• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    牦牛乳硬質(zhì)干酪苦味肽的分離與特征鑒定

    2016-11-14 12:37:52宋雪梅
    食品科學(xué) 2016年15期
    關(guān)鍵詞:硬質(zhì)干酪葡聚糖

    宋雪梅,張 炎,楊 敏,梁 琪,*

    (1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅 蘭州 730070;2.甘肅省功能乳品工程實(shí)驗(yàn)室,甘肅 蘭州 730070;3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院,甘肅 蘭州 730070)

    牦牛乳硬質(zhì)干酪苦味肽的分離與特征鑒定

    宋雪梅1,2,張 炎1,2,楊 敏2,3,梁 琪1,2,*

    (1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅 蘭州 730070;2.甘肅省功能乳品工程實(shí)驗(yàn)室,甘肅 蘭州 730070;3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)理學(xué)院,甘肅 蘭州 730070)

    為了探究牦牛乳硬質(zhì)干酪中苦味肽組成特征,采用氯仿-甲醇法提取苦味肽,通過(guò)Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜進(jìn)行分離純化,并利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)對(duì)其分離的苦味較強(qiáng)組分進(jìn)行特征鑒定。結(jié)果表明:經(jīng)Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜分離得到3 個(gè)不同分子質(zhì)量的組分,組分Ⅱ具有明顯苦味。LC-MS/MS鑒定出組分Ⅱ中存在14 種苦味肽,主要為氨基酸殘基數(shù)目7~17個(gè)、分子質(zhì)量小于2 000 D的小肽,苦味肽序列中存在的疏水性氨基酸主要有脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸,800~1 500 D苦味肽占64.29%,源自β-酪蛋白(β-casein,β-CN)降解產(chǎn)物的苦味肽占92.86%。因此,干酪成熟過(guò)程中源自β-CN的具有較強(qiáng)疏水性、分子質(zhì)量小于2 000 D的混合多肽的積累可能對(duì)干酪苦味的產(chǎn)生有較大影響。

    牦牛乳硬質(zhì)干酪;苦味肽;特征;β-酪蛋白

    宋雪梅, 張炎, 楊敏, 等. 牦牛乳硬質(zhì)干酪苦味肽的分離與特征鑒定[J]. 食品科學(xué), 2016, 37(15): 160-164. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-201615027. http://www.spkx.net.cn

    SONG Xuemei, ZHANG Yan, YANG Min, et al. Separation and characterization of bitter peptides from hard cheese made from yak milk[J]. Food Science, 2016, 37(15): 160-164. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201615027. http://www.spkx.net.cn

    在干酪成熟過(guò)程中,酪蛋白在凝乳酶、纖維蛋白溶酶、發(fā)酵劑蛋白酶和肽酶等作用下,逐漸降解成寡肽、小肽和游離氨基酸,但是成熟過(guò)程中發(fā)生不恰當(dāng)降解時(shí),干酪將產(chǎn)生苦味等缺陷。研究表明,酪蛋白降解產(chǎn)物——苦味肽對(duì)Cheddar干酪[1]、Ragusano干酪[2]等苦味的產(chǎn)生起了重要作用。

    肽的苦味源自于肽的疏水性氨基酸如精氨酸、亮氨酸、甘氨酸、苯丙氨酸和脯氨酸,它們是苦味受體的結(jié)合位點(diǎn)[3]。多肽中的疏水性氨基酸不像完整蛋白質(zhì)分子被包藏在內(nèi)部,而是暴露在外,當(dāng)接觸味蕾時(shí),就會(huì)產(chǎn)生苦味。疏水性氨基酸側(cè)鏈暴露越多,多肽苦味強(qiáng)度就越大[4]。干酪中苦味肽的產(chǎn)生主要與凝乳酶和發(fā)酵劑有關(guān)[5]。干酪成熟過(guò)程中酪蛋白降解程度的增加或者降解過(guò)程中形成的中間產(chǎn)物沒(méi)有被充分降解時(shí),將會(huì)產(chǎn)生苦味肽。干酪中積累的苦味肽超過(guò)一定閾值后,干酪將產(chǎn)生苦味。干酪苦味影響了消費(fèi)者的接受程度和市場(chǎng)前景,因此,基于重要的經(jīng)濟(jì)原因,干酪苦味及苦味肽受到特別關(guān)注。

