花背蟾蜍蝌蚪發(fā)育與甲狀腺形態(tài)相關(guān)性研究

高鳳娟 陸宇燕 戴美玲 李丕鵬

(沈陽師范大學(xué)兩棲爬行動物研究所，遼寧省生物進化與生物多樣性重點實驗室，沈陽，110034)

花背蟾蜍蝌蚪發(fā)育與甲狀腺形態(tài)相關(guān)性研究

高鳳娟 陸宇燕 戴美玲 李丕鵬*

(沈陽師范大學(xué)兩棲爬行動物研究所，遼寧省生物進化與生物多樣性重點實驗室，沈陽，110034)

花背蟾蜍；

(Institute of Herpetology and Liaoning Key Laboratory of Evolution and Biodiversity， Shenyang Normal University，Shenyang，110034，China)

甲狀腺作為兩棲動物主要的內(nèi)分泌腺之一，在其變態(tài)發(fā)育過程中起著重要的調(diào)控作用[1]，而無尾兩棲動物幼體-蝌蚪被認為是研究甲狀腺功能理想的模式生物[2-3]。國內(nèi)外學(xué)者對蝌蚪變態(tài)發(fā)育期的甲狀腺形態(tài)結(jié)構(gòu)、相關(guān)激素含量及其生理功能分別進行了研究[4-5]。近年來國內(nèi)學(xué)者分別探討了3種無尾兩棲類蝌蚪在變態(tài)發(fā)育中主要發(fā)育期的生物學(xué)量度、甲狀腺的分化時期、各發(fā)育期甲狀腺組織結(jié)構(gòu)和甲狀腺激素之間的關(guān)系[6-8]，研究表明蝌蚪各項生物學(xué)量度與甲狀腺濾泡大小和激素水平之間有著顯著的關(guān)聯(lián)性。另外，由于兩棲類的繁殖特性以及蝌蚪外鰓和皮膚的高滲透性，水環(huán)境中任何化學(xué)物質(zhì)均能通過僅由一層上皮細胞構(gòu)成的外鰓和由2～3層細胞構(gòu)成的皮膚[9]滲入體內(nèi)導(dǎo)致對其各器官的損傷[10-11]，故兩棲類的蝌蚪已被確定為環(huán)境變化的警示生物。

花背蟾蜍(Buforaddei)，隸屬于無尾目(Anura)蟾蜍科(Bufonidae)蟾蜍屬，是我國北方的廣布種，也是生物學(xué)基礎(chǔ)研究常用的實驗動物之一[12-14]。雖然對花背蟾蜍的研究已有大量的報道[15-17]，但對其發(fā)育過程中甲狀腺的演化及其與蝌蚪生長發(fā)育的關(guān)系尚未見報道。本文以花背蟾蜍為實驗動物，選擇變態(tài)發(fā)育中具有代表性的發(fā)育期，對蝌蚪相關(guān)生物學(xué)量度和甲狀腺總面積、濾泡面積及濾泡上皮細胞高度等進行了測量及分析。旨在揭示變態(tài)發(fā)育中花背蟾蜍蝌蚪生長發(fā)育與甲狀腺形態(tài)的關(guān)系，為花背蟾蜍生物學(xué)研究積累更多的科學(xué)資料，同時為水環(huán)境污染對花背蟾蜍蝌蚪發(fā)育的影響研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

抱對的花背蟾蜍采自沈陽北陵公園，帶回實驗室將其置于塑料整理箱內(nèi)(長35 cm，寬26 cm)，加注曝氣2 d的自來水3 cm高。待其產(chǎn)卵1 h后，選取一定數(shù)量已完成第一次卵裂的受精卵放置在水深10 cm左右的整理箱內(nèi)飼養(yǎng)，孵化前水溫為(22±1)℃(室溫)，變態(tài)發(fā)育時期為(23±2)℃(室溫)。隔天更換一次曝氣2 d的自來水。待蝌蚪孵化開口后，以魚食、雞蛋黃、碎雞肉和青菜等飼喂。

