現(xiàn)代色譜技術(shù)在中藥檢驗(yàn)中的運(yùn)用

梁國嬪　吳拾保

摘要：中藥檢驗(yàn)的目的在于保證藥物安全性及有效性，主要技術(shù)手段為色譜技術(shù)。目前，色譜研究不斷深入，檢驗(yàn)及分離技術(shù)不斷改進(jìn)、完善，各種現(xiàn)代化聯(lián)機(jī)檢測及色譜方法逐漸成熟，因其微量檢測、高速、自動(dòng)化、高分辨等特點(diǎn)發(fā)揮較大作用。本文主要研究中藥檢驗(yàn)中HPLC、GC、SFE、HPCE等現(xiàn)代技術(shù)的具體運(yùn)用。

關(guān)鍵詞：色譜技術(shù)；中藥檢驗(yàn)；運(yùn)用

現(xiàn)階段，中藥制劑不斷更新，藥物質(zhì)量的相關(guān)控制有待加強(qiáng)，實(shí)踐時(shí)必須結(jié)合現(xiàn)代化技術(shù)，提高檢驗(yàn)分析水平。色譜技術(shù)是中藥檢驗(yàn)中現(xiàn)代化技術(shù)的重要體現(xiàn)，是重要的研究技術(shù)平臺。以下分別從HPLC、GC、SFE、HPCE四方面研究中藥檢驗(yàn)中色譜技術(shù)的運(yùn)用。

1 中藥檢驗(yàn)中運(yùn)用HPLC技術(shù)

HPLC廣泛運(yùn)用于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及新藥研究，檢驗(yàn)精密度高，具有靈敏、重現(xiàn)性好、快速等優(yōu)點(diǎn)。傳統(tǒng)上多使用紫外檢測器，但紫外檢測器有一定弊端，僅能對有紫外吸收性的成分進(jìn)行檢測，故應(yīng)用受限。ELSD為通用檢測器，可用于檢測非揮發(fā)性組分，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)檢測的不足[1]。將HPLC與ELSD聯(lián)用，有效拓寬了檢測范圍，提高分離效率，能用來檢驗(yàn)中藥成分，如苷類、樹脂、脂類、糖類、氨基酸等。應(yīng)用HPLC時(shí)，經(jīng)色譜柱分離得到的組分可隨流動(dòng)相直接進(jìn)入霧化器，霧化形成霧粒進(jìn)入蒸發(fā)器，溶劑蒸發(fā)后，待檢測成分顆粒通過狹窄光束時(shí)可引起光散射，光電倍增管收集轉(zhuǎn)為電信號，且電信號的響應(yīng)值由待檢測成分質(zhì)粒大小及數(shù)量所決定。檢驗(yàn)前，流動(dòng)相已經(jīng)被蒸發(fā)，使用ELSD既能避免溶劑峰干擾，且流動(dòng)相的系統(tǒng)溫度對其無影響，梯度洗脫時(shí)基線較平穩(wěn)，靈敏度升高，特別適用于一次進(jìn)樣中梯度洗脫分析組分比較復(fù)雜的成分。

定量測定人參皂苷元時(shí)，使用ELSD檢測器，對其進(jìn)行梯度洗脫，其檢驗(yàn)分離性及靈敏度較HPLC-UV佳。采用HPLC-ELSD、HPLC-UV分別測定銀杏黃酮內(nèi)酯成分及西洋參擬人參皂苷F11含量，兩種方法重現(xiàn)性與精密度比較，HPLC-ELSD較好。使用揮發(fā)性鹽對流動(dòng)相酸度進(jìn)行調(diào)節(jié)，并給予梯度洗脫，檢驗(yàn)?zāi)懼懰岷?，效果滿意[2]。

2 中藥檢驗(yàn)中運(yùn)用GC技術(shù)

檢驗(yàn)藥物揮發(fā)性成分時(shí)主要采用GC技術(shù)，現(xiàn)階段，GC發(fā)展迅速，應(yīng)用逐漸廣泛，DV-GC技術(shù)使中藥檢驗(yàn)更簡便、更快捷。將成分有揮發(fā)性的液體或固體（待檢驗(yàn)樣品）放在蒸發(fā)器中，蒸發(fā)器連接氣相色譜儀，且溫度適宜，短時(shí)間內(nèi)待檢驗(yàn)樣品揮發(fā)性組分被蒸發(fā)，經(jīng)載氣進(jìn)入色譜柱檢驗(yàn)及分離。DV-GC取樣約1～2 mg，放入蒸發(fā)器中可在1～3 min內(nèi)完全蒸發(fā)，具有取樣少、處理快速、簡便等優(yōu)點(diǎn)，能有效克服提取有機(jī)溶劑時(shí)間較長、取樣大、操作繁瑣、蒸餾時(shí)間長、誤差較大等問題，尤其適用于檢驗(yàn)中藥微量成分及名貴中成藥，如使用OV-17彈性不銹鋼柱及石英毛細(xì)管柱分別檢驗(yàn)牛黃解毒片、六神丸冰片含量，使用FID檢測器及SE-30熔融石英毛細(xì)管柱檢驗(yàn)六味地黃丸、牡丹皮丹皮酚含量。