    近年來(lái),隨著先進(jìn)分析技術(shù)的發(fā)展(如質(zhì)譜),已鑒定出許多苦味肽。Guigoz等[6]從Swiss-Mountain干酪中分離到具有苦感的二肽。Broadbent等[7]認(rèn)為苦味肽β-CN(f193-209)和αs1(f1-9)含量能夠作為Cheddar干酪和模擬干酪產(chǎn)生過(guò)度苦味的指標(biāo)。Toelstede等[8-9]通過(guò)感官引導(dǎo)分級(jí)技術(shù),在Gouda干酪中發(fā)現(xiàn)了有助于干酪產(chǎn)生苦味的12 種多肽。Karametsi等[10]通過(guò)凝膠色譜、半制備型反相液相色譜和串聯(lián)質(zhì)譜在具有刺激性苦味干酪中鑒定出了5 種苦味肽。Liu Xiaowei等[11]利用液相色譜-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜(liquid chromatography-time of flight-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-TOF-MS/MS)鑒定了乳清蛋白酶解產(chǎn)物中存在的苦味肽。

    牦牛乳硬質(zhì)干酪營(yíng)養(yǎng)豐富、成熟期較長(zhǎng),且原料乳中有較高含量的β-酪蛋白(β-casein,β-CN)[12],因此,鑒于不同干酪在原料乳、制作工藝、成熟方法等方面存在的差異,本研究通過(guò)提取牦牛乳硬質(zhì)干酪中的苦味肽,采用葡聚糖凝膠色譜對(duì)其進(jìn)行分離純化,結(jié)合感官評(píng)價(jià)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(liquid chromatography-mass spectrometry/mass spectrometry,LC-MS/MS)技術(shù)對(duì)其苦味肽組分進(jìn)行鑒定,尋求干酪中存在的主要苦味肽,了解其苦味肽特征,為更好地控制牦牛乳硬質(zhì)干酪苦味、獲得干酪良好風(fēng)味提供相關(guān)數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1材料與試劑

    15 ℃成熟4 個(gè)月的牦牛乳硬質(zhì)干酪。

    藍(lán)色葡聚糖2000、Sephadex G-25葡聚糖凝膠 美國(guó)GE公司;氯仿、甲醇(均為分析純) 天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司;硫酸奎寧(分析純) 上海源葉生物科技有限公司;甲酸(分析純)、乙腈(色譜純)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

    1.2儀器與設(shè)備

    1.6mm×75 cm普通層析柱 上?;巧锟萍加邢薰?;MODEL BSZ-160自動(dòng)部分收集器 上海青普滬西儀器廠;754PC型紫外分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司;RE-5205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;GLZ-0.4冷凍真空干燥機(jī) 北京速原中天科技有限公司;LTQ-Velos LC-MS/MS雙壓線性離子阱質(zhì)譜儀美國(guó)Thermo Finnigan公司。

    1.3方法

    1.3.1干酪苦味肽的提取

    參考Harwalkar等[13]方法,采用氯仿-甲醇法提取干酪中苦味肽,并將提取的苦味肽真空冷凍干燥后貯藏在-18 ℃?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2Sephadex G-25凝膠色譜分離純化

    將苦味肽配制成70 mg/mL的溶液,上樣體積為1 mL,去離子水洗脫,洗脫速率為0.5 mL/min,每管收集體積為4.0 mL,檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm,收集液通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    1.3.3苦味肽各組分的苦味程度評(píng)價(jià)

