現(xiàn)7：00開始有殼孢子放散，9：00進入放散高峰期，尤以A、B為顯著，對照組水色無變化。10：30鏡檢孢子放散量，10×10倍下每視野孢子數(shù)：A為110，B為107，C為83，D為103，對照組為26。用染布法采殼孢子，每樣各采3行60張網(wǎng)簾（3 m×4 m），晾1小時掛入海區(qū)筏架。于10月上旬分苗完畢，每樣各一行分別養(yǎng)在高、中、低潮區(qū)。按照普通的方法進行養(yǎng)殖管理及收割。

3　試驗結(jié)果

3.1第一年試驗結(jié)果

3次收割各試驗組（另取各試驗組所在同排同時收割中產(chǎn)量較好的傳統(tǒng)養(yǎng)殖紫菜一行作對照組）總產(chǎn)量見表1。如此計算得：A增產(chǎn)（總產(chǎn)，下同）12.1%，B增產(chǎn)10.9%，C增產(chǎn)4.9%，D增產(chǎn)2.0%。通過第一年的自由絲狀體培育技術(shù)研究及應(yīng)用于生產(chǎn)，初步選定由沿浦海區(qū)（A）和平潭海區(qū)（B）挑選的種菜具有養(yǎng)殖優(yōu)勢，次年將在這兩個品種的試驗筏架上挑選出個體健壯的菜種進行重復(fù)擴大驗證試驗，并著重探索降低育苗成本的技術(shù)方法。

3.2第二年進一步篩選結(jié)果

次年1月中旬，在各試驗筏架上分別選取優(yōu)良種菜各3株，進行果孢子采集和自由絲狀體擴大培育。4月下旬進行自由絲狀體貝殼移植，A、B各12 000只。并在3月上旬，用從A、B筏架上選取的種菜各10 kg進行傳統(tǒng)育苗法采苗（春季采苗，下稱A（傳統(tǒng)）、B（傳統(tǒng)），各采40×667 m2（4萬只貝殼）。9月中旬統(tǒng)一下海刺激，采殼孢子。觀察殼孢子放散量（每千只貝殼加海水10 L，10×10倍下每視野孢子數(shù)）：A為116，B為122，A（傳統(tǒng)）為24，B（傳統(tǒng)）為27，對照組為21。采得網(wǎng)簾：A、B各6行，A（傳統(tǒng)），B（傳統(tǒng)）各10行。

計算結(jié)果，A：新育苗法可增產(chǎn)12.5%，傳統(tǒng)育苗法可增產(chǎn)5.6%；B：新育苗法可增產(chǎn)11.7%，傳統(tǒng)育苗法可增產(chǎn)4.8%。從A及B的試驗數(shù)據(jù)中可見：同樣種菜來源，采用新育苗法，其增產(chǎn)效果更加明顯。

表1　收獲情況表

4　小結(jié)

據(jù)有關(guān)研究報告和筆者這幾年的試驗生產(chǎn)結(jié)果表明，通過自由絲狀體進行紫菜生產(chǎn)和通過傳統(tǒng)貝殼絲狀體進行紫菜生產(chǎn)相比，其效果是相同的，甚至更好。而自由絲狀體法是通過單株采苗、純種培育，這樣就能很容易鑒別出品種的性狀是否優(yōu)良，從而使選種育種工作更容易取得進展。

壇紫菜果孢子萌發(fā)溫度范圍為7～26℃，在這一范圍內(nèi)，溫度在低限時萌發(fā)速度雖然比較慢，但萌發(fā)率比較高，病死率較低；而溫度傾向高限時，則萌發(fā)快，萌發(fā)率在短期內(nèi)也比較高，但病死率增加。因此具備控溫控光條件的，為大規(guī)模生產(chǎn)性育苗著想，可以在11—12月份就進行果孢子采集，也可以把經(jīng)過養(yǎng)成證明為良種的自由絲狀體通過試驗室常規(guī)條件培育，連續(xù)為下年育苗用，這也是本育種法的優(yōu)勢之一。另外海水比重在1.020～1.025，pH值在8.0～8.2之間最好。

采用同樣的種菜，用該育苗方法能比傳統(tǒng)育苗法有較大程度增加產(chǎn)量的結(jié)果，再加上其種菜需求量極少，育苗時間短，管理成本也可降低30%左右。因此，該法具有較大的推廣應(yīng)用價值。

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.11.016

（2015-09-14）