某地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者中性粒細(xì)胞特異性抗體篩查分析*

劉 錚,張伯偉,趙 磊,康軼青,馬 茹,杜 鵑,楊賀才,程四國(guó)

(河南省紅十字血液中心，鄭州 450052)

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·論 著·

某地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者中性粒細(xì)胞特異性抗體篩查分析*

劉 錚,張伯偉,趙 磊,康軼青,馬 茹,杜 鵑,楊賀才,程四國(guó)△

(河南省紅十字血液中心，鄭州 450052)

目的 探討河南地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者中性粒細(xì)胞特異性(HNA)抗體的分布和特異性，分析HNA抗體引起的免疫性輸血不良反應(yīng)。方法 隨機(jī)收集女性標(biāo)本156例，男性標(biāo)本80例，采用LABScreen Multi試劑盒對(duì)標(biāo)本HNA抗體進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果 236例無(wú)償獻(xiàn)血者中，女性HNA抗體檢出陽(yáng)性率為5.77%(9/156)，男性為5.00%(4/80)。其中HNA 1A者7例，HNA 4A者4例，同時(shí)檢出HNA 1A和HNA 4A、HNA 1A和HNA 1C各1例。結(jié)論 HNA抗體分布無(wú)性別差異，研究HNA抗體的分布和特異性，可為指導(dǎo)臨床用血安全和相關(guān)政策的制定提供有力的理論基礎(chǔ)。

中性粒細(xì)胞特異性抗體； 免疫性輸血不良反應(yīng)； 用血安全

輸血是臨床不可缺少的治療手段，但可引起多種不良反應(yīng)和并發(fā)癥，因此輸血安全是臨床輸血工作者的研究重點(diǎn)[1-2]。目前輸血安全最重要的問(wèn)題是非感染性輸血并發(fā)癥，其中輸血相關(guān)急性肺損傷(TRALI)已成為輸血相關(guān)致死的首要原因[3]。TRALI的發(fā)病機(jī)制至今仍不十分清楚，普遍認(rèn)為的理論是“2次打擊”學(xué)說(shuō)[4-6]：第1次打擊是由于患者自身的各種因素，激活中性粒細(xì)胞的NADPH氧化酶，從而引起中性粒細(xì)胞活化、聚集并黏附于肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞上[7]；第2次打擊就是血液輸注，由于患者輸入含人類白細(xì)胞抗原抗體(HLA-Ⅰ/Ⅱ)或人類中性粒細(xì)胞特異性(HNA)抗體的血液，與患者體內(nèi)相應(yīng)的抗原發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，從而引起中性粒細(xì)胞活化，血管內(nèi)皮損傷，肺毛細(xì)血管通透性增加，導(dǎo)致肺水腫等急性肺損傷癥狀[8]。因此，TRALI與HLA-Ⅰ/Ⅱ或HNA抗體密切相關(guān)[9]。有研究報(bào)道，不同抗體造成的TRALI嚴(yán)重程度不一致，HNA 3A抗體通常引起嚴(yán)重的TRALI[10]。我國(guó)目前對(duì)無(wú)償獻(xiàn)血者未做出相關(guān)規(guī)定，也缺乏HLA抗體檢測(cè)的方法和相關(guān)的研究數(shù)據(jù)?，F(xiàn)建立無(wú)償獻(xiàn)血者血液HNA抗體檢測(cè)平臺(tái)，了解河南地區(qū)HNA抗體的分布和特異性，探討HNA抗體導(dǎo)致的免疫性輸血不良反應(yīng)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)選取河南省紅十字血液中心2015年無(wú)償獻(xiàn)血者236例，女156例，年齡19～55歲，男80例，年齡18～55歲。抽取所有研究對(duì)象的外周血3 mL，EDTA-K2抗凝，離心分離血漿與血細(xì)胞，于-20 ℃保存。

1.2 儀器與試劑 配套儀器Luminex 200購(gòu)自美國(guó)Thermo公司。LABScreen Multi(批號(hào)# LSMUTR)檢測(cè)試劑盒進(jìn)行HNA抗體篩查。

1.3 HNA抗體檢測(cè) 酶標(biāo)板每孔中依次加入2 μL微珠，14 μL 1×PBS，7 μL血漿樣本，混勻，室溫避光孵育30 min。每孔加入180 μL 1×Labscreen 洗液，封口膜封嚴(yán)，混勻器混勻，3 500 r/min離心5 min，離心后檢查微球是否沉入孔底，快速將洗液甩入廢物箱中，重復(fù)2次。每孔加入50 μL 2抗混勻，室溫避光孵育30 min。孵育后，雜交板直接3 500 r/min離心5 min，然后將2抗甩至廢物箱中，清洗3次。完成后，每孔加入50 μL PBS，使用混勻器混勻標(biāo)本，將標(biāo)本轉(zhuǎn)移至讀板中，上機(jī)讀取結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較使用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 男女性無(wú)償獻(xiàn)血者HNA抗體檢測(cè)結(jié)果比較 女性HNA抗體檢出陽(yáng)性率為5.77%(9/156)，男性為5.00%(4/80)。男女性HLA抗體陽(yáng)性率結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.000,P=1.000)。見(jiàn)表1。

2.2 男女性無(wú)償獻(xiàn)血者回訪結(jié)果比較 對(duì)HNA抗體陽(yáng)性獻(xiàn)血者進(jìn)行電話回訪，詢問(wèn)女性孕育史和輸血史，9例HNA抗體陽(yáng)性女性中，僅1例孕產(chǎn)史為0，均無(wú)輸血史。詢問(wèn)男性輸血史，4例HNA抗體陽(yáng)性男性均無(wú)輸血史。

