激活劑對(duì)檢測(cè)活化部分凝血活酶時(shí)間的差異性研究

閆朝春，安仲武，秦繼寶

（連云港市東方醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇連云港222042）

激活劑對(duì)檢測(cè)活化部分凝血活酶時(shí)間的差異性研究

閆朝春，安仲武，秦繼寶

（連云港市東方醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇連云港222042）

目的探討不同激活劑作為活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）檢測(cè)試劑時(shí)對(duì)APTT測(cè)定結(jié)果的影響。方法用鞣花酸和白陶土兩種激活劑分別在LG-PABER-1型血凝分析儀和Sysmex CA-500全自動(dòng)血凝分析儀上進(jìn)行APTT檢測(cè)，并在血漿中分別加入肝素鈉和乏因子血漿進(jìn)行APTT檢測(cè)。運(yùn)用t檢驗(yàn)和方差分析對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果⑴在LG血凝儀上運(yùn)用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對(duì)37例臨床標(biāo)本進(jìn)行APTT測(cè)定結(jié)果顯示：白陶土作為激活劑測(cè)得的結(jié)果高于鞣花酸測(cè)得的結(jié)果（P＜0.05）。⑵同一批號(hào)的鞣花酸作為激活劑在Sysmex血凝儀和LG血凝儀上分別對(duì)40例臨床標(biāo)本進(jìn)行APTT測(cè)定，結(jié)果顯示：LG血凝儀上測(cè)得的結(jié)果高于Sysmex血凝儀測(cè)得的結(jié)果（P＜0.05）。⑶鞣花酸和白陶土作為不同激活劑對(duì)含有不同濃度肝素鈉的血漿35例進(jìn)行APTT測(cè)定結(jié)果顯示：隨著肝素鈉濃度的增加，兩種激活劑的APTT結(jié)果明顯延長(zhǎng)，與未加肝素鈉組比較有顯著差異（P＜0.05）。且鞣花酸組變化比白陶土組變化更明顯。⑷運(yùn)用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對(duì)加入不同乏凝血因子的血漿后的血漿33例進(jìn)行APTT測(cè)定顯示：隨著血漿中加入乏因子血漿的比例增多，兩種激活劑的APTT結(jié)果延長(zhǎng)也明顯，與未加乏因子血漿的血漿的APTT比較有顯著差異（P＜0.05）。且白陶土組變化比鞣花酸組更明顯。結(jié)論不同激活劑APTT檢測(cè)結(jié)果存在差異，且對(duì)肝素或乏因子血漿的敏感性存在差異；同一激活劑在不同儀器上APTT檢測(cè)結(jié)果存在差異。建議不同的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考范圍。

活化部分凝血活酶時(shí)間；鞣花酸；白陶土

活化部分凝血活酶時(shí)間（activated partial thromboplastin time，APTT）測(cè)定是凝血功能檢測(cè)的一項(xiàng)重要指標(biāo)，也是術(shù)前檢查的重要指標(biāo)。它是臨床上反映內(nèi)源性凝血因子缺乏的主要指標(biāo)之一［1］?？煞从衬蜃樱á?、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ）、凝血酶原、纖維蛋白原以及因子Ⅴ、Ⅹ的水平［2］。檢測(cè)方法目前多已儀器化，可運(yùn)用半自動(dòng)和全自動(dòng)血凝分析儀進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)原理是將磷脂（部分凝血活酶）和激活劑加到血漿中，經(jīng)過孵育，再加入適當(dāng)濃度的鈣離子，測(cè)定纖維蛋白形成的時(shí)間，即為活化部分凝血活酶時(shí)間［3-5］。本文探討不同激活劑及激活劑在不同儀器上對(duì)APTT測(cè)定的影響，現(xiàn)將臨床研究報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 樣本采集與處理選取本院臨床作凝血功能檢測(cè)的無黃疸、無溶血、無脂血標(biāo)本。標(biāo)本為靜脈血置于含有1/10體積0.109mol/L枸櫞酸鈉抗凝劑（1份抗凝劑+9份全血）的硅化玻璃真空采血管中（浙江拱東醫(yī)療科技有限公司提供，批號(hào)1306243，公稱液體容量2ml），輕輕地顛倒混勻，以3000r/ min離心15min，收集血漿進(jìn)行試驗(yàn)。