蝌蚪分期按Gosner[18]分期標準進行，自G26開始，進行隔期取材，共選取了11個發(fā)育期。

1.2 方法

1.2.1 蝌蚪生物學(xué)量度

將選定發(fā)育期的蝌蚪每期取10只，固定于10%的中性福爾馬林溶液中待用。利用電子游標卡尺(桂林廣陸電子數(shù)顯游標卡尺，測量范圍150 mm，精確度0.01 mm)測定蝌蚪體長(吻端至肛管基部)、尾長(肛管基部至尾末端)、眼間距(兩眼間最短距離)、后肢長、尾肌高和尾肌寬(以蝌蚪尾基部為測量點)等數(shù)據(jù)。

1.2.2 甲狀腺相關(guān)檢測

將上述完成測量的蝌蚪，進行常規(guī)石蠟切片，連續(xù)切片，厚度7 μm，HE染色。利用Olympus BX-50研究用顯微鏡進行觀察和照相，利用Image-Pro Express 6.0進行相關(guān)參數(shù)的測量。測量甲狀腺面積時，選取甲狀腺最大切面進行測量；測量濾泡面積時，在連續(xù)切片中選取該濾泡的最大切面進行測量。由于G28～G32蝌蚪甲狀腺濾泡較少，測量所有濾泡最大橫切面面積并進行降序排列，選取面積偏大的1/3作為大型濾泡，選取面積偏小的1/3作為小型濾泡，中間1/3即為中間型濾泡；G34～46蝌蚪由于濾泡數(shù)量較多，大型濾泡為面積大于2 500 μm2，中型濾泡為面積在800 μm2與2 500 μm2之間，小型濾泡面積為小于800 μm2，統(tǒng)計不同類型的濾泡數(shù)量，并測量相應(yīng)濾泡的上皮細胞高。

1.2.3 實驗數(shù)據(jù)分析

利用SPSS22.0進行單因素方差分析和Pearson相關(guān)性系數(shù)分析。生長速率計算公式：生長速率=((發(fā)育期B-發(fā)育期A)/發(fā)育期A)×100%，例如：G30-G28生長速率=((G30-G28)/G28)×100%。

2 結(jié)果

2.1 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)發(fā)育各期生物學(xué)量度和生長速率比較

2.1.1 花背蟾蜍蝌蚪體長的發(fā)育

圖1 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)過程中體長、尾長和后肢長的變化Fig.1 Changes of body length，tail length and hind limb length in Bufo raddei tadpoles during metamorphosis

由圖1可見：花背蟾蜍蝌蚪體長發(fā)育可分為快速生長期(G26～G28)、生長期(G28～G42)和生長調(diào)整期(G42～G46)3個階段，其中快速生長期的生長速率(表1)達到90.37%，而生長調(diào)整期生長速率呈負值。體長在G38為最大值；在G44時，體長與后肢長在數(shù)值上非常接近，其長度分別為10.79 μm和10.95 μm。2.1.2 花背蟾蜍蝌蚪尾的發(fā)育尾長的發(fā)育可分為快速生長期(G26～G28)、生長期(G28～G42)和衰減期(G42～G46)。其中快速生長期的生長速率達到了93.28%，進入G42之后尾部生長速率均呈負值。

2.1.3 花背蟾蜍蝌蚪后肢的發(fā)育

后肢芽發(fā)育可分為5個階段，緩慢生長期(G26～G34)、快速增長期(G34～G38)、急速生長期(G38～G40)、穩(wěn)定生長期(G40～G44)和補充生長期(G44～G46)。在急速生長期的兩個發(fā)育期中，后肢長度的生長速率達到了170.45%，高于緩慢生長期中生長速率最高的G26～G28(100%)和快速生長期的G34～G36(107.64%)。

表 1 花背蟾蜍變態(tài)發(fā)育中各期間的生長速率(%)

Tab.1 Growth rate of various stages during metamorphosis of Bufo raddei tadpoles(%)

