• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    焦化廢水中苯酚降解菌篩選及其降解特性

    2016-11-21 09:34:42鄧冬梅何勍孫宇飛梁秀芬萬美玲吳桂珍韋烽陳業(yè)祖
    關(guān)鍵詞:焦化苯酚菌液

    鄧冬梅,何勍,孫宇飛,梁秀芬,萬美玲,吳桂珍,韋烽,陳業(yè)祖

    (1.廣西科技大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院,廣西柳州545006;2.廣西糖資源綠色加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(廣西科技大學(xué)),廣西柳州545006)

    焦化廢水中苯酚降解菌篩選及其降解特性

    鄧冬梅1,2,何勍1,2,孫宇飛1,2,梁秀芬1,2,萬美玲1,2,吳桂珍1,2,韋烽1,2,陳業(yè)祖1,2

    (1.廣西科技大學(xué)生物與化學(xué)工程學(xué)院,廣西柳州545006;2.廣西糖資源綠色加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(廣西科技大學(xué)),廣西柳州545006)

    苯酚是焦化廢水中含量最多的難降解有毒有機(jī)物,篩選高效苯酚降解菌可為通過生物強(qiáng)化提高焦化廢水中苯酚的生物降解效率提供合適菌源.本研究以苯酚作為唯一碳源,通過富集馴化方法從柳鋼焦化廢水缺氧/好氧(A/O)生物處理系統(tǒng)的好氧池活性污泥中篩選分離出一株苯酚降解菌B2.根據(jù)16S rDNA序列分析,B2菌株和Staphylococcussciuri的16S rDNA序列相似性達(dá)100%,初步表明B2菌株為S.sciuri.進(jìn)一步通過單因素法考察pH、溫度和初始苯酚濃度對B2降解苯酚的影響,并通過響應(yīng)面法確定B2降解苯酚的最優(yōu)環(huán)境條件.結(jié)果表明:pH和濃度的交叉組合對B2菌株的苯酚降解能力影響最大,B2菌株在pH=7.5,溫度為30℃,初始苯酚濃度為2.0 g/L對苯酚的降解能力最高,降解率達(dá)到85%.

    焦化廢水;苯酚;降解菌;篩選;降解特性

    0 引言

    焦化廢水是由煤氣凈化、原煤高溫干餾和化工產(chǎn)品精制過程中產(chǎn)生的廢水,成分復(fù)雜且難降解,是最難處理的工業(yè)廢水之一[1-2].苯酚是焦化廢水中最主要的難降解有機(jī)物,占焦化廢水有機(jī)物的60%以上[3],而且苯酚毒性大會抑制其中氨氮、COD的降解,所以苯酚的降解對焦化廢水的達(dá)標(biāo)排放尤其重要.

    生物處理是目前焦化廢水的主要處理方式,也是苯酚降解的主要途徑[4].生物強(qiáng)化,是為了提高廢水生物處理系統(tǒng)的處理能力,而向該系統(tǒng)中投加從自然界中篩選的優(yōu)勢菌種或通過基因重組技術(shù)產(chǎn)生的高效菌種,以去除某一種或某一類有害物質(zhì)的方法[5],在提高焦化廢水中苯酚降解效率方面有很大應(yīng)用前景.為將生物強(qiáng)化應(yīng)用于焦化廢水中苯酚降解,苯酚降解菌的篩選十分關(guān)鍵.目前,國內(nèi)外已篩選獲得大量的苯酚降解菌,其中假單細(xì)胞菌屬微生物最多(Pseudomoma sp.)[6],其他微生物如洋蔥伯克霍爾德菌(BurkholderiacepaciaPW3)[7],A cinetobacter calcoacetic[8],Gulosibacter sp.YZ4[9],絲孢酵母菌屬(Trichosporon sp.)[10],糞產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes faecalis)[11]等微生物菌株也均可以降解苯酚.

    為達(dá)到穩(wěn)定高效的去除效果,篩選來自工作環(huán)境中降解菌及菌株間的復(fù)配已成為共識,為此需要更多苯酚降解菌提供復(fù)配菌源;環(huán)境因素也是實(shí)際處理工程中影響去除效果的主要因素.因此本研究希望通過篩選苯酚降解菌,考察環(huán)境因素對菌株降解苯酚特性的影響,為生物強(qiáng)化提高焦化廢水中苯酚降解效率提供菌源.

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1菌株

    菌株篩選自柳鋼焦化廢水A/O生物處理系統(tǒng)O池中活性污泥.

    1.1.2培養(yǎng)基

    富集培養(yǎng)基:每升培養(yǎng)基含蛋白胨0.5 g,K2HPO40.1 g,MgSO40.05 g,苯酚(根據(jù)需要加入),pH 7.2~pH 7.4,細(xì)菌富集馴化使用.

