生豬豬衣原體感染的PCR診斷

李潤(rùn)成，馬　攀，李　淼

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

生豬豬衣原體感染的PCR診斷

李潤(rùn)成，馬攀，李淼

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙 410128）

衣原體是介于細(xì)菌和病毒之間的一種微生物，豬衣原體可引起生豬結(jié)膜炎、腸炎和肺炎。2015年4月湖南省益陽(yáng)某規(guī)模豬場(chǎng)，約40%的120～160日齡育肥豬出現(xiàn)眼結(jié)膜發(fā)紅、流淚等癥狀，筆者采用PCR方法檢測(cè)了6份鼻拭子和2份眼睛分泌物拭子，并進(jìn)行了藥物防治，報(bào)告如下。

1　發(fā)病情況

2015年4月起，湖南省益陽(yáng)某規(guī)模豬場(chǎng)120～160日齡的豬群中陸續(xù)出現(xiàn)生豬眼結(jié)膜潮紅，流淚，但食欲和精神狀態(tài)沒(méi)有明顯異常，使用磺胺類藥物以及保肝護(hù)肝類藥物沒(méi)有效果，發(fā)病率約40%左右，一般發(fā)病20 d左右可自行恢復(fù)。

2　實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1樣本采集選取發(fā)病癥狀明顯的生豬，采集眼結(jié)膜分泌物棉拭子2份、鼻拭子6份。

2.2PCR檢測(cè)

2.2.1DNA的提取將采集的棉拭子放于1 mL滅菌PBS當(dāng)中，混勻后2份眼分泌物棉拭子作為1個(gè)樣本，6份鼻拭子2份合成1份作3個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)，共4個(gè)樣本。1個(gè)樣本各取200 μL提取基因組DNA。提取方法按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

2.2.2衣原體的PCR擴(kuò)增參照文獻(xiàn)［1］合成衣原體科外膜蛋白基因通用引物，以提取的基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。結(jié)果眼分泌物棉拭子和1個(gè)鼻拭子混合樣本擴(kuò)增出了預(yù)期大小的特異性條帶（見(jiàn)圖1）。將PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序（序列已登錄GenBank，登錄號(hào)為：KT003536）分析發(fā)現(xiàn)測(cè)出序列同豬衣原體相應(yīng)序列同源性達(dá)到91.7%

3　防治

選取衣原體敏感藥物強(qiáng)力霉素+葡萄糖+電解多維拌料連喂7 d，觀察豬群情況，進(jìn)行藥物效果評(píng)價(jià)。全群飼喂7 d后，沒(méi)有新發(fā)病例出現(xiàn)，已發(fā)病的生豬逐漸康復(fù)，眼結(jié)膜恢復(fù)正常，再拌藥飼喂7 d，豬群基本全部恢復(fù)正常。

圖1　衣原體PCR鑒定結(jié)果

4　討論

本文從出現(xiàn)眼結(jié)膜潮紅、流淚的生豬眼分泌物拭子、鼻拭子，通過(guò)PCR方法擴(kuò)增到了豬衣原體基因，共檢測(cè)了4個(gè)樣本，只有眼分泌物拭子和1個(gè)鼻拭子樣本檢測(cè)為豬衣原體陽(yáng)性，其原因可能有：該豬群主要表現(xiàn)為眼睛問(wèn)題、鼻拭子中豬衣原體檢出率本身較低；DNA提取時(shí)模板質(zhì)量不好或是模板濃度過(guò)高可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果［2］；陰性樣本來(lái)源豬沒(méi)有豬衣原體感染；陰性樣本來(lái)源豬感染過(guò)豬衣原體，但采樣時(shí)病原濃度已很低。

本文從出現(xiàn)眼結(jié)膜潮紅、流淚的生豬眼分泌物拭子、鼻拭子，通過(guò)PCR方法檢測(cè)到了豬衣原體，同時(shí)筆者還將拭子進(jìn)行了細(xì)菌分離鑒定，分離到了葡萄球菌、摩拉克菌，鼠鼻羅菌，但未見(jiàn)到巴氏桿菌或波氏桿菌，證明該次生豬眼結(jié)膜潮紅、流淚與萎縮性鼻炎沒(méi)有關(guān)系，此外，豬場(chǎng)使用衣原體敏感的藥物可起到控制疫病的作用。因此，可以推斷該豬群眼結(jié)膜炎可能與豬衣原體感染有較大的關(guān)系，至于是否完全是豬衣原體感染引起的結(jié)膜炎，由于只在4個(gè)樣本中2個(gè)樣本檢測(cè)到豬衣原體陽(yáng)性結(jié)果。但豬衣原體的感染可呈高發(fā)性無(wú)癥狀感染或?qū)е律i結(jié)膜炎、關(guān)節(jié)炎、心包炎、漿膜炎、腸炎、肺炎、母豬流產(chǎn)和公豬精囊炎［3］，應(yīng)該受到各養(yǎng)豬工作者及獸醫(yī)的關(guān)注。

［1］李應(yīng)國(guó).動(dòng)物衣原體分子檢測(cè)方法研究和診斷試劑盒的研制及應(yīng)用［D］.重慶：重慶大學(xué)生物工程學(xué)院，2014：37.

［2］閆冬春，董雙林，黃倢.PCR檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合征病毒（WSSV）中假陰性的探討［J］.海洋與湖沼，2007，38（2）：146-149.

［3］Kristien De Puysseleyr，Leentje De Puysseleyr，Julie Geldhof，et al.Development and Validation of a Real-Time PCR for Chlamydia suisDiagnosis in Swine and Humans［J］.PLOS ONE，2014，9（5）：1-7.

S855.1+1

B

0529-6005（2016）09-0047-01

2015-06-24

李潤(rùn)成（1979-），男，實(shí)驗(yàn)師，碩士，從事動(dòng)物傳染病的教學(xué)與研究工作，E-mail：lixuesheng99@126.com