2.1.4 花背蟾蜍蝌蚪眼間距、尾肌高和尾肌寬的變化

由圖2可見：眼間距、尾肌高和尾肌寬均在G38時達到最大值，且在G44時尾肌高和眼間距在數(shù)值上非常接近。其中，眼間距在蝌蚪發(fā)育中可分為快速生長期Ⅰ(G26～G30)、穩(wěn)定期(G30～G34)、快速生長期Ⅱ(G34～G38)和遞減期(G38～G46)?？焖偕L期Ⅰ中最高生長速率達57.89%。尾肌發(fā)育包括尾肌高和尾肌寬2個數(shù)值，兩個均可分為生長期(G26～G38)和衰減期(G38～G46)。尾肌高在達到最大值的G38后，即開始了其的衰減進程；而尾肌寬的衰減起點也是G38，但其出現(xiàn)明顯的衰減時從G42開始。

圖2 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)過程中眼間距、尾基高和尾基寬的變化Fig.2 Changes of interorbital distance，tail muscle height and tail mu-scle width in Bufo raddei tadpoles during metamorphosis

2.2 甲狀腺及濾泡的相關(guān)測量

2.2.1 甲狀腺及濾泡面積的變化

在對石蠟切片的觀察中發(fā)現(xiàn)，G26蝌蚪部分可見甲狀腺的存在，而其又被大量的色素細胞覆蓋，僅隱約可見濾泡(圖3)，因此沒有此期相關(guān)的測量數(shù)據(jù)。G28蝌蚪(圖3)可見清晰的甲狀腺及其濾泡。隨著蝌蚪發(fā)育進程的推進，甲狀腺面積快速增大，至G42時達到峰值(圖4-1)，隨后呈緩慢下降的趨勢。大型甲狀腺濾泡(即大濾泡)和中型甲狀腺濾泡(即中濾泡)的變化與甲狀腺整體面積變化的趨勢相符。而在甲狀腺整體面積增大中，大濾泡的貢獻占絕對優(yōu)勢，其次是中濾泡，且這兩種濾泡均在G42時出現(xiàn)面積的峰值。小型甲狀腺濾泡(即小濾泡)雖然對甲狀腺面積的增加沒有明顯的貢獻，但也有著其自身的變化規(guī)律，在G32和G40分別出現(xiàn)了一小一大的面積峰值(圖4-2)。G40峰值的出現(xiàn)較大、中濾泡提前了兩個發(fā)育期，之后在G44～G46期間出現(xiàn)了一個明顯的面積增長的趨勢，此期間中濾泡面積呈平穩(wěn)狀，而大濾泡卻呈明顯的面積縮減趨勢。

1，2.G26 3.G28 4.G36 5.G42 6.G46圖3 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)過程中甲狀腺形態(tài)Fig.3 Morphology of throid gland of Bufo raddei tadpoles during metamorphosis

圖4-1 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)發(fā)育過程中甲狀腺和濾泡面積的變化Fig.4-1 Changes of thyroid gland area and follicle area in Bufo raddei tadpoles during metamorphosis

圖4-2 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)發(fā)育過程中小濾泡面積的變化Fig.4-2 Changes of small follicle area in Bufo raddei tadpoles during metamorphosis

2.2.2 甲狀腺濾泡數(shù)量變化

隨著蝌蚪的發(fā)育，甲狀腺不僅在面積呈現(xiàn)快速的增長，其濾泡總數(shù)量以及不同大小濾泡的數(shù)量也不斷增多，而在G42之后甲狀腺面積和濾泡數(shù)量隨之呈現(xiàn)降低趨勢。以不同大小濾泡的數(shù)量作百分比圖(圖5)可見，大濾泡在G28和G34最多，分別為濾泡總數(shù)的47%和49%，G36～G46時次之，占總濾泡數(shù)的27%～35%之間，而G30和G32最少僅為12%和16%。中濾泡數(shù)量在G30和G32最多，分別占總濾泡的53%和49%，在G28、G34～G40和G44時濾泡總數(shù)的30%～39%之間，G42時最少，僅占23%。小濾泡在G42時最多，約占總濾泡的50%，G38、G40和G46次之，占總濾泡數(shù)量的41%和45%，G30、G32和G44分別占總濾泡數(shù)的35%、36%和34%，而在G28和G34時最少，僅為濾泡總數(shù)的13%。