    分離培養(yǎng)基:每升培養(yǎng)基含K2HPO40.2 g,MgSO40.05 g,(NH4)2SO41.0 g,苯酚1.0 g,pH值在7.2~7.4之間,細(xì)菌分離使用[12].

    固體培養(yǎng)基為在液體培養(yǎng)基中投加15 g/L瓊脂.

    1.2實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1菌種的馴化和分離

    取10mL新鮮活性污泥至裝有90mL無菌水和玻璃珠的三角瓶中,手搖振蕩20min,將細(xì)胞分散.取5mL菌懸液于苯酚濃度為0 g/L的富集培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h.按同樣方法,每次取5mL連續(xù)轉(zhuǎn)接7次,苯酚濃度依次為0.5 g/L,0.7 g/L,0.8 g/L,1.0 g/L,1.2g/L,1.5 g/L和1.8 g/L,以對苯酚降解菌進(jìn)行富集和馴化.馴化后菌液經(jīng)在LB培養(yǎng)基上涂布稀釋分離及平板劃線純化后得到純菌株.將分離得到的純菌株接種于含有1.0 g/L苯酚的液體分離培養(yǎng)基中進(jìn)行搖床培養(yǎng)24 h,計(jì)算菌株對苯酚的降解率,得到一株可以在分離培養(yǎng)基中生長的苯酚降解菌株,編號為B2.將B2菌株保存在15%的甘油中,存于-60℃冰箱中待用.

    1.2.216SrDNA鑒定

    利用細(xì)菌鑒定通用引物27F和1 492R[13]對菌液進(jìn)行PCR擴(kuò)增,引物由上海生工有限公司合成,反應(yīng)體系和PCR程序如表1和表2所示,4℃保存PCR產(chǎn)物.1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,割膠純化PCR產(chǎn)物.將純化后的DNA送往上海立菲生物技術(shù)有限公司廣州分公司進(jìn)行序列測定;將序列在NCBI網(wǎng)頁上進(jìn)行BLAST同源性比對.

    表1 菌液PCR反應(yīng)體系Tab.1 The am plification system of bacteria PCR μL

    表2 菌液PCR反應(yīng)程序Tab.2 T he problem of bacteria PCR

    1.2.3菌株降解條件及降解特性研究

    利用液體分離培養(yǎng)基對B2菌株搖床培養(yǎng),以苯酚降解率為指標(biāo),利用單因素實(shí)驗(yàn)研究pH、溫度和初始苯酚濃度對菌株生長及降解苯酚的影響.

    表3 響應(yīng)面分析因素與水平Tab.3 Factors and levels of response surface analysis

    根據(jù)環(huán)境單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,用Design-Expert軟件生成3水平3因素組合條件(如表3所示),根據(jù)所生成的各組合條件,利用液體分離培養(yǎng)基搖床培養(yǎng)B2菌株,測定培養(yǎng)2 d后苯酚濃度,計(jì)算降解率,所得結(jié)果輸入Design-Expert軟件,生成分析.將B2菌在響應(yīng)面法所確定的最優(yōu)條件下進(jìn)行搖床培養(yǎng),每隔2 h測定苯酚濃度和菌液濃度,繪制生長曲線和苯酚降解曲線.

    1.2.4分析方法

    菌種濃度的測定采用比濁法,使用分光光度計(jì)于波長600 nm處測定其OD值[14].苯酚含量采用4-氨基安替比林分光光度法[15],使用分光光度計(jì)于波長510 nm處測定其OD值.

    2 結(jié)果與討論

    2.1苯酚降解菌篩選與鑒定

    富集馴化培養(yǎng)時(shí),在0.28 g/L~1.8 g/L的苯酚環(huán)境下,培養(yǎng)液均變混濁,培養(yǎng)后測定培養(yǎng)液里的苯酚濃度也有不同下降,初步說明搖瓶中的菌也具有苯酚降解特性.經(jīng)平板劃線分離,得到一株苯酚降解菌,命名為B2菌株,B2菌株在不含碳源的分離培養(yǎng)基中搖床培養(yǎng)48 h后,菌液變混濁,苯酚降解率達(dá)86%,說明B2菌株可以以苯酚為唯一碳源進(jìn)行生長.B2的16S rRNA序列與數(shù)據(jù)庫Genbank中的Staphylococcus sciuri序列相似性達(dá)100%,初步鑒定B2菌株為Staphylococcus sciuri.研究表明Staphylococcus sciuri是一種致病菌,常致尿路感染,對青霉素及頭孢類藥物有耐藥作用,屬于Staphylococcus屬,是最常見的化膿性菌球,是醫(yī)院交叉感染的重要來源[16].Mrozik[17]等發(fā)現(xiàn)Staphylococcus sciuri具備苯酚降解能力,但環(huán)境條件對其降解能力的影響探討較少.

