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    快速測試板在飲用水微生物檢測中的應用

    2018-01-16 21:22:02浙江方圓檢測集團股份有限公司
    食品安全導刊 2018年12期
    關(guān)鍵詞:大腸菌群底物水樣

    □ 汪 新 浙江方圓檢測集團股份有限公司

    微生物快速檢測技術(shù)在應用中主要劃分為兩種。其一就是在傳統(tǒng)微生物檢測中,改良培養(yǎng)方式及鑒定手段,簡化樣品的處理,包括微生物快速測試板及試劑盒等多種方法。其二就是借助生物工程、遺傳學及熒光法等諸多高科技,能夠直接對微生物細胞及代謝物特異化進行微生物檢測,如PCA以及ATP熒光法等。這兩類方法,第一種方法能夠有效簡化操作步驟,在一定程度上有效提升了檢測的整體特異度及敏感度,在一定程度上縮短了檢測時間,增加了一定的檢測成本。第二種方法的優(yōu)點就是無須培養(yǎng)或只需較短的培養(yǎng)時間,具體的檢測時間縮短,配置部分精密儀器及具備一定經(jīng)驗的檢測人員。

    1 微生物檢測在水質(zhì)檢測方面的現(xiàn)狀

    我國的《生活飲用水衛(wèi)生標準》中所規(guī)定的常規(guī)微生物指標,包括總大腸菌群、菌落總數(shù)以及大腸埃希氏菌。在開展飲用水的微生物檢測過程中,應當確保生物檢測處于無菌環(huán)境下,在完成對檢測實驗室的常規(guī)消毒步驟之后,需要重視培養(yǎng)基的配置,完成多種藥劑混合后的消毒處理。在快速微生物檢測過程中,根據(jù)水質(zhì)的檢測情況,采用快速測試板檢測具有經(jīng)濟實用、快速優(yōu)勢,適合運用于水質(zhì)檢測中。

    2 快速測試板的檢測原理及操作方法

    2.1 快速測試板的檢測原理

    微生物快速測試板是一種事先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,含有標準的營養(yǎng)培養(yǎng)基及吸水凝膠。培養(yǎng)基有效結(jié)合了酶及底物反應的特異性和菌落顏色的可視化信息,可以在自然環(huán)境中檢測和鑒定不同的微生物個體,還可以對混合生長的多種微生物進行檢測。此種顯色培養(yǎng)基是一類利用微生物自身代謝產(chǎn)生的酶與相應顯色底物反應顯色的原理來檢測微生物的新型培養(yǎng)基。這些相應的顯色底物由產(chǎn)色基因和微生物部分可代謝物質(zhì)組成,在特異性酶作用下,游離出產(chǎn)色基因顯示一定顏色,直接觀察菌落顏色即可鑒定菌種。此種新型分離性培養(yǎng)基,具備較高的反應靈敏度及特異性。

    2.2 快速測試板的操作步驟

    采取快速檢測板檢測方法,有效減去了水樣的處理、實驗室及使用設備的消毒以及培養(yǎng)基制備等較為煩瑣的步驟。在完成水樣采集之后,在無菌條件下,在實驗面上放置微生物測試板,揭開上層膜,采用消過毒的吸管,抽取1 mL的飲用水水樣,將其緩慢靜滴至紙片上,緩慢覆蓋上層膜,在靜置10 s之后培養(yǎng)基凝固。將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)。依照相應的微生物檢測項目具體需求,按照既定的時間及培養(yǎng)溫度加以培養(yǎng)。最后能夠鑒定具體的菌落顏色及特點。

    3 微生物快速測試板實際運用

    將快速測試板測試方法運用于某公司的水質(zhì)檢測工作中,針對400份水樣完成了四種菌體的分批檢測,并且針對5%的水樣,完成了精密度試驗及對比傳統(tǒng)檢測方法試驗。

    依照《生活飲用水標準檢驗方法》GB/T5750.12-2006,借助平皿計數(shù)法完成菌落總數(shù)檢測,將水樣置于37 ℃營養(yǎng)瓊脂的有氧條件下共計48 h,得出1 mL水樣中所存在的菌落總數(shù),能夠直接用眼睛觀察。菌落的總數(shù)測試板應用原理,與國際標準測試方法一致。取出1 mL的水樣,實驗前將營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基涂抹于測試板之上,后添加脫氫酶指示劑TTC,菌落在測試片上呈現(xiàn)紅色,從而有效縮短計數(shù)時間,同時,還能夠提升計數(shù)效果。

    3.1 總大腸菌群檢測

    總大腸菌群主要指的是在一群在37 ℃培養(yǎng)24 h后,能發(fā)酵乳糖并產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭陰性無芽孢桿菌。依照生活飲用水的檢測指標方法,針對總大腸菌群的具體監(jiān)測方法包括:濾膜法、多管發(fā)酵法以及酵底物法。

    3.2 耐熱大腸菌群檢測

    通過提升該菌群的培養(yǎng)溫度,從而有效區(qū)分處于自然溫度環(huán)境下的大腸菌群,以及糞便中的大腸菌群。耐熱大腸菌群即在44.5 ℃溫度下,仍然存活的大腸菌群。生活飲用水的具體檢測方法中,針對耐熱大腸菌群的檢測方法,主要包括兩種:濾膜法及多管發(fā)酵法。

    3.3 大腸埃希氏菌檢測

    該種菌體通常也被稱為大腸桿菌,能夠在人體內(nèi)產(chǎn)生病原體生成病原性,極易導致嬰幼兒及牲畜腹瀉。因此,應當更進一步檢測大腸桿菌及耐熱大腸菌群。

    4 結(jié)語

    水資源逐步匱乏的情況下,飲用水微生物檢測工作開展尤為重要??焖贉y試板運用于飲用水微生物檢測中更好克服了培養(yǎng)基批次不同、配制條件不同及操作人員不同等問題,且整體檢測操作也較為簡單,方便攜帶,方便取樣,同時,還省時省力,加快了飲用水微生物的檢測速率,提升了檢測準確性。

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