圖5 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)發(fā)育過程中不同大小濾泡比例變化Fig.5 Changes of the ratio of follicles of different sizes in Bufo raddei tadpoles during metamorphosis

圖6 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)發(fā)育過程中濾泡上皮細胞高度的變化Fig.6 Changes of epithelia height in Bufo raddei tadpoles during metamorphosis

表2 花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)發(fā)育中部分參數(shù)間相關(guān)性系數(shù)

注：*表示數(shù)據(jù)間相關(guān)性顯著(P< 0.05)，**表示數(shù)據(jù)間相關(guān)性極顯著(P<0.01)

Note：*indicate significant correlations between data(P<0.05)，**indicate extremely significant correlations between data(P<0.01)

總之，甲狀腺中不同大小濾泡數(shù)量所占比例最高為53%(G30的中濾泡)，最低是12%(G34的小濾泡)。在3種濾泡中，中濾泡數(shù)量所占的比例變化相對平穩(wěn)。

由圖6可見，在G28，甲狀腺中不同大小濾泡的濾泡上皮細胞高度較為接近，其間無顯著性差異(P>0.05)；在G30，不同大小濾泡的濾泡上皮細胞高度呈現(xiàn)出明顯的區(qū)分，大濾泡細胞高度最大，中等濾泡細胞高度僅為大濾泡細胞高度的70.54%，小濾泡的細胞高度僅是大濾泡細胞高度的50.6%，是其自身G28的68.66%，三者之間具有顯著性差異(P<0.05)；G30以后僅在G34、G40、G44和G46等4個發(fā)育期時，大濾泡和中濾泡的細胞高度無顯著性差異(P>0.05)，其他各期3種濾泡細胞高度均有顯著性差異(P<0.05)。從濾泡上皮細胞高度變化趨勢看，3種大小不同的濾泡細胞高度變化存在一定的協(xié)同性，在G28～G30期間，大濾泡細胞高度呈增長趨勢，而中、小濾泡細胞高度卻呈下降趨勢；G32～G34時，3種濾泡細胞高度均呈增高趨勢；在G34～G38期間，中濾泡和小濾泡的細胞高度均呈下降趨勢，而大濾泡在G36時出現(xiàn)了一個次峰值；在G38～G40期間，3種大小的濾泡均呈上升的趨勢；在G40～G46變態(tài)高峰期間，大、中濾泡細胞高度在G42達到各自的峰值，隨即下降，而小濾泡在此期間細胞高度的變化正好與大中濾泡相反，在G42時，細胞高度呈一個低點，隨即在G44出現(xiàn)了僅低于G28的峰值，而此時大中濾泡的細胞高度均呈下降趨勢。

2.3 相關(guān)性分析

選取了蝌蚪發(fā)育的3個關(guān)鍵性時期，將甲狀腺面積、不同大小濾泡面積、濾泡上皮細胞高度分別與蝌蚪的體長、尾長、尾肌高、尾肌寬、眼間距和后肢長等進行了相關(guān)性分析。結(jié)果顯示：G36時，甲狀腺面積僅與眼間距、尾肌寬之間具有極顯著的相關(guān)性，而與體長、尾長、尾肌高和后肢長之間沒有相關(guān)性；不同大小的濾泡面積與6個蝌蚪的生物學(xué)量度值之間均為相關(guān)性極顯著。甲狀腺濾泡上皮細胞高與6個生物學(xué)量度之間的相關(guān)性，除小濾泡上皮細胞高與眼間距之間為相關(guān)性顯著外，其余均為相關(guān)性極顯著。G42時，除甲狀腺面積與尾長之間的相關(guān)性顯著，其他參數(shù)之間均為相關(guān)性極顯著；除小濾泡上皮細胞高與尾肌寬之間為相關(guān)性顯著外，其他參數(shù)之間均呈相關(guān)性極顯著。G46時，除甲狀腺面積與后肢長之間為相關(guān)性顯著外，其他參數(shù)之間均為相關(guān)性極顯著。