    2.2 B2菌株降解苯酚單因素實(shí)驗(yàn)

    2.2.1pH對菌株苯酚降解率的影響

    如圖1所示,在30℃,初始苯酚濃度為2 000mg/L條件下,pH值在6.5~8.0間,B2對苯酚的降解率均保持在80%以上,其中pH值7.5時(shí),B2對苯酚的降解率最高.此外,在苯酚降解過程中培養(yǎng)液呈酸性(見圖2),這可能是因?yàn)锽2菌在降解苯酚過程中,需要將苯酚開環(huán)成為有機(jī)酸才能被利用.

    圖1 不同pH下B2菌株的苯酚降解率Fig.1 Degradation ratios of phenol of B2 at different pH

    圖2 降酚過程中B2菌液的pH變化Fig.2 Variation of pH in culture when phenol degraded by B2

    圖3 不同初始苯酚濃度下B2菌株的苯酚降解率Fig.3 Phenol degradation rate of B2 at different phenol concentrations

    2.2.2初始苯酚濃度對菌株苯酚降解率的影響

    由圖3可知,在30℃,pH值在7.5條件下,苯酚初始濃度由500mg/L增加到2 000mg/L,B2菌株對苯酚的降解率逐漸增大,苯酚濃度增加至2 500mg/L,B2菌株對苯酚的降解率略有下降.其中,苯酚濃度在2 000mg/L左右時(shí),B2菌株在48 h內(nèi)對苯酚降解率最高,達(dá)84.1%.

    2.2.3溫度對菌株苯酚降解率的影響

    由圖4可知,在初始苯酚濃度2 000mg/L,pH值在7.5條件下,在20℃~30℃之間,B2菌株的苯酚降解率隨溫度的增加而增加,大于30℃時(shí),降解率隨溫度的增加而降低,其中在溫度30℃,起始苯酚濃度為1 000mg/L時(shí),B2菌株的苯酚降解率最高達(dá)89%.

    2.2.4響應(yīng)面法優(yōu)化菌株苯酚降解條件

    17組試驗(yàn)的苯酚降解率結(jié)果列于表4中,可以看出:在設(shè)計(jì)的試驗(yàn)條件下,苯酚最大降解率達(dá)到82%,最小降解率為33%,表明不同的溫度、pH和初始苯酚濃度下,苯酚降解率有著很大差別.將表4中的結(jié)果導(dǎo)入Design-Expert軟件,固定一個(gè)環(huán)境因素的情況下,以另外2個(gè)環(huán)境因素為X和Y軸,以降解率為Z軸作圖,得到在不同降解條件下的苯酚降解率響應(yīng)曲面.如圖5所示,只有pH和濃度的關(guān)系凸面較為突出,說明pH和濃度的交叉組合對降解率較為顯著,而其余2個(gè)相互因素組合對降解率的影響不太明顯.由圖5還可知,B2菌株降解苯酚的最優(yōu)條件為:溫度30℃,pH值7.5,底物質(zhì)量濃度2.5 g/L.

    圖4 不同溫度下B2菌株的苯酚降解率Fig.4 Phenol degradation rate of B2 at different temperature

    表4 組合條件及對應(yīng)苯酚降解率Tab.4 Phenol degradation rate of B2 and corresponding environmental conditions

    2.2.5菌種生長曲線及降解特性

    如圖6所示,B2的生長與苯酚的降解幾乎是同步的.菌株處于對數(shù)生長期時(shí),細(xì)胞濃度快速增長,底物降解較快.在12 h左右開始進(jìn)入對數(shù)期,到26 h開始進(jìn)入穩(wěn)定期.降解62 h后,苯酚濃度從2 000mg/L降解到340mg/L,降解率達(dá)85%.而苯酚降解菌Rhodococcussp.在苯酚濃度為1 160mg/L時(shí),生長受到抑制,24 h才達(dá)到生長對數(shù)期[18].已報(bào)道的耐高濃度苯酚的苯酚降解菌Gulosibacter sp.YZ4[9],初始苯酚濃度為2 000mg/L時(shí),降解48 h后,僅有不到30%的苯酚得到降解,但所有的苯酚在76 h內(nèi)全部降解,和B2菌株的降解特性有很大差異.結(jié)果說明B2具有耐受高濃度苯酚的能力和高效苯酚降解能力,在生物強(qiáng)化處理焦化廢水等高濃度苯酚廢水處理中有一定應(yīng)用前景,為此,需進(jìn)一步優(yōu)化生物強(qiáng)化條件和考察其對實(shí)際廢水的處理效果.此外,B2菌株的特殊降解特性說明B2菌株的降解機(jī)理也有進(jìn)一步研究價(jià)值.