    經(jīng)過(guò)培訓(xùn)和感官能力測(cè)試后,篩選出7 人組成評(píng)價(jià)小組,以0、2.9×10-3、5.8×10-3、1.2×10-2、2.4×10-2mmol/L硫酸奎寧作為參比溶液,評(píng)定員由弱到強(qiáng)地品嘗參比溶液,記住每種溶液的苦味程度。采用5 分制進(jìn)行評(píng)定、打分,1~5 分表示干酪苦味程度為幾乎檢測(cè)不到苦味、輕微苦味、中等苦味、非常強(qiáng)的苦味、令人難以接受的苦味。為了在相同條件下品嘗苦味肽的苦味程度,在評(píng)定之前,將其配成相同濃度的苦味肽樣品。評(píng)定員用蒸餾水漱口之后,將1 mL苦味肽溶液含在嘴里,大約10 s后吐出,進(jìn)行評(píng)定、打分。

    1.3.4LC-MS/MS鑒定苦味肽特征

    液相條件:分離柱為RP柱(150 μm×100 mm,5 μm)。流動(dòng)相A:0.1%甲酸-水溶液;流動(dòng)相B:0.1%甲酸-乙腈;上樣量為20 μg,流速為2 μL/min;線行梯度洗脫:0~50 min,4%~50% B;50~54 min,50%~100% B;54~60 min,維持100% B。

    LTQ Velos質(zhì)譜儀通過(guò)微噴霧接口接到LC設(shè)備上,二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)同時(shí)獲得。全掃描范圍m/z 300~1 800,每次全掃描后采集20 個(gè)最強(qiáng)離子碎片圖譜,動(dòng)態(tài)排除設(shè)置:重復(fù)點(diǎn)2;重復(fù)持續(xù)時(shí)間30 s;排除重復(fù)時(shí)間90 s。二級(jí)質(zhì)譜數(shù)據(jù)自動(dòng)通過(guò)BioworksBrowser rev. 3.1在ipi.HUMAN.v3.53中獲得。SEQUEST檢索結(jié)果再用Build Summary軟件進(jìn)行比較,整合刪除冗余信息,保證數(shù)據(jù)的正確性。

    針對(duì)LC-MS/MS鑒定出的苦味肽,根據(jù)構(gòu)成它的氨基酸種類和數(shù)目,參考Ney[14]的方法計(jì)算苦味肽的平均疏水性值(Q)。具體計(jì)算公式如下:

    式中:Δft為氨基酸自由能改變量;n為肽中氨基酸殘基數(shù)目。

    1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

    數(shù)據(jù)采用SPSS軟件進(jìn)行顯著性分析,Origin 8.0軟件進(jìn)行作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜分離純化結(jié)果

    圖1 牦牛乳硬質(zhì)干酪苦味肽的Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜圖Fig. 1 Sephadex G-25 gel filtration chromatogram of bitter peptides in hard cheese made from yak milk

    由圖1可知,提取到的苦味肽經(jīng)Sephadex G-25葡聚糖凝膠,被分離成3 個(gè)組分。依據(jù)苦味肽洗脫的前后順序,將3 個(gè)組分分別命名為組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

    2.2干酪中苦味肽各組分苦味程度的比較

    圖2 Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜分離的各組分苦味程度的比較Fig. 2 Comparison of bitterness of different components separated by Sephadex G-25 gel column chromatography

    由圖2可知,苦味肽組分Ⅱ具有輕微苦味,其苦味程度強(qiáng)于組分Ⅰ和組分Ⅲ??辔峨慕M分Ⅱ與組分Ⅰ、Ⅲ之間的苦味程度差異顯著(P<0.05),苦味肽組分Ⅰ、Ⅲ之間的苦味程度差異不顯著(P>0.05)。

    在該實(shí)驗(yàn)中,算法使用RBF核函數(shù),其中C=120,gamma=0.02。用10組真實(shí)數(shù)據(jù)交叉驗(yàn)證得到經(jīng)驗(yàn)誤差為x=0.012, y=0.009;真實(shí)誤差值為ΔE= 1.21。

