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    一例豬偽狂犬病和葡萄球菌混合感染的診斷

    2016-11-18 12:46:35杜海燕韓俊偉
    獸醫(yī)導(dǎo)刊 2016年4期
    關(guān)鍵詞:狂犬病毒病死豬狂犬病

    杜海燕韓俊偉

    (1.新鄉(xiāng)市動物疫病預(yù)防控制中心,河南新鄉(xiāng) 453000;2.新鄉(xiāng)市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南新鄉(xiāng) 453000)

    一例豬偽狂犬病和葡萄球菌混合感染的診斷

    杜海燕1韓俊偉2

    (1.新鄉(xiāng)市動物疫病預(yù)防控制中心,河南新鄉(xiāng) 453000;2.新鄉(xiāng)市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南新鄉(xiāng) 453000)

    豬偽狂犬病是偽狂犬病毒引起的急性傳染病,其主要特征為病豬體溫升高,仔豬多出現(xiàn)神經(jīng)障礙,妊娠母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、死胎等癥狀,病豬于局部皮膚呈現(xiàn)持續(xù)性的劇烈瘙癢。而豬葡萄球菌病是由豬葡萄球菌引起豬的細(xì)菌性疾病,以斷奶仔豬多發(fā),有明顯的接觸性傳染性,無明顯季節(jié)性,與環(huán)境因素關(guān)系密切。上述兩種病地域分布廣泛,對養(yǎng)豬業(yè)危害嚴(yán)重。2016年2月,我實(shí)驗(yàn)室收到某豬場送檢病豬,并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷,確診為豬偽狂犬與葡萄球菌混合感染,具體情況如下。

    豬偽狂犬??;混合感染;實(shí)驗(yàn)診斷

    1 流行病學(xué)調(diào)查

    某養(yǎng)豬戶存欄生豬200頭,飼養(yǎng)母豬16頭,2016年1月,相繼有5頭母豬生產(chǎn),共產(chǎn)仔豬72頭,其中弱豬5頭,死胎9頭,仔豬出生后7日齡左右開始發(fā)病,體溫升至41℃,病豬消瘦、脫水、體質(zhì)較弱,精神沉郁,吃奶少或不吃,拉黃白色、黃色或灰色糞便;部分病豬耳部、眼睛周圍、腹部出現(xiàn)紅斑,然后形成微黃水泡破潰,覆蓋在皮膚上一層棕灰色結(jié)痂。有些病豬出現(xiàn)轉(zhuǎn)圈、運(yùn)動失調(diào)等癥狀,病程較短,共發(fā)病36頭,死亡14頭。該豬場多方面進(jìn)行治療,但無明顯效果。

    2 剖檢變化

    送檢病死豬剖檢觀察,頜下淋巴結(jié)、腹股溝淋巴結(jié)等外周淋巴結(jié)腫大、出血,肝臟表面點(diǎn)狀出有黃白色壞死點(diǎn),腎臟點(diǎn)狀出血,脾、胃、肺、腸道大量出血并有氣體,心臟充血并且積液增多,腦膜充血水腫。

    3 實(shí)驗(yàn)室診斷

    3.1 細(xì)菌分離鑒定

    采集送檢病死豬的肝臟、脾臟、腎臟及淋巴結(jié)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。病料接種于鮮血瓊脂平板后,放置培養(yǎng)箱中,37℃培養(yǎng)24h,在鮮血培養(yǎng)基上長出透明、圓形、微小、溶血的菌落,經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢,為革蘭氏陽性球菌,挑取單個優(yōu)勢菌落進(jìn)行純培養(yǎng),并用純培養(yǎng)物作生化試驗(yàn),初步確定為葡萄球菌。

    3.2 藥物敏感試驗(yàn)

    取上述細(xì)菌純培養(yǎng)物,均勻涂于鮮血瓊脂培養(yǎng)基上,對上述細(xì)菌純培養(yǎng)物進(jìn)行抗生素敏感試驗(yàn),結(jié)果見表。