    圖5 苯酚降解對環(huán)境因素的響應(yīng)圖Fig.5 Phenol degradation for responsesurface optimization versus different environmental factors

    圖6 菌株B2生長過程與苯酚降解過程的關(guān)系Fig.6 Growth curve and phenol degradation of strain B2

    3 結(jié)論

    1)經(jīng)過以苯酚為唯一碳源,從柳鋼焦化廢水中篩選出了一株具有降解苯酚能力的菌株B2,經(jīng)16S rDNA測序鑒定為Staphylococcus sciuri;

    2)通過環(huán)境單因素對B2降解效率的影響以及響應(yīng)面法優(yōu)化條件研究,確定B2降解苯酚的最優(yōu)條件為:溫度30℃,pH值為7.5,苯酚初始濃度2.0 g/L,該條件下?lián)u床培養(yǎng)62 h后,苯酚降解率達(dá)85%.

    [1]趙宏璽.焦化廢水水質(zhì)特征及處理技術(shù)綜述[J].山西建筑,2007,33(28):198-199.

    [2]張萬輝,韋朝海,晏波,等.焦化廢水中溶解性有機(jī)物組分的特征分析[J].環(huán)境化學(xué),2012,31(5):702-707.

    [3]任源,韋朝海,吳超飛,等.焦化廢水水質(zhì)組成及其環(huán)境學(xué)與生物學(xué)特性分析[J].環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào),2007,27(7):1094-1100.

    [4]郝祥超,王良,張俊華,等.A/O工藝在高氨氮廢水中的應(yīng)用[J].環(huán)境科學(xué)與管理,2010,35(7):82-84.

    [5]HERRERO M,STUCKEY DC.Bioaugmentation and its Application in Wastewater Treatment:a Review[J].Chemosphere,2015,140:119-128.

    [6]LI Y,LI J,WANY C,et al.Growth Kinetics and Phenol Biodegradation of Psychrotrophic Pseudomonas putida LY1[J].Bioresource Technology,2010,101(17):6740-6744.

    [7]EI-SAYED WS,IBRAHIM MK,ABU-SHADY M,et al.Isolation and Characterization of Phenol-Catabolizing Bacteria from a Coking Plant[J].Bioscience Biotechnology and Biochemistry,2003,67(9):2026-2029.

    [8]KARIGAR C,MAHESH A,NAGENAHALLI M,et al.Phenol Degradation by Immobilized Cells of Arthrobacter Citreus[J].Biodegradation,2006,17(1):47-55.

    [9]ZHAI Z,WANG H,YAN S,et al.Biodegradation of Phenol at High Concentration by a Novel Bacterium:Gulosibacter sp.YZ4[J].Journal of Chemical Technology and Biotechnology,2012,87(1):105-111.

    [10]YOTOVA L,TZIBRANSKA I,TILEVA F,et al.Kinetics of the Biodegradation of Phenol in Wastewaters from the Chemical Industry by Covalently Immobilized Trichosporon Cutaneum C ells[J].Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology,2009,36(3):367-372.

    [11]SANDHU A,HALVERSON LJ,BEATTIE GA.Identification and Genetic Characterization of Phenol-Degrading Bacteria from Leaf M icrobial Communities[J].Microbial Ecology,2009,57(2):276-285.

    [12]陳春,李文英,吳靜文,等.焦化廢水中苯酚降解菌篩選及其降解性能[J].環(huán)境科學(xué),2012,33(5):1652-1656.

    [13]DEVEREUV R,WILKINSON SS.Amplification of Ribosomal RNA Sequences,Molecular Microbial Ecology Manual[M].2nd ed.Netherlands:Kluwer Academic Publishers Press,2004.

    [14]黃秀梨,辛明秀.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].2版.北京:高等教育出版社,2008.

    [15]李亞新,趙晨紅.紫外分光光度法測定焦化廢水的主要污染物[J].中國給水排水,2001,17(1):54-56.

    [16]THOMAS LC,GIDDING HF,GINN AN,et al.Development of a Real-Time Staphylococcus aureus and MRSA(SAM)PCR for Routine Blood Culture[J].Journal of Microbiological Methods,2007,68(2):296-302.

    [17]MIOZIK A,LABUZEK S.A Comparison of Biodegradation of Phenol and Homologous Compounds by Pseudomonas vesicularis and Staphylococcus sciuristrains[J].Acta Microbiologica Polonica,2002,51(4):367-378.