表1 男女性無(wú)償獻(xiàn)血者HNA抗體檢測(cè)結(jié)果比較[n(%)]

2.3 HNA抗體陽(yáng)性標(biāo)本HNA抗體的特異性結(jié)果比較 HNA 1A有7例，HNA 4A有4例，同時(shí)檢出HNA 1A和HNA 4A、HNA 1A和HNA 1C各1例。見(jiàn)表2。

表2 男女性無(wú)償獻(xiàn)血者HNA抗體特異性結(jié)果比較[n(%)]

3 討 論

TRALI是輸血相關(guān)病死的首要原因，65%～89%的TRALI患者的成分血中均發(fā)現(xiàn)抗白細(xì)胞抗體[11]。這些抗體的同源抗原是表達(dá)于受血者白細(xì)胞的HLA-Ⅰ、Ⅱ類和HNA抗原[12]。其中HNA抗原及其抗體在輸血、骨髓移植和新生兒中性粒細(xì)胞減少等方面具有重要的臨床意義，特別是中性粒細(xì)胞抗體在非溶血性輸血反應(yīng)中具有重要的臨床價(jià)值，抗-HNA不僅可引起發(fā)熱性非溶血性輸血反應(yīng)，還可造成TRALI[13]。 本研究結(jié)果表明，156例女性檢出HNA抗體9例，陽(yáng)性率為5.77%；80例男性檢出HNA抗體4例，陽(yáng)性率為5.00%，男女性HNA抗體陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。對(duì)HNA抗體陽(yáng)性者進(jìn)行電話回訪顯示，詢問(wèn)女性孕育史和輸血史，9例HNA抗體陽(yáng)性者僅1例無(wú)孕產(chǎn)史，均無(wú)輸血史；詢問(wèn)男性輸血史，4例HNA抗體陽(yáng)性者均無(wú)輸血史。提示孕產(chǎn)史與HNA抗體的產(chǎn)生有一定的相關(guān)性，但是否有輸血史則關(guān)系不大，因?yàn)槊看稳焉镞^(guò)程就是1次免疫刺激，孕婦會(huì)產(chǎn)生HNA抗體。

本研究結(jié)果表明，9例HNA抗體陽(yáng)性的女性，有7例為HNA 1A抗體陽(yáng)性，1例為HNA 4A抗體陽(yáng)性，1例為HNA 1A和HNA 1C抗體陽(yáng)性；4例HNA抗體陽(yáng)性的男性，有3例為HNA 4A抗體陽(yáng)性，1例為HNA 1A和HNA 4A抗體陽(yáng)性。有研究報(bào)道，涉及TRALI的HNA抗體有HNA 1A、HNA 1B、HNA 2A、HNA 3A等抗體，其中以HNA 3A抗體最為常見(jiàn)[14]。本研究女性檢出的HNA抗體中HNA 1A比例較大，可能存在一定的TRALI風(fēng)險(xiǎn)，而男性檢出的HNA抗體多為HNA 4A，無(wú)相應(yīng)的危險(xiǎn)報(bào)道，雖然HNA抗體的檢出率與性別無(wú)關(guān)，但由于女性抗體更有可能導(dǎo)致TRALI發(fā)生，因此TRALI的發(fā)生率與性別可能有一定的相關(guān)性。 歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家近年來(lái)實(shí)施輸注非女性血漿策略后TRALI的發(fā)生率降低，也間接支持本研究。

目前我國(guó)臨床HNA相關(guān)的TRALI鮮有報(bào)道，關(guān)于人群中HNA抗體的篩查更是甚少，這是因?yàn)榕cHNA的認(rèn)識(shí)不足及檢測(cè)手段欠缺有關(guān)，隨著對(duì)HNA分子結(jié)構(gòu)及生物特性的深入了解及檢測(cè)方法的提高，HNA 將會(huì)受到重視。本研究通過(guò)對(duì)河南地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血人群的HNA抗體分布進(jìn)行篩查，了解該地區(qū)HNA抗體的分布和特異性，分析HNA抗體引起的免疫性輸血不良反應(yīng)，為指導(dǎo)臨床用血安全和相關(guān)政策的制定提供有力的理論基礎(chǔ)。

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Identification of human neutrophil antibodies among volunteer blood donors in one district*

LIUZheng,ZHANGBowei,ZHAOLei,KANGYiqing,MARu,DUJuan,YANGHecai,HUYingchun,CHENGSiguo△

(HenanRedCrossBloodCenter,Zhengzhou，Henan450012,China)

Objective To elucidate the distribution of human neutrophil (HNA) antibodies among volunteer blood donors in Henan and estimate the risk rate of immune-mediated transfusion related adverse reaction caused by HNA antibodies.Methods 156 females and 80 males were collected randomly from volunteer blood donors in Henan.All the samples′ HNA antibodies were detected using LABScreen Multi kit.Results The data showed that among the 236 volunteer blood donors,the positive rate of HNA antibodies was 5.77%(9/156)in females,while the rates were 5.00%(4/80)for males.Among the positive donors,there were 7 anti-HNA 1A,4 anti-HNA 4A,1 anti-HNA 1A/HNA 4A and anti-HNA 1A/HNA 1C.Conclusion The frequency of HNA antibodies in females is same as the males.Our study is to elucidate the distribution of human neutrophil antibodies among volunteer blood donors in Henan and estimate the risk rate of immune-mediated transfusion related adverse reaction caused by HNA antibodies,therefore it could provide theoretical basis for clinical transfusion safety.

HNA; immune-mediated transfusion related adverse reaction; transfusion safety

河南省2013年科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(134300510068)。

劉錚，女，主管技師，主要從事輸血的分子生物學(xué)研究?！?/p>

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.008

A

1673-4130(2016)20-2823-02

2016-05-16

2016-07-13)