石英毛細(xì)管柱可與FTIR、MS聯(lián)用，分離效能較高，可快速分離及鑒定復(fù)雜多組分樣品。固定液由傳統(tǒng)直接涂漬向交聯(lián)、鍵合逐漸轉(zhuǎn)變，增強(qiáng)色譜柱使用穩(wěn)定性，如毛細(xì)管GC測定六應(yīng)丸中丁香酚、冰片等；程序升溫毛細(xì)管GC檢驗(yàn)來源、產(chǎn)地不同的術(shù)類中藥揮發(fā)油組分[3]；CY-DEX-B手性毛細(xì)管GC鑒別不同中成藥中合成冰片、梅片和艾片等。

聯(lián)用毛細(xì)管柱與質(zhì)譜，不僅發(fā)揮了前者高分辨力特點(diǎn)，還具有后者高鑒別力，是揮發(fā)油組分分離鑒定的有效手段。如使用HRCGC-MS對桂枝中揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，共獲得化學(xué)成分44個(gè)；使用GC-MS-DS、OV-17彈性毛細(xì)管柱分離鑒定姜黃揮發(fā)油，共檢出姜黃烯、姜黃酮等化學(xué)成分51種。

3 中藥檢驗(yàn)中運(yùn)用SFE技術(shù)

超臨界流體密度較高，與液體相似，粘度性質(zhì)較低，與氣體相似，SFE技術(shù)運(yùn)用這一原理，迅速透入固體待檢驗(yàn)藥材中，并提取化學(xué)成分。將CO2作為提取介質(zhì)，具有較強(qiáng)的中等極性物質(zhì)及非極性物質(zhì)萃取能力，適當(dāng)加入改進(jìn)劑或調(diào)節(jié)溫度及壓力后，還能提取到極性不同的物質(zhì)，適用于大部分中藥有效成分提取。SFE技術(shù)能在無氧、低溫下進(jìn)行，便于易揮發(fā)、易氧化、熱不穩(wěn)定性成分提取。目前，分離檢驗(yàn)時(shí)聯(lián)合SFE技術(shù)、色譜儀，效果良好。

4 中藥檢驗(yàn)中運(yùn)用HPCE技術(shù)

HPCE與HPLC均為液相分離技術(shù)，具有快速、高效性，但HPCE技術(shù)較HPLC更具明顯優(yōu)勢。HPCE靈敏度高，檢測限最低為10-13～10-15 mol；理論板數(shù)達(dá)每米數(shù)十萬～數(shù)百萬，柱效高；一般來說分析時(shí)間<30 min，速度較快，且溶劑消耗少，檢驗(yàn)成本較低[4]。HPCE使用的檢測器較多，如質(zhì)譜、紫外、電化學(xué)、熒光等，按照不同分析對象還可選擇不同分離模式，選擇性及分離檢驗(yàn)?zāi)芰^強(qiáng)。

HPCE中應(yīng)用較廣泛、最基本的操作模式為CZE，優(yōu)點(diǎn)較多，有學(xué)者采用CZE對三種不同復(fù)方制劑中甘草次酸、甘草酸含量進(jìn)行檢驗(yàn)，并在10 min內(nèi)完成檢驗(yàn)，結(jié)果滿意。另有學(xué)者試驗(yàn)時(shí)，電泳電解質(zhì)選擇磷酸鹽緩沖液0.02 mol/L，經(jīng)CZE測定氧化苦參堿與苦參堿含量。HPCE還有MECC、CGE等技術(shù)。

5 結(jié)論

HPLC、GC、SFE、HPCE等現(xiàn)代色譜技術(shù)在中藥檢驗(yàn)中運(yùn)用較廣，優(yōu)勢明顯。在色譜技術(shù)快速發(fā)展下，中藥檢驗(yàn)必將進(jìn)入新里程，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)代化。筆者查閱了相關(guān)資料及文獻(xiàn)，對中藥檢驗(yàn)中現(xiàn)代色譜技術(shù)運(yùn)用進(jìn)行探討，供學(xué)者參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]雷利利，張熙潔，侯林中，等.現(xiàn)代色譜技術(shù)在中藥制劑多指標(biāo)成分質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J].中國藥房，2011，39：3733-3735.

[2]彭水梅，付小梅，孫艷朝，等.色譜法及其相關(guān)技術(shù)在中藥研究中的運(yùn)用[J].江西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，01：51-56.

[3]陸廣馬.高效液相色譜-質(zhì)譜法在中成藥分析中的應(yīng)用研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，04：54-55.

[4]黃良.中藥房中藥質(zhì)量管理探析[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，12：128-129.

編輯/肖慧