    2.3苦味肽組分Ⅱ的LC-MS/MS鑒定

    通過(guò)LC-MS/MS對(duì)苦味肽組分Ⅱ進(jìn)行分離鑒定,得到的樣品基峰離子流色譜見(jiàn)圖3。在質(zhì)譜分析過(guò)程中,精確質(zhì)量數(shù)掃描可以確定離子所帶電荷數(shù),利用二級(jí)質(zhì)譜得到的碎片離子可識(shí)別肽段的氨基酸序列。通過(guò)與數(shù)據(jù)庫(kù)搜索匹配,結(jié)合肽片段檢測(cè)頻次和文獻(xiàn)[15]報(bào)道,篩選出17 種多肽,其具體結(jié)果見(jiàn)表1。

    圖3 Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜分離的苦味肽組分Ⅱ的基峰離子流色譜圖Fig. 3 Base peak ion chromatography of fraction II separated by Sephadex G-25 gel filtration chromatography

    表1 Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜分離的苦味肽組分Ⅱ中鑒定的特征肽段Table 1 Specific peptide sequences identified in fraction II separated by Sephadex G-25 gel filtration chromatography

    由表1可知,大部分匹配的多肽源自酪蛋白,組分Ⅱ中存在的特征肽均為氨基酸殘基數(shù)目7~17 個(gè)、分子質(zhì)量小于2 000 D的肽段,其中分子質(zhì)量在800~1 500 D的肽段為苦味肽的主要部分,占71%。各肽段中氨基酸出現(xiàn)頻率較高的疏水性氨基酸主要有脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸??辔峨闹饕醋驭?CN和αs1-酪蛋白(αs1-CN)的降解產(chǎn)物,特別是β-CN。源自于β-CN降解產(chǎn)物的肽鏈13 條,其中大部分主要源自C末端多肽的降解,且肽段中的疏水性殘基比例在71%以上。由于在所有牛乳蛋白中β-CN最疏水,而其C末端序列又是β-CN肽鏈中最疏水的[16],因此比較容易產(chǎn)生苦味肽。源自于αs1-CN降解產(chǎn)物的苦味肽肽鏈有4 條,主要源自多肽的N末端降解,且肽段中的疏水性殘基比例在62%以下。

    2.4組分Ⅱ中各苦味肽疏水性值分析

    一般通過(guò)肽的疏水程度可以判斷其是否具有苦味,當(dāng)疏水性氨基酸殘基裸露在肽鏈表面時(shí),刺激舌上的苦味受體(味蕾)產(chǎn)生苦味。因此,按照Ney[14]的方法,計(jì)算出苦味肽組分Ⅱ中17 種多肽的疏水性值,見(jiàn)表2。

    表2 牦牛乳硬質(zhì)干酪中苦味肽組分Ⅱ中所鑒定特征肽的疏水性值(Q)Table 2 Hydrophobicity of characteristic peptides from fraction II

    由表2可知,除了來(lái)自αs1-CN降解產(chǎn)物IKHQGLPQ、HQGLPQE、SDIPNPIGSENSG的多肽Q值<5 443.1 J/mol之外,其他14 種多肽的Q值>5 861.8 J/mol。因此,根據(jù)Q值規(guī)則,苦味肽組分Ⅱ中存在14 種具有苦味的肽,源自β-CN降解產(chǎn)物的苦味肽占92.86%,800~1 500 D苦味肽占64.29%。

