miR-200b與癌胚抗原在大腸癌中的表達(dá)及其相關(guān)性*

杜葉平，王海蓮，尹莉莉，武春梅，苗晉華

(中國人民解放軍第二六四醫(yī)院檢驗科，太原 030001)

?

·論 著·

miR-200b與癌胚抗原在大腸癌中的表達(dá)及其相關(guān)性*

杜葉平，王海蓮，尹莉莉，武春梅，苗晉華△

(中國人民解放軍第二六四醫(yī)院檢驗科，太原 030001)

目的 探討miR-200b與癌胚抗原(CEA)在大腸癌發(fā)生、 發(fā)展中的表達(dá)情況及其表達(dá)的相關(guān)性。方法 采用實時熒光定量PCR方法分析60例大腸癌組織及正常組織中miR-200b mRNA和CEA mRNA表達(dá)結(jié)果，分析其與患者臨床資料、病理參數(shù)之間的關(guān)系，研究大腸癌組織中miR-200b mRNA和CEA mRNA表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果 大腸癌組織中miR-200b mRNA的表達(dá)顯著低于正常組織，CEA mRNA顯著高于正常組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；患者性別、年齡及腫瘤部位的miR-200b mRNA和CEA mRNA表達(dá)結(jié)果比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；不同組織學(xué)分級及TNM分期中，CEA呈現(xiàn)過表達(dá)狀態(tài)，而miR-200b呈現(xiàn)表達(dá)降低或缺失狀態(tài)；大腸癌組織中miR-200b和CEA 的表達(dá)具有相關(guān)性，且呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.790，P<0.001)。結(jié)論 miR-200b在大腸癌組織中呈低表達(dá)或表達(dá)缺失，與CEA的表達(dá)呈一定的負(fù)相關(guān)關(guān)系，提示miR-200b可為腫瘤的診斷和治療提供新的依據(jù)。

大腸癌； miR-200b； 癌胚抗原； 實時定量PCR

微小RNA(miR)是一類長度約為22個核苷酸的非編碼單鏈RNA小分子，1993年發(fā)現(xiàn)首個miR，其功能特征和作用模式廣受關(guān)注[1]。目前，miR-200家族包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-429、miR-141，分別位于第1、12號染色體上。國內(nèi)外研究表明，miR-200b被認(rèn)為是一種抑癌基因。癌胚抗原(CEA)最初發(fā)現(xiàn)于結(jié)腸癌和胎兒腸組織中，然后有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在大腸癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲狀腺髓樣癌等多種癌癥中均有明顯表達(dá)[2]。CEA作為一個廣譜腫瘤標(biāo)志物，對大腸癌、乳腺癌和肺癌等的療效判斷、病情發(fā)展、監(jiān)測和預(yù)后估計是一個良好的指標(biāo)，但其特異性不強，敏感性不高，對腫瘤早期診斷作用不明顯?，F(xiàn)對大腸癌組織中的miR-200b和CEA mRNA的表達(dá)情況及其與臨床病理資料的相關(guān)性進(jìn)行研究，為臨床提供高特異性和敏感性的實驗室數(shù)據(jù)。報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取60例大腸癌患者，男37例，女23例；年齡41～85歲，平均年齡60歲。標(biāo)本取自大腸癌組織，同時采集距癌旁5 cm外的癌旁正常組織作為對照。所有標(biāo)本選自2010年6月至2015年7月該院進(jìn)行手術(shù)及胃鏡治療的患者，標(biāo)本切除后直接用生理鹽水漂洗干凈，保存于-70 ℃冰箱備用。60例大腸癌患者均經(jīng)病理確診，手術(shù)前均未接受任何放療、化療，以及其他針對腫瘤的相關(guān)治療等。

1.2 儀器與試劑 美國ABI公司Step OneTMReal-Time PCR 儀。美國Invitrogen公司的Trizol試劑； GAPDH引物(Hs002)、miR-200b與CEA引物序列均由日本TaKaRa公司合成；Fast SYBR Green Master Mix購自美國ABI公司。