1.1.1 肝素鈉溶液（12.5U/ml）肝素鈉由江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司提供，規(guī)格為2ml：12500單位；國(guó)藥準(zhǔn)字H32020612。將肝素鈉配制成終濃度為12.5U/ml的溶液。

1.1.2 乏因子血漿乏Ⅷ或Ⅸ因子血漿由西門子公司提供（批號(hào)983512）。

1.2 主要儀器與試劑儀器為L(zhǎng)G-PABER-1型血凝分析儀（北京世帝科學(xué)儀器公司）和Sysmex CA-500全自動(dòng)血凝分析儀（希森美康上海公司）。試劑為上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司提供，激活劑為鞣花酸（批號(hào)為892019）和白陶土（批號(hào)為311023）及0.025M的CaCl2溶液（批號(hào)為892030）。

1.3 方法⑴在LG-PABER-1血凝儀上運(yùn)用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對(duì)37例臨床標(biāo)本進(jìn)行APTT測(cè)定。⑵運(yùn)用同一批號(hào)的鞣花酸作為激活劑在Sysmex CA-500血凝儀和LG-PABER-1血凝儀上分別對(duì)40份臨床標(biāo)本進(jìn)行APTT測(cè)定。⑶運(yùn)用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑對(duì)含有不同濃度肝素鈉的血漿35份在LG-PABER-1血凝儀上進(jìn)行APTT測(cè)定。12.5U/ml的肝素鈉加入血漿稀釋，使每份血漿含肝素鈉終濃度分別為0.000U/ml、0.104U/ml、0.156U/ml、0.208U/ml、0.312U/ml、0.417 U/ml、0.625 U/ml，進(jìn)行APTT測(cè)定。⑷運(yùn)用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對(duì)加入不同乏因子血漿后的血漿33份在LG-PABER-1血凝儀上進(jìn)行APTT測(cè)定，加入方法為血漿與乏因子血漿按6：0、5：1、4：2、3：3、2：4混勻，制成待檢血漿進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，所有數(shù)據(jù)由Excel行基本運(yùn)算，導(dǎo)入Stata 9.2統(tǒng)計(jì)軟件包，組間均數(shù)比較運(yùn)用t檢驗(yàn)和方差檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 在LG-PABER-1血凝儀上運(yùn)用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對(duì)37份臨床標(biāo)本進(jìn)行APTT測(cè)定結(jié)果顯示：鞣花酸測(cè)得的APTT為26.1±4.5秒，白陶土測(cè)得的APTT為38.8±6.1s，兩組數(shù)據(jù)存在差異（P＜0.05），且運(yùn)用白陶土測(cè)得的結(jié)果較運(yùn)用鞣花酸測(cè)得的結(jié)果明顯延長(zhǎng)。

2.2 運(yùn)用同一批號(hào)的鞣花酸作為激活劑在Sysmex CA-500血凝儀和LG-PABER-1血凝儀上分別對(duì)40例臨床標(biāo)本進(jìn)行APTT測(cè)定。結(jié)果顯示LGPABER-1測(cè)得的APTT為26.1±4.4s，SYSMEXCA-500測(cè)得的APTT為23.9±4.8s，兩組數(shù)據(jù)存在差異（P＜0.05），且LG-PABER-1血凝儀上測(cè)得的結(jié)果高于Sysmex CA-500血凝儀測(cè)得的結(jié)果。

2.3 運(yùn)用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑對(duì)含有不同濃度肝素鈉的血漿35份進(jìn)行APTT測(cè)定結(jié)果顯示：隨著肝素鈉濃度的增加，兩種激活劑的APTT結(jié)果明顯延長(zhǎng)，與未加肝素鈉組比較有顯著差異（P＜0.05）。且鞣花酸組變化比白陶土組變化明顯，結(jié)果見表1。

2.4 運(yùn)用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對(duì)加入不同乏因子血漿后的血漿33份進(jìn)行APTT測(cè)定顯示：隨著血漿中加入乏因子血漿的比例增多，兩種激活劑的APTT結(jié)果延長(zhǎng)也明顯，與未加乏因子血漿的血漿的APTT比較有顯著差異（P＜0.05）。且白陶土組變化比鞣花酸組更明顯，結(jié)果見表2。