    [18]張玉秀,蒙小俊,柴團(tuán)耀.苯酚降解菌紅球菌(Rhodococcussp.)P1的鑒定及其在焦化廢水中的應(yīng)用[J].微生物學(xué)報(bào),2013,53(10):1117-1124.

    (學(xué)科編輯:黎婭)

    Screening and characterization of phenol degrading bacteria from the coking wastewater

    DENG Dong-mei1,2,HE Qing1,2,SUN Yu-fei1,2,LIANG Xiu-fen1,2, WAN Mei-ling1,2,WU Gui-zhen1,2,WEI Feng1,2,CHEN Ye-zu1,2
    (1.School of Biological and Chemical Engineering,Guangxi University of Science and Technology,Liuzhou 545006,China;2.Guangxi Key Laboratory of Green Processing of Sugar Resources(Guangxi University of Science and Technology),Liuzhou 545006,China)

    Phenol was the highest content of toxic and biorefractory organics in coking wastewater.Screening of high efficient phenol-degrading bacteria could provide suitable bacteria for the treatment of coking wastewater by bioaugmenting.In this study,a phenol degrading strain B2 which took phenol as only carbon source was separated and screened by enrichment culture from activated sludge of coking effluent A/O biological treatment system of Liuzhou Iron and Steel.By colony morphology,gram stain,normal physiological and biochemical reactions and 16S rDN A sequencing,the strain B2 was identified as Staphylococcus sciuri.Single factor experiment was then used to investigate the influence of environmental conditions such as pH,temperature and the initial concentration of phenol on phenol degradation ability of B2.Response surface analysis was used further to optimize these environmental conditions.The results showed that cross-over of pH and phenol concentration had the most important effect on the degradation of phenol of B2 and the best condition for phenol-degrading ability of B2was30℃,pH 7.5 and 2.5 g/L for initial concentration of phenol.In the optimum conditions,the degradation rate of phenol was85%when the culture time was62 h.

    coking effluent;phenol;degrading strain;screen;degradation

    X172;Q939.97

    A

    2095-7335(2016)04-0093-06

    10.16375/j.cnki.cn45-1395/t.2016.04.017

    2016-07-15

    廣西自然科學(xué)基金(2014GXNSFBA118249);2016年廣西國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃(201610594042);廣西高等學(xué)校高水平創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)及卓越學(xué)者計(jì)劃資助(桂教人(2014)7號);廣西高等科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目(YB2014201)資助.

    鄧冬梅,博士,副教授,研究方向:水污染處理,E-mail:deng-dongmei@163.com.