3 討論

國內(nèi)外對兩棲類幼體-蝌蚪的變態(tài)發(fā)育過程有大量的報道[19-22]，其中也有對蝌蚪各時期相關(guān)生物學(xué)量度的記錄[6-7，23-24]。本文研究結(jié)果顯示，花背蟾蜍的體長、眼間距、尾肌高和尾肌寬在G38達到最大值，與中國林蛙(Ranachensinensis)[7]一致。尾長在G42達到最大值，與中國林蛙和中華蟾蜍(Bufogargarizans)[6]一致。由此可見，兩棲類蝌蚪的發(fā)育特征表現(xiàn)出很大的相似性。值得注意的是：變態(tài)初期蝌蚪眼位于頭上方近兩側(cè)，眼間距隨著頭部的發(fā)育變大而逐漸變大，在G38時達到最大值。隨后蝌蚪的頭部繼續(xù)發(fā)育增大，但眼間距卻出現(xiàn)了明顯縮小，提示在G38之后，蝌蚪的眼就開始了向頭正中線位置的移動，啟動了向成蛙兩眼位于頭部近中央位置的移動程序。G38～G40后肢長度出現(xiàn)急劇增加，尾肌高和尾肌寬也在G38期達到最大值后隨即呈下降趨勢。那么就可以推斷，G38是蝌蚪變態(tài)發(fā)育的一個轉(zhuǎn)折期，之前是蝌蚪水中生活最佳時期，各器官處于快速生長期，之后各器官進入為了適應(yīng)陸地生活的重建期。這個測量結(jié)果進一步驗證了McDiarmid和Altig將蝌蚪變態(tài)發(fā)育劃分為4個階段，即變態(tài)前期(pre-metamorphosis，G27～37)、臨近變態(tài)期(pro-metamorphosis，G38～39)、變態(tài)高峰期(metamorphosis climax，G40～45)和變態(tài)完成期(complete metamorphosis，G46)[25]的正確性?；ū丑蛤茯蝌轿查L在G42達到最大值后隨即出現(xiàn)快速衰減，而尾肌高和尾肌寬雖然均在G38達到最大值后縮小，但兩者的快速衰減卻分別出現(xiàn)在G42、G44?？梢酝茰y在G42前肢伸展出來的同時肺呼吸開始啟動，而此時四肢的登陸功能尚未健全，需要有強勁有力的尾作為支撐，輔助其初始的登陸過程，完成由水到陸的蛻變。

甲狀腺體積、濾泡體積和濾泡上皮細胞高度與甲狀腺功能有著密切關(guān)系，尤其是濾泡細胞高度可以作為判斷甲狀腺功能的指標[26]。兩棲類的變態(tài)發(fā)育及其發(fā)育時程均受甲狀腺激素的調(diào)控[27-28]，其中蝌蚪發(fā)育時程的長短與甲狀腺機能峰值出現(xiàn)在哪個發(fā)育期有著明顯的相關(guān)性[26]?；ū丑蛤茯蝌郊谞钕倜娣e，大型和中型濾泡面積及其濾泡上皮細胞高度的最大值均出現(xiàn)在G42，與幼體期相對較短的物種如日本蟾蜍(BufoJaponicus)、棕色鋤足蟾(Pelobatesfuscus)[29-30]、中國林蛙和中華蟾蜍一致[6-7]，早于黑斑側(cè)褶蛙(Pelophylaxnigromaculatus)、樹蛙(Rhacophorusarboreus)和黃條背蟾蜍(Bufocalamita)，它們甲狀腺機能峰值出現(xiàn)在尾部開始退化時的G43[8，30-31]，更早于在G44-G45尾退化后期甲狀腺功能才達到峰值的牛蛙(Lithobatescatebeianus)[32]。就甲狀腺分化時間而言，黑斑側(cè)褶蛙蝌蚪[8]是最早的，在G26即可觀察到清晰的濾泡結(jié)構(gòu)，且濾泡腔內(nèi)有明顯的膠質(zhì)存在。花背蟾蜍蝌蚪雖然在G26大部分可見濾泡結(jié)構(gòu)，但腔內(nèi)仍無膠質(zhì)存在。而中華蟾蜍蝌蚪[6]在G28時才能分辨甲狀腺濾泡，但腔內(nèi)無膠質(zhì)；中國林蛙[7]最遲，在G33可分辨出甲狀腺濾泡，且腔內(nèi)已有膠質(zhì)存在。黑斑蛙出現(xiàn)膠質(zhì)最早，即甲狀腺功能的構(gòu)建完成最早，而其功能的峰值出現(xiàn)比花背蟾蜍等4種蝌蚪均晚，是否與黑斑側(cè)褶蛙蝌蚪個體體積大，各種器官的重建任務(wù)重有關(guān)有待于進一步研究。