1.3 方法 (1)組織總RNA提?。菏褂肈EPC處理實驗的器械和溶液，采用Qiagan公司生產(chǎn)的RNAlater，該試劑可穩(wěn)定保護(hù)RNA避免受RNase的降解，保證RNA樣品質(zhì)量。組織總RNA的提取過程按照說明書嚴(yán)格進(jìn)行，提取的總RNA保存于-70 ℃冰箱備用。(2)熒光定量PCR：將組織總RNA以通用引物oligo(dT)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，使用SYBR Premix Ex TaqTM試劑盒，以GAPDH為內(nèi)參，以癌旁正常組織作為對照標(biāo)本，每個標(biāo)本設(shè)立3個平行管，反應(yīng)結(jié)束后，采用ABI公司Step OneTM軟件比較CT(ΔΔCT)定量方法進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 2種組織標(biāo)本的miR-200b和 CEA mRNA 表達(dá)水平 大腸癌組織中miR-200b與CEA mRNA的表達(dá)與正常組織比較，均顯著升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表1。

表1 2種組織標(biāo)本的miR-200b與CEA表達(dá)水平

注：與正常組織比較,*P<0.01。

2.2 不同臨床資料的miR-200b和CEA mRNA表達(dá)水平 大腸癌患者miR-200b 和CEA mRNA表達(dá)呈陽性(+)，兩者在正常組織的表達(dá)呈陰性(-)。大腸癌患者的miR-200b陽性表達(dá)率為25.00%，CEA陽性表達(dá)率為80.81%。見表2。

表2 不同臨床資料的miR-200b和CEA mRNA表達(dá)水平

2.2 miR-200b與CEA 表達(dá)的相關(guān)性以及與病理參數(shù)的關(guān)系 大腸癌腺癌的高分化、中分化、低分化之間的miR-200b和CEA的表達(dá)率，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；且分化越低，miR-200b表達(dá)率也低，CEA表達(dá)率增高；在TNM Ⅰ、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期患者中，miR-200b mRNA表達(dá)率逐漸減低，CEA mRNA逐漸增高。淋巴轉(zhuǎn)移組織的miR-200b 表達(dá)率低于無轉(zhuǎn)移者，CEA mRNA表達(dá)率則高于無轉(zhuǎn)移者。大腸癌組織的miR-200b和CEA的mRNA表達(dá)具有相關(guān)性(r=-0.790,P<0.001)，且呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(-1

表3 miR-200b和CEA 表達(dá)的相關(guān)性以及與病理參數(shù)的關(guān)系

3 討 論

CEA 是反映腫瘤發(fā)生和發(fā)展的標(biāo)志物，在癌癥的診療中發(fā)揮重要作用，具有一定程度的指導(dǎo)意義，但因其缺乏足夠的組織特異性和腫瘤特異性，因此在腫瘤的早期診斷、療效評估和預(yù)后判定的應(yīng)用較為局限[3]。

miR是細(xì)胞中的非編碼RNA，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，是基因表達(dá)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)子，調(diào)節(jié)多種生物學(xué)進(jìn)程，如細(xì)胞分化、細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖與凋亡、血管生成等。最新研究報道，miR可通過多種方式促進(jìn)或抑制腫瘤細(xì)胞的增殖或轉(zhuǎn)移。國內(nèi)外研究表明，miR-200b在胃癌、肝癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌等多種腫瘤中的表達(dá)均下調(diào)，可抑制癌細(xì)胞增殖和遷移[4-8]。

本研究采用一系列的實驗技術(shù)分析miR-200b和CEA在大腸癌組織和相應(yīng)的癌旁正常組織中的mRNA表達(dá)水平，同時研究miR-200b和CEA的表達(dá)情況與大腸癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，miR-200b在大腸癌組織呈表達(dá)降低或缺失的狀態(tài)，是導(dǎo)致大腸癌發(fā)生、發(fā)展的重要因素之一，miR-200b和CEA的表達(dá)具有相關(guān)性，且呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，說明miR-200b表達(dá)的改變可與CEA一樣作為大腸癌發(fā)生和發(fā)展、治療和預(yù)后的潛在指標(biāo)，而miR-200b可能比傳統(tǒng)的蛋白分子類腫瘤標(biāo)志物更加有效，解決傳統(tǒng)蛋白標(biāo)志物抗體在準(zhǔn)確定量上的局限性，更好地提供大腸癌患者的個體化診療思路，在早期診斷、腫瘤分子分型、藥物篩選、預(yù)后評估中具有很大的潛力，并在一定程度上為大腸癌的早期診斷、治療、預(yù)后尋求新的思路。

[1]LeeRC,FeinbaumRL,AmbrosV.TheC.elegansheterochronicgenelin-4encodessmallRNAswith antisense complementarity to lin-14[J].Cell,1993,75(5):843-854.