    猜你喜歡
    焦化苯酚菌液
    多糖微生物菌液對油菜吸收養(yǎng)分和土壤氮磷淋失的影響
    毛細(xì)管氣相色譜法測定3-氟-4-溴苯酚
    云南化工(2020年11期)2021-01-14 00:50:54
    Bonfire Night
    一種O-A-A-O工藝在焦化廢水處理中的應(yīng)用
    昆鋼科技(2020年6期)2020-03-29 06:39:44
    鼠傷寒沙門氏菌回復(fù)突變試驗(yàn)中通過吸光度值測定菌液濃度的方法研究
    “綠豆軍團(tuán)”成長記
    高爐噴吹焦化除塵灰生產(chǎn)實(shí)踐
    山東冶金(2019年1期)2019-03-30 01:35:18
    焦化HPF脫硫液提鹽系統(tǒng)介紹
    山東冶金(2018年5期)2018-11-22 05:12:26
    負(fù)載型催化劑(CuO/TUD-1,CuO/MCM-41)的制備及其在一步法氧化苯合成苯酚中的應(yīng)用
    復(fù)合微生物菌液對黃瓜生長和抗病蟲性效應(yīng)研究
    上海蔬菜(2015年2期)2015-12-26 05:03:40
    久久伊人香网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 十八禁人妻一区二区| 在线播放国产精品三级| 一本一本综合久久| 白带黄色成豆腐渣| 神马国产精品三级电影在线观看 | 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 色尼玛亚洲综合影院| 桃红色精品国产亚洲av| 国产高清激情床上av| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲精品美女久久av网站| 亚洲国产精品sss在线观看| 91九色精品人成在线观看| 午夜日韩欧美国产| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 麻豆久久精品国产亚洲av| 日本a在线网址| 老司机午夜福利在线观看视频| 村上凉子中文字幕在线| 级片在线观看| 十八禁人妻一区二区| 欧美不卡视频在线免费观看 | 精华霜和精华液先用哪个| 免费看a级黄色片| 欧美性长视频在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产精品九九99| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲精品中文字幕在线视频| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产黄a三级三级三级人| av福利片在线观看| 久久这里只有精品19| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 国产1区2区3区精品| 色尼玛亚洲综合影院| 一本久久中文字幕| 久久久国产精品麻豆| 亚洲国产精品999在线| 国产99久久九九免费精品| 亚洲欧美激情综合另类| 午夜日韩欧美国产| 免费看a级黄色片| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产野战对白在线观看| 美女黄网站色视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 最新在线观看一区二区三区| 国产精品,欧美在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 日本一区二区免费在线视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品影院久久| 亚洲天堂国产精品一区在线| 桃色一区二区三区在线观看| 后天国语完整版免费观看| 久热爱精品视频在线9| 首页视频小说图片口味搜索| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲人成77777在线视频| 精品日产1卡2卡| 久久久精品欧美日韩精品| 悠悠久久av| 国产精品亚洲一级av第二区| 99热这里只有是精品50| 午夜免费激情av| ponron亚洲| 精品国产美女av久久久久小说| 99国产精品99久久久久| 成人国产一区最新在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 51午夜福利影视在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 丝袜人妻中文字幕| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲成人精品中文字幕电影| 村上凉子中文字幕在线| 伦理电影免费视频| 国模一区二区三区四区视频 | 国产精品人妻久久久久久| 99久久精品国产国产毛片| 日本av手机在线免费观看| 一区福利在线观看| 我的老师免费观看完整版| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 一级毛片我不卡| 3wmmmm亚洲av在线观看| 看免费成人av毛片| 99精品在免费线老司机午夜| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 能在线免费看毛片的网站| av在线观看视频网站免费| 亚洲一区二区三区色噜噜| 欧美成人精品欧美一级黄| 少妇的逼好多水| 国产探花极品一区二区| 色噜噜av男人的天堂激情| 两个人的视频大全免费| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲人与动物交配视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 成人亚洲精品av一区二区| 美女高潮的动态| 春色校园在线视频观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久九九热精品免费| 日韩强制内射视频| 免费观看人在逋| 亚洲国产精品成人综合色| 久久久成人免费电影| 免费av不卡在线播放| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 欧美不卡视频在线免费观看| 高清午夜精品一区二区三区 | 高清毛片免费看| 我的老师免费观看完整版| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 两个人视频免费观看高清| 久久久久九九精品影院| 午夜激情欧美在线| 人妻久久中文字幕网| 中文字幕免费在线视频6| 午夜精品国产一区二区电影 | 久久国产乱子免费精品| 99热只有精品国产| 九色成人免费人妻av| 亚洲18禁久久av| 中国美女看黄片| 99热全是精品| 久久久精品大字幕| www.av在线官网国产| 亚洲人成网站在线播| 国产伦一二天堂av在线观看| 观看美女的网站| 我的女老师完整版在线观看| 黄片无遮挡物在线观看| 在线观看66精品国产| 又爽又黄无遮挡网站| 精品人妻视频免费看| 日本成人三级电影网站| 国产精品1区2区在线观看.| 日韩 亚洲 欧美在线| 一级毛片我不卡| 亚洲精品久久国产高清桃花| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 日本欧美国产在线视频| 久久午夜亚洲精品久久| av女优亚洲男人天堂| 乱人视频在线观看| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲四区av| 97超视频在线观看视频| 亚洲av.av天堂| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚州av有码| 亚洲18禁久久av| 国产精品一区二区三区四区久久| www日本黄色视频网| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲第一区二区三区不卡| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 亚洲精品456在线播放app| 高清毛片免费观看视频网站| 一本久久精品| 99久久无色码亚洲精品果冻| 在线观看美女被高潮喷水网站| 草草在线视频免费看| 26uuu在线亚洲综合色| avwww免费| 悠悠久久av| 亚洲av中文av极速乱| 夫妻性生交免费视频一级片| 少妇熟女aⅴ在线视频| 中文字幕av在线有码专区| 久久鲁丝午夜福利片| 婷婷精品国产亚洲av| 色5月婷婷丁香| 欧美人与善性xxx| 欧美人与善性xxx| 久久人人爽人人片av| 国产精品三级大全| 国产 一区精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲综合色惰| 舔av片在线| 嫩草影院新地址| 99久久成人亚洲精品观看| 日韩欧美国产在线观看| 免费av观看视频| 99视频精品全部免费 在线| 久久99精品国语久久久| 色吧在线观看| 国产一区二区激情短视频| 亚洲精品色激情综合| 国产私拍福利视频在线观看| avwww免费| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久久久网色| 婷婷六月久久综合丁香| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美一区二区国产精品久久精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 精品国内亚洲2022精品成人| 国产成人一区二区在线| av.