另外，雖然在中國林蛙和中華大蟾蜍蝌蚪甲狀腺演化的研究中均觀察到了甲狀腺濾泡存在著大小差異，但均未給出詳細數(shù)值的報道。本研究結(jié)果顯示，花背蟾蜍蝌蚪甲狀腺在G28即可區(qū)分大、中、小3種大小的濾泡，雖然在此期不同大小濾泡面積還沒有呈現(xiàn)明顯的差異(P>0.05))，但在G30時3者間即出現(xiàn)了顯著性差異(P<0.05)，更加值得注意的是，在不同發(fā)育期中，不同大小濾泡的數(shù)量比例和面積大小上均呈現(xiàn)了特有的變化趨勢，尤其是小濾泡面積變化與大、中濾泡及甲狀腺整體面積的變化趨勢相異。是否提示了不同大小濾泡在甲狀腺激素分泌方面有著隱含的特點，有待于進一步探究。

[1] 楊曉梅，翟玉梅，崔博文.甲狀腺激素對兩棲類變態(tài)的時序調(diào)控[C]//兩棲爬行動物學(xué)研究(第8輯)：亞洲兩棲爬行動物學(xué)第四屆國際學(xué)術(shù)會議專輯，2000：265-268.

[2] Tata J R.Amphibian metamorphosis as a model for studying the developmental actions of thyroid hormone[J].Biochimie，1999，81(4)：359-366.

[3] Tata J R.Amphibian metamorphosis as a model for the developmental actions of thyroid hormone[J].Molecular and Cellular Endocrinology，2006，246(1-2)：10-20.

[4] Mondou P M，Kaltenbach J C.Thyroxine concentrations in blood serum and pericardial fluid of metamorphosing tadpoles and of adult frogs[J].General and Comparative Endocrinology，1979，39(3)：343-349.

[5] Weil M R.Changes in plasma thyroxine levels during and after spontaneous metamorphosis in a natural population of the green frog，Ranaclamitans[J].General and Comparative Endocrinology，1986，62(1)：8-12.

[6] 劉靜，柴麗紅，吳民耀，等.中華蟾蜍蝌蚪變態(tài)過程中甲狀腺的組織學(xué)變化[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2012，40(3)：7-12.

[7] 柴麗紅，王宏元，王文科.中國林蛙蝌蚪變態(tài)過程中甲狀腺的發(fā)育[J].四川動物，2013，32(3)：393-397.

[8] 葛雅楠，李圓圓，張銀鳳，等.黑斑蛙變態(tài)過程中甲狀腺發(fā)育及甲狀腺激素分泌[J].水生生物學(xué)報，2014，38(4)：714-719.

[9] 李妍，李丕鵬，崔惠生，等.花背蟾蜍蝌蚪皮膚的結(jié)構(gòu)與發(fā)育[J].動物學(xué)雜志，2013，48(4)：588-596.

[10] 劉青坡，錢麗娟，郭素珍，等.全氟辛磺酸(PFOS)對非洲爪蟾(Xenopuslaevis)生長發(fā)育、甲狀腺和性腺組織學(xué)的影響[J].生態(tài)毒理學(xué)報，2008，3(5)：464-472.