3 討論

APTT是臨床最常用的反映內(nèi)源性凝血系統(tǒng)凝血活性的敏感篩查試驗(yàn)，對(duì)于內(nèi)源性凝血因子缺陷及相關(guān)抑制物的檢測(cè)和蛋白C抵抗現(xiàn)象的篩檢，肝素治療的監(jiān)測(cè)，DIC早期的診斷，術(shù)前檢查等方面有著廣泛的用途［6］。探索有效控制影響APTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果因素的系列方法，臨床可獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，有助于對(duì)APTT試驗(yàn)質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)化操作；有助于醫(yī)生對(duì)血栓前狀態(tài)，血栓性疾病患者體內(nèi)血凝情況做出合理評(píng)價(jià)，有利于患者得到及時(shí)有效的診斷與治療［7］。

表1 不同激活劑對(duì)含肝素鈉血漿測(cè)定APTT結(jié)果（n=35，x±s）

表2 不同激活劑對(duì)含不同乏因子血漿的血漿測(cè)定APTT結(jié)果（n=33，x±s）

作者通過在同一儀器上運(yùn)用不同激活劑對(duì)同一批標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)APTT，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)運(yùn)用鞣花酸和白陶土為激活劑測(cè)定APTT結(jié)果存在很大差異（P＜0.05）。白陶土?xí)r間長(zhǎng)于鞣花酸，分析其原因可能是：白陶土不溶于水，使試劑成為混懸液，它以細(xì)小顆粒存在，可影響磁珠的運(yùn)動(dòng)，摩擦力有所增加，阻力亦增大，黏度便會(huì)增加，完成相同振幅所需時(shí)間延長(zhǎng)；同等條件下，激活凝血因子形成纖維蛋白的過程變長(zhǎng)；鞣花酸溶于水，以離子方式存在，為透明液體，該試劑用于全自動(dòng)血凝儀，它的血漿凝固時(shí)間基本上不受試劑本身因素的影響［8］。因此，同一份標(biāo)本在其它條件相同的情況下，用兩種激活劑進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，白陶土?xí)r間比鞣花酸要延長(zhǎng)。在運(yùn)用鞣花酸為激活劑在不同儀器上進(jìn)行APTT檢測(cè)結(jié)果也存在一定的差異（P＜0.05）。原因可能為檢測(cè)原理的差異，LG血凝儀是利用磁感應(yīng)原理的凝血檢測(cè)法，在樣品中加入一粒磁性小鐵珠，測(cè)試槽兩側(cè)安裝獨(dú)立的線圈，交替產(chǎn)生電磁場(chǎng)，使小磁珠在恒定的血漿黏度中保持恒定的擺幅運(yùn)動(dòng)；采用電磁式感應(yīng)器，測(cè)定磁珠的不同振幅，根據(jù)不同項(xiàng)目，儀器產(chǎn)生不同的磁場(chǎng)強(qiáng)度，由于是感應(yīng)磁珠的相對(duì)運(yùn)動(dòng)，所以不會(huì)受到原血漿粘度的影響。當(dāng)血漿凝固時(shí)，其黏稠度便會(huì)增加，磁珠擺幅逐漸變小至原振幅的50%時(shí)，計(jì)算機(jī)根據(jù)磁珠振幅情況可精確測(cè)試血漿凝固時(shí)間［3］。Sysmex血凝儀的原理是按一定比例混合后的樣本與試劑因發(fā)生散射光的光強(qiáng)與凝集的程度存在一定的關(guān)系，并通過光電轉(zhuǎn)換系統(tǒng)把這種微小的變化轉(zhuǎn)化成放大的電信號(hào)。通過微處理器記錄變化曲線，與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，從而換算出檢測(cè)項(xiàng)目的數(shù)值［9］。說明運(yùn)用這兩種原理進(jìn)行APTT檢測(cè)存在一定的差異。建議各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)自己的儀器和試劑建立自己的正常參考范圍。