在线天堂| 99久久精品热视频| 久久久精品欧美日韩精品| a级毛片免费高清观看在线播放| 成人毛片a级毛片在线播放| 91av网一区二区| 国产精品无大码| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 欧美人与善性xxx| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 岛国毛片在线播放| 身体一侧抽搐| 一级黄色大片毛片| 波多野结衣高清无吗| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 有码 亚洲区| av视频在线观看入口| 久99久视频精品免费| 直男gayav资源| 亚洲在线自拍视频| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 国产精品一及| 天美传媒精品一区二区| 精品无人区乱码1区二区| 久久久久久久久中文| 悠悠久久av| 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩人妻高清精品专区| 日本色播在线视频| 国产精品一区二区三区四区久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲经典国产精华液单| 国产亚洲精品av在线| 久久99精品国语久久久| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产一级毛片在线| 直男gayav资源| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产精品免费一区二区三区在线| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美潮喷喷水| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产精品久久久久久精品电影小说 | 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 欧美日韩在线观看h| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 别揉我奶头 嗯啊视频| 我的老师免费观看完整版| 亚洲最大成人av| 老司机福利观看| 人体艺术视频欧美日本| 一边亲一边摸免费视频| 51国产日韩欧美| 婷婷亚洲欧美| 我的女老师完整版在线观看| 一进一出抽搐动态| 亚洲在久久综合| 精品国产三级普通话版| 亚洲av第一区精品v没综合| 精品无人区乱码1区二区| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 深夜a级毛片| 黄色视频,在线免费观看| 亚洲av免费高清在线观看| 亚洲国产精品国产精品| 一进一出抽搐gif免费好疼| 欧美又色又爽又黄视频| av在线播放精品| 色尼玛亚洲综合影院| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲精品色激情综合| 亚洲七黄色美女视频| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 久久久国产成人免费| 麻豆成人av视频| 久久久久久久久大av| 亚洲最大成人手机在线| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 精品一区二区三区视频在线| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久99蜜桃精品久久| 国模一区二区三区四区视频| 中文资源天堂在线| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美成人精品欧美一级黄| 在线a可以看的网站| 男女边吃奶边做爰视频| 免费看日本二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 美女内射精品一级片tv| 精品久久久久久久久久免费视频| 久久久午夜欧美精品| 美女内射精品一级片tv| 国产成人午夜福利电影在线观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产成人影院久久av| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美一区二区亚洲| 日韩欧美国产在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美zozozo另类| 精品久久久噜噜| 久久99精品国语久久久| 国产精品久久久久久av不卡| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产免费一级a男人的天堂| 青春草亚洲视频在线观看| 成人鲁丝片一二三区免费| 伦理电影大哥的女人| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美另类亚洲清纯唯美| 成人三级黄色视频| 午夜福利成人在线免费观看| 99久久九九国产精品国产免费| 亚洲无线在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 午夜a级毛片| 亚洲av不卡在线观看| 国产av在哪里看| 最近手机中文字幕大全| 国产成人精品久久久久久| 听说在线观看完整版免费高清| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 男人舔女人下体高潮全视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 99在线视频只有这里精品首页| 免费av观看视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 免费看av在线观看网站| 国产乱人视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 人人妻人人看人人澡| 国产一区二区在线av高清观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 精品久久久久久久久亚洲| 一级毛片久久久久久久久女| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲五月天丁香| 99热精品在线国产| 亚洲无线在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产黄a三级三级三级人| 黄色日韩在线| 嫩草影院新地址| 亚洲无线观看免费| 91麻豆精品激情在线观看国产| 日韩欧美国产在线观看| 久久久久久伊人网av| 久久久久性生活片| 国产 一区精品| 性色avwww在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 黄色视频,在线免费观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲精品色激情综合| 少妇人妻精品综合一区二区 | 亚洲av男天堂| 亚洲最大成人手机在线| 99视频精品全部免费 