[11] 楊皓月，李丕鵬，陸宇燕.環(huán)境污染物對脊椎動物甲狀腺及甲狀腺激素影響的研究現(xiàn)狀[J].環(huán)境化學(xué)，2012，31(6)：823-829.

[12] 屈婷婷，李丕鵬，聶穎，等.長波紫外線照射對花背蟾蜍腎臟結(jié)構(gòu)損傷[J].生態(tài)學(xué)雜志，2012，31(6)：1480-1486.

[13] 馮磊，戴昕鵬，張軍，等.重金屬污染條件下花背蟾蜍跳躍能力與骨骼肌ATP酶和AChE活性變化研究[J].四川動物，2012，31(4)：553-557.

[14] 王江博，李延清，慧恒，等.環(huán)境雌激素雙酚A對花背蟾蜍血清蛋白的影響[J].延安大學(xué)學(xué)報：醫(yī)學(xué)科學(xué)版，2014，12(2)：5-7，20.

[15] 萬麗霞，李宏偉，孫立新，等.花背蟾蜍繁殖與食性研究[J].生物學(xué)通報，2014，49(7)：3-5.

[16] 賈宗平，夏冰芝，魏仲梅，等.花背蟾蜍胃，十二指腸的組織學(xué)觀察[J].西北師范大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2007，43(1)：87-90.

[17] 王曉旭，李丕鵬，高鳳娟，等.花背蟾蜍蝌蚪胃的發(fā)育形態(tài)學(xué)觀察[J].動物學(xué)雜志，2015，50(6)：875-885.

[18] Gosner K L.A simplified table for staging anuran embryos and larvae with notes on identification[J].Herpetologica，1960，16(3)：183-190.

[19] 趙爾宓.介紹一種蛙類胚胎及蝌蚪發(fā)育的分期[J].生物學(xué)通報，1990(1)：13-15.

[20] 孫銘娟，陸宇燕，李丕鵬，等.昆崳林蛙胚后發(fā)育的初步觀察[J].動物學(xué)研究，2003，24(1)：61-66.

[21] 趙蒙蒙，鄭榮泉，宋婷婷，等.飼料營養(yǎng)水平和溫度對棘胸蛙蝌蚪變態(tài)發(fā)育的影響[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，41(20)：119-122.

[22] 汪玉茹，廉靜，李丕鵬，等.史氏蟾蜍蝌蚪發(fā)育的初步研究[J].野生動物，2011，32(3)：146-150.

[23] 肖調(diào)義，趙玉蓉，章懷云，等.人工飼養(yǎng)棘胸蛙蝌蚪變態(tài)發(fā)育的研究[J].水利漁業(yè)，2004，24(1)：19-20.

[24] 李春梅，王曉清，巫旗生，等.牛蛙蝌蚪的生長特性研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，50(22)：4678-4681.

[25] McDiarmid R W，Altig R.Tadpoles：The biology of anuran larvae[M]Chicago：University of Chicago Press，1999.

[26] Jennings D H，Hanken J.Mechanistic basis of life history evolution in anuran amphibians：thyroid gland development in the direct-developing frog，Eleutherodactyluscoqui[J].General and Comparative Endocrinology，1998，111(2)：225-232.

[27] Brown D D.The role of deiodinases in amphibian metamorphosis[J].Thyroid，2005，15(8)：815-821.

[28] Brown D D，Cai L.Amphibian metamorphosis[J].Developmental Biology，2007，306(1)：20-33.

[29] Francois-Krassowska A.The structure of the thyroid gland in ontogenetic development ofPelobatesfuscus(Laur.)[J].Acta Biologica Cracoviensia：Series Zoologia，1982，24：67-72.

[30] Iwasawa H.Comparative morphological studies of the thyroid glands in metamorphosing anuran larvae[J].Science Reports of Niigata University Series D(Biology)，1966，3：9-17.

[31] Francois-Krassowska A.The thyroid structure in ontogenetic development ofBufocalamita(Laur.)[J].Bulletin of the Polish Academy of Sciences：Biological Sciences，1989，37(4)：125-132.