APTT是檢測(cè)肝素用量的首選指標(biāo)。應(yīng)用小劑量普通肝素時(shí)（500～10000U/24h）可不做實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，但應(yīng)用中等劑量（10000～20000U/24h）或大劑量（20000～30000U/24h）時(shí)必須定期進(jìn)行APTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，否則臨床醫(yī)生無法判斷結(jié)果。一般情況下，行肝素抗凝后，APTT檢測(cè)結(jié)果較健康對(duì)照組延長(zhǎng)1.5～2.5倍可取得最佳抗凝效果，且出血風(fēng)險(xiǎn)較小。因此，APTT達(dá)健康對(duì)照值1.5倍時(shí)稱為肝素“起效閾值”［10］。本文研究證實(shí)了肝素含量增多，APTT延長(zhǎng)明顯的觀點(diǎn)。肝素可抑制凝血酶，從而妨礙纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，阻止血小板的粘附和聚集，使血漿中抗凝物質(zhì)含量增多，影響凝血試驗(yàn)，使凝血時(shí)間延長(zhǎng)［11］。筆者通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著肝素鈉濃度的增加，兩種激活劑的APTT結(jié)果延長(zhǎng)也增加，與未加肝素鈉組比較有顯著差異（P＜0.05）。在監(jiān)測(cè)肝素時(shí)檢測(cè)APTT鞣花酸作為激活劑比白陶土作為激活劑更敏感。

NCCLS出了一個(gè)H47-A準(zhǔn)則，要求APTT試劑/儀器系統(tǒng)應(yīng)能查出少于0.3U/ml（30%）活性因子Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ的異常延長(zhǎng)結(jié)果［7］。研究發(fā)現(xiàn)：鞣花酸作為激活劑時(shí)，可檢出Ⅷ因子活性低于50%的甲型血友病，白陶土作為激活劑時(shí)，當(dāng)凝血因子活性小于35%或更低時(shí)即可顯示延長(zhǎng)［4，5］。本文對(duì)于乏凝血因子的血漿檢測(cè)APTT的研究發(fā)現(xiàn)，隨著血漿中加入乏因子血漿的比例增多，兩種激活劑的APTT結(jié)果延長(zhǎng)也明顯，與未加乏因子血漿的血漿的APTT比較有顯著差異（P＜0.05）。鞣花酸與白陶土比較，白陶土更敏感。

總之，影響APTT檢測(cè)的因素［12，13］很多，筆者也曾對(duì)于乙醇［14］和酸堿［2］進(jìn)行探討。對(duì)于試劑與儀器對(duì)APTT測(cè)定的影響值得臨床引起重視，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考范圍，這也是APTT難以標(biāo)準(zhǔn)化的因素之一。至于不同儀器使用［15］對(duì)APTT檢測(cè)結(jié)果存在影響以及變異的關(guān)系，有待于作進(jìn)一步的探討。

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Comparison of two activators on activated partial thromboplastin time（APTT）test

YAN Chaochun，AN Zhongwu，QIN Jibao.

Department of Laboratory，Oriental Hospital of Lianyungang，Lianyungang Jiangsu 222042，China.

Objective To investigate the influence of different activators on activated partial thromboplastin time（APTT）test. Methods The APTT level of plasma which differential concentration heparin or poorⅧandⅨplasma was added into was determined by ellagic acid and kaolin in blood clotting analyzers between LG-PABER-1 analyzer and Sysmex CA-500 analyzer.The results were operated by t test and analysis of variance in statistics.Results⑴The APTT levels of 37 cases clinical specimen were tested by ellagic acid and kaolin with the same calcium chloride in LG analyzer.And the result of kaolin group was much higher than result of ellagic acid group（P＜0.05）.⑵The APTT levels of 40 cases specimen were tested by the same ellagic acid with the same calcium chloride in LG analyzer and Sysmex analyzer.And the result of LG analyzer was much higher than Sysmex analyzer's（P＜0.05）.⑶The APTT levels of 35 cases specimen that had differential concentration heparin were tested by two activators.The APTT was obviously increase along with increasing concentration of heparin（P＜0.05）.And ellagic acid group had marked change than kaolin group.⑷The APTT levels of 33 cases specimen that had differential poorⅧandⅨplasma were tested by two activators.The increasing degree of APTT was obviously increase along with increasing concentration of poorⅧandⅨplasma（P＜0.05）.And kaolin group had marked change than ellagic acid group.Conclusions The APTT level was different when in differential analyzer，when by differential activator.Reference range must been established himself by differential analyzer and activator in differential laboratory.

Activated partial thromboplastin time（APTT）；Ellagic acid；Kaolin

R446.11+1

A

1674-1129（2016）05-0571-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.05.011

2016-05-03；

2016-08-18）

閆朝春，男，1977年6月生，本科，副主任技師，研究方向：臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與管理，E-mail：YCC8255@163.COM.