在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 中文资源天堂在线| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 深夜精品福利| 日本三级黄在线观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 一本久久精品| 中文资源天堂在线| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲高清免费不卡视频| 观看免费一级毛片| 亚洲精品成人久久久久久| 日韩高清综合在线| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 成人三级黄色视频| 一本久久精品| 中文字幕久久专区| 久久久午夜欧美精品| 最近中文字幕高清免费大全6| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 男的添女的下面高潮视频| 成人漫画全彩无遮挡| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲一区二区三区色噜噜| 中出人妻视频一区二区| 国产亚洲精品久久久com| 伦精品一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 人妻夜夜爽99麻豆av| 此物有八面人人有两片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 免费看美女性在线毛片视频| av黄色大香蕉| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产三级中文精品| www.色视频.com| 99在线人妻在线中文字幕| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产亚洲欧美98| 亚洲三级黄色毛片| 尾随美女入室| 国产精品1区2区在线观看.| 欧美+亚洲+日韩+国产| 97超视频在线观看视频| 一区二区三区免费毛片| 国产69精品久久久久777片| 国产日韩欧美在线精品| 欧美日韩国产亚洲二区| 国产综合懂色| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 免费人成在线观看视频色| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产爱豆传媒在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲精品456在线播放app| 成人欧美大片| 寂寞人妻少妇视频99o| 91麻豆精品激情在线观看国产| 嫩草影院入口| 亚洲欧美精品综合久久99| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲无线观看免费| 国语自产精品视频在线第100页| 国产老妇女一区| 深夜a级毛片| 超碰av人人做人人爽久久| 国产单亲对白刺激| 特级一级黄色大片| 国产三级中文精品| 亚洲无线在线观看| 一级av片app| 中文字幕av在线有码专区| 一进一出抽搐gif免费好疼| 高清日韩中文字幕在线| 毛片一级片免费看久久久久| 国产乱人偷精品视频| 成年版毛片免费区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 免费大片18禁| 国产视频内射| 色综合色国产| 精品久久久久久久久亚洲| 免费大片18禁| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产激情偷乱视频一区二区| 一级黄色大片毛片| 搡女人真爽免费视频火全软件| 深爱激情五月婷婷| 老司机福利观看| 日韩人妻高清精品专区| 久久午夜亚洲精品久久| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 欧美日韩国产亚洲二区| 成人三级黄色视频| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲av不卡在线观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 我的女老师完整版在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜a级毛片| 夜夜爽天天搞| 久久人妻av系列| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久久精品欧美日韩精品| 一本精品99久久精品77| 两个人的视频大全免费| 天堂√8在线中文| 韩国av在线不卡| 日本黄大片高清| 国产视频首页在线观看| 女人被狂操c到高潮| 麻豆一二三区av精品| 只有这里有精品99| av视频在线观看入口| 精品久久久久久久久久免费视频| 亚洲成人久久性| 最近视频中文字幕2019在线8| 男插女下体视频免费在线播放| 中文资源天堂在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 日韩大尺度精品在线看网址| 色噜噜av男人的天堂激情| 69av精品久久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 九九在线视频观看精品| 九九热线精品视视频播放| 干丝袜人妻中文字幕| 黄色配什么色好看| 天堂√8在线中文| 欧美色欧美亚洲另类二区| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 国产精品一及| 国产成人影院久久av| 成人欧美大片| 最新中文字幕久久久久| 亚洲成人久久爱视频| 午夜视频国产福利| 哪个播放器可以免费观看大片| 69人妻影院| 日本三级黄在线观看| 精品熟女少妇av免费看| 草草在线视频免费看| 性色avwww在线观看| 看片在线看免费视频| 亚洲精品成人久久久久久| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产久久久一区二区三区| 伦理电影大哥的女人| 亚洲av.av天堂| 男插女下体视频免费在线播放| 亚洲丝袜综合中文字幕| 欧美日韩在线观看h| 91久久精品国产一区二区成人| 欧美高清性xxxxhd video| 女同久久另类99精品国产91| 97超视频在线观看视频| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 男人舔奶头视频| 欧美在线一区亚洲| 国产在视频线在精品| 九九在线视频观看精品| 国产精品三级大全| 99热这里只有是精品在线观看| 日韩国内少妇激情av| 深夜a级毛片| 综合色av麻豆| 欧美3d第一页| h日本视频在线播放| 欧美精品国产亚洲| 男人狂女人下面高潮的视频| 在线观看66精品国产| 久久久久久久久久黄片| 国产视频内射| 在线国产一区二区在线| 午夜a级毛片| 中国美白少妇内射xxxbb| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲四区av| 97超碰精品成人国产| 日本与韩国留学比较| 综合色丁香网| 啦啦啦啦在线视频资源| 嘟嘟电影网在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 日韩三级伦理在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲成av人片在线播放无| 波多野结衣巨乳人妻| 日韩三级伦理在线观看| 欧美丝袜亚洲另类| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 97超视频在线观看视频| a级毛色黄片| 婷婷精品国产亚洲av| 精品免费久久久久久久清纯| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲国产精品sss在线观看| 美女 人体艺术 gogo| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品人妻视频免费看| 一本久久精品| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 色综合亚洲欧美另类图片| 美女高潮的动态| 精品人妻视频免费看| 男人狂女人下面高潮的视频| 成人毛片60女人毛片免费| 午夜福利视频1000在线观看|