    3 討 論

    Champion等[1]發(fā)現(xiàn)Cheddar干酪中苦味肽分子質(zhì)量為190 D。Engel等[17]通過(guò)消除實(shí)驗(yàn),確定苦Camembert干酪的苦味主要由400~3 000 D的小肽所引起。Topcu等[18]利用超濾、凝膠色譜和反相高效液相色譜從Turkish白干酪和Kasar干酪中分離的苦味肽分子質(zhì)量為500~4 000 D和200~700 D。來(lái)自血紅蛋白、玉米蛋白、酪蛋白和大豆蛋白等降解物的苦味肽也是由2~27 個(gè)氨基酸殘基組成,分子質(zhì)量為200~3 000 D。因此,牦牛乳硬質(zhì)干酪中苦味肽分子質(zhì)量(875.09~1 881.25 D)在所報(bào)道的苦味肽分子質(zhì)量范圍之內(nèi)。

    Edwards等[19]發(fā)現(xiàn)來(lái)自Cheddar干酪的苦味肽中具有較高含量的谷氨酸、脯氨酸、亮氨酸和纈氨酸,而組氨酸、酪氨酸和甲硫氨基酸的含量較低。Toshikazu等[20]在大豆蛋白苦味肽的研究中也發(fā)現(xiàn),纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和異亮氨酸含量較高。Fitzgerald等[21]發(fā)現(xiàn)苦味肽中含有較多的脯氨酸。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)苦味肽序列中疏水性氨基酸頻數(shù)從高到低的順序依次為脯氨酸、纈氨酸和亮氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸。肽的苦味作用主要取決于肽側(cè)鏈末端的疏水性氨基酸殘基,這具備了與苦味受體結(jié)合的前提條件。疏水性氨基酸殘基在多肽中比例越高,則該多肽苦味越重[22],而在本實(shí)驗(yàn)中測(cè)定的大多數(shù)肽段中疏水性殘基比例在71%以上,這使得多肽的苦味程度可能較強(qiáng)。

    另外,苦味肽的苦味還與特定分子構(gòu)象相關(guān)。當(dāng)多肽鏈兩端形成回折構(gòu)象時(shí),苦味較重,而脯氨酸(Pro)殘基對(duì)多肽鏈形成回折構(gòu)象起著重要的作用[23]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)大部分鑒定出的多肽末端部位多次出現(xiàn)疏水性氨基酸如脯氨酸、亮氨酸、纈氨酸等,且脯氨酸出現(xiàn)的頻率很高。在—Pro—Pro—基團(tuán)間插入L-型或疏水性氨基酸時(shí)苦味并不減弱,插入苯丙氨酸時(shí),苦味將大大增強(qiáng)[24]。本實(shí)驗(yàn)測(cè)定的苦味肽序列如YQEPVLGPVRGPFPIIV、YQEPVLGPVRGPFPII、Q E P V L G P V R G P F P、Y Q E P V L G P V R G P F P、V Y P F P G P I P N、Q E P V L G P V R G P F P I I、EPVLGPVRGPFPII中發(fā)現(xiàn)在脯氨酸和脯氨酸基團(tuán)之間插入了疏水性氨基酸或者苯丙氨酸。在牦牛乳硬質(zhì)干酪中發(fā)現(xiàn)存在YQEPVLGPVRGPFPIIV序列,而苦味肽β-CN(f193-209)的序列為YQQPVLGPVRGPFPIIV,將Q變成E,因此可判斷YQEPVLGPVRGPFPIIV具有苦味。在重口味Cheddar干酪[10]和Gouda干酪[8]中發(fā)現(xiàn)的苦味肽YQEPVLGPVRGPFPI也存在于牦牛乳硬質(zhì)干酪中。同時(shí)還存在與YQEPVLGPVRGPFPI 前后差1或2 個(gè)氨基酸肽段YQEPVLGPVRGPFPII、QEPVLGPVRGPFPII、YQEPVLGPVRGPFP、EPVLGPVRGPFPII、QEPVLGPVRGPFP等。Karametsi等[10]發(fā)現(xiàn)GPVRGPFPIIV是重口味Cheddar干酪中苦味程度的主要貢獻(xiàn)者。Singh等[25]曾發(fā)現(xiàn)與β-CN(f