[32] Hanken J，Jennings D H，Olsson L.Mechanistic basis of life-history evolution in anuran amphibians：direct development[J].American Zoologist，1997，37(2)：160-171.

Buforaddei；

Studies on the Relationship Between the Development of Buforaddei Tadpoles and the Morphology of the Thyroid Gland

Gao Fengjuan Lu Yuyan Dai Meiling Li Pipeng*

To describe the relationship between tadpole and thyroid gland morphology inBuforaddeitadpoles during metamorphosis，we recorded morphometrics of tadpoles(body length，tail length，interorbital distance，tail muscle height，tail muscle width and hind limb length).In addition，the thyroid gland area，the follicle areas of different sizes and the epithelia height were measured by histological methods.We selected three key stages，viz.G36，G42 and G46，in tadpole development，then analyzed correlations between thyroid area，follicle area，epithelia height and the six morphometric indices.Body length，internasal space，tail muscle height and tail muscle width reached their respetive maxima in stage G38.Tail length reached its maximum value in stage G42.The length of the hind limb grew fastest during G38-G40.Tail length and tail muscle height showed rapid attenuation at the beginning of G42，tail muscle width showed rapid attenuation during G44.The thyroid gland，the large follicles and medium follicles reached a maximum in G42 and then decreased.Small follicles reached their maximum in G40 then decreased，and rose again in G44.Correlation analysis showed that only the small follicle epithelia height was significantly correlated with internasal space in G36 and tail muscle width in G42.All other correlations were highly significant.Only thyroid gland area was not significantly correlated with body length，long hind legs，tail length and tail muscle height in phase G36.Thyroid gland area was significantly correlated with tail length in G42 and with hind limb length in G46.All other correlations were highly significant.

稿件運行過程

2016-06-12

修回日期：2016-06-30

發(fā)表日期：2016-11-10

蝌蚪；

生物學(xué)量度；

甲狀腺

Tadpole；

Biological measurements；

Thyroid gland

Q959.5 Q954.2

A

2310-1490(2016)04-363-07

為了探究花背蟾蜍蝌蚪變態(tài)發(fā)育期間主要生物學(xué)量度與甲狀腺形態(tài)的關(guān)系，本研究測量了蝌蚪主要發(fā)育期的各項生物學(xué)量度(體長、尾長、眼間距、尾肌高、尾肌寬以及后肢長等)，并利用組織學(xué)方法測量了花背蟾蜍蝌蚪甲狀腺面積，不同大小濾泡面積及其濾泡上皮細胞高度，選擇蝌蚪發(fā)育3個關(guān)鍵期G36、G42和G46，將6個蝌蚪生物學(xué)量度和甲狀腺面積、濾泡面積和濾泡上皮細胞高度進行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示：體長、眼間距、尾肌高和尾肌寬在G38達到最大值，尾長在G42達到最大值；后肢長在G38～G40增長最快；尾長和尾肌高在G42開始快速衰減，尾肌厚在G44才快速衰減。甲狀腺、大濾泡和中濾泡面積在G42達到最大值，而后呈下降趨勢；小濾泡面積在G40達到最大值之后下降，在G44再次上揚。相關(guān)性分析結(jié)果顯示：在濾泡上皮細胞高度方面，僅小濾泡上皮細胞高在G36與眼間距、在G42與尾肌寬為相關(guān)性顯著，其他均為相關(guān)性極顯著。在甲狀腺及濾泡面積方面，僅甲狀腺面積，在G36時與體長、后肢長、尾長和尾肌高間相關(guān)性不顯著；與G42尾長、G46后肢長間相關(guān)性顯著，其他均為相關(guān)性極顯著。

國家自然科學(xué)基金項目資助(30870276)

高鳳娟，女，26歲，碩士研究生；主要從事兩棲爬行動物環(huán)境毒理學(xué)研究。E-mail：279324525@qq.com

*通訊作者：李丕鵬，E-mail：lipipeng@yahoo.com