[2]Gold P,Freedman SO.Specific carcinoembryonic antigens of the human digestive system[J].J Exp Med,1965,122(3):467-468.

[3]Kurashige J,Mima K,Sawada G,et al.Epigenetic modulation and repression of miR-200b by cancer-associated fibroblasts contribute to cancer invasion and peritoneal dissemination in gastric cancer[J].Carcinogenesis,2015,36(1):133-141.

[4]Dhayat SA,Mardin WA,Khler G,et al.The microRNA-200 family-a potential diagnostic marker in hepatocellular carcinoma?[J].J Surg Oncol,2014,110(4):430-438.

[5]Meng X,Müller V,Milde-Langosch K,et al.Diagnostic and prognostic relevance of circulating exosomal miR-373,miR-200a,miR-200b and miR-200c in patients with epithelial ovarian cancer[J].Oncotarget,2016,29(2):78-94.

[6]Rhodes LV,Martin EC,Segar HC,et al.Dual regulation by microRNA-200b-3p and microRNA-200b-5p in the inhibition of epithelial-to-mesenchymal transition in triple-negative breast cancer[J].Oncotarget,2015,30(18):16638-16652.

[7]Khler CU,Bryk O,Meier S,et al.Analyses in human urothelial cells identify methylation of miR-152,miR-200b and miR-10a genes as candidate bladder cancer biomarkers[J].Biochem Biophys Res Commun,2013,438(1):48-53.

[8]Vukobrat-Bijedic Z,Husic-Selimovic A,Sofic A,et al.Cancer antigens (CEA and CA 19-9) as markers of advanced stage of colorectal carcinoma[J].Med Arch,2013,67(6):397-401.

The expression of miR-200b and CEA and the correlation between the two factors in colon cancer*

DUYeping,WANGHailian,YINLili,WUChunmei,MIAOJinhua△

(DepartmentofClinicalLaboratory，the264thHospitalofPLA,Taiyuan,Shanxi030001,China)

Objective To study the expression of transcription factor miR-200b and CEA and the correlation between the two transcription factors in the process of occurrence and development of colorectal cancer.Methods Expression miR-200b and CEA mRNA by real-time PCR in 60 colon cancer tissues and corresponding normal tissues were detected and the results were compared with the clinical features and pathological characters.The relationship between the mRNA expression of miR-200b and CEA in 60 colon cancer tissues was determined.Results The expression rate of CEA mRNA was detectable to highly expressed rates in colon cancer tissues than that in matched normal tissues (P<0.01),whereas miR-200b mRNA in the colon cancer tissues was significantly lower than that in the matched normal tissues(P<0.01).There was no significant correlation between miR-200b,CEA mRNA expression and age,sex,tumor location(P>0.05).Loss expression or down regulation expression of miR-200b mRNA was detected,whereas CEA mRNA was detectable to highly expressed in the different histological grade and Dukes stages.The expression of miR-200b mRNA and CEA mRNA were positively correlated with the histological grade in colon cancer.A significant correlation was found between the expression of miR-200b mRNA and CEA mRNA (r=-0.790,P<0.001).Conclusion Loss or down regulation expression of miR-200b mRNA,whereas CEA is detectable to highly expressed in colon cancer.Negative correlation occurred in miR-200b mRNA and CEA mRNA indicates that miR-200b and CEA provide the new clues of genetic diagnosis and treatment.

colon cancer; miR-200b; CEA; real-time PCR

山西省自然科學(xué)基金資助項目(2013011043-4)。

杜葉平，女，主管技師，主要從事腫瘤分子生物學(xué)研究?！?/p>

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.20.002

A

1673-4130(2016)20-2808-03

2016-03-20

2016-06-26)