    3.3 豬偽狂犬病毒核酸檢測

    3.3.1 DNA提取 分別取病豬的腦組織(樣品1)、淋巴結(jié)組織(樣品2)和脾臟組織(樣品3)研磨,反復(fù)凍融3次,8000rpm離心10min,取上清液采用離心柱提取法提取病料DNA樣本。

    3.3.2 PCR擴(kuò)增 采用PCR-熒光探針法對待檢樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增。每個樣本反應(yīng)體系PRV qPCR MIX 20μl,Taq酶系1μl,待測樣品4μl,同時設(shè)陽性和陰性質(zhì)控品。標(biāo)記熒光基團(tuán)種類:報告基團(tuán)FAM,淬滅基團(tuán)為TAMRA。擴(kuò)增條件:94℃-2min;94℃30s,55℃45s(采集熒光),40個循環(huán)。

    3.3.3 結(jié)果分析 反應(yīng)結(jié)束后,使用手動調(diào)整閾值使陰性質(zhì)控品Ct值在40以上,Ct值小于35個循環(huán)的為陽性;Ct值在35~40個循環(huán)之間的需要重復(fù)試驗(yàn),重復(fù)試驗(yàn)之后,如果Ct值仍然在35~40個循環(huán)之間,判斷為陽性,沒有熒光值增長為陰性。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn):陰性質(zhì)控品:Ct值顯示UNDET或者Ct40,即結(jié)果為陰性;陽性質(zhì)控品:CT值小于30,且呈標(biāo)準(zhǔn)S型擴(kuò)增曲線。結(jié)果見下圖。

    豬偽狂犬病毒核酸熒光PCR檢測結(jié)果

    分離細(xì)菌藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果

    對送檢病料的豬偽狂犬病毒核酸檢測結(jié)果由圖可見:陽性對照Ct值為16.21,陰性對照Ct值為UNDET,待檢樣品腦組織(樣1)Ct值為28.03,淋巴組織(樣2)Ct值為31.12,脾臟組織(樣3)Ct值為32.00,結(jié)果表明所檢測樣品中豬偽狂犬病毒核酸為陽性,說明該病死豬群存在豬偽狂犬病毒的感染。

    4 結(jié)果與分析

    通過流行病學(xué)、臨床癥狀、病理剖檢變化、實(shí)驗(yàn)室檢查等試驗(yàn)結(jié)果,初步確診為病死豬可能感染了豬偽狂犬病病毒,繼發(fā)葡萄球菌感染所致。建議該豬場對發(fā)病豬或疑似病豬及時進(jìn)行隔離或淘汰;使用豬偽狂犬病弱毒疫苗對豬群進(jìn)行強(qiáng)化免疫,用豬基因干擾素按要求對病豬進(jìn)行肌肉注射;建立健全豬群免疫監(jiān)測制度,定期進(jìn)行免疫抗體監(jiān)測,并依據(jù)抗體監(jiān)測結(jié)果,適時免疫和采取其他相應(yīng)措施,防止疫病發(fā)生。嚴(yán)格控制葡萄球菌繼發(fā)感染,選用該菌敏感性高的藥物(如腸道康、舒坦西林和東方瀉立停)進(jìn)行治療,輪換使用敏感藥物,使用1%高錳酸鉀溶液清洗病豬患部,再涂上龍膽紫,2次/d,連用3d。同時,做好豬群進(jìn)行補(bǔ)液、補(bǔ)糖等對癥治療。要加強(qiáng)豬群飼養(yǎng)管理,建立獸醫(yī)衛(wèi)生防疫制度,在預(yù)防接種的同時,要結(jié)合搞好豬場環(huán)境衛(wèi)生、嚴(yán)格消毒等綜合防治措施,避免疫病的發(fā)生。

    [1] 馮俊亮,劉玉民,付永增.豬偽狂犬病與葡萄球菌病混合感染的診治[J].湖北畜牧獸醫(yī),2010,(4):36-36.

    杜海燕(1983-),女,助理獸醫(yī)師,主要從事動物疫病診斷與防治工作,現(xiàn)工作于新疆市動物疫病預(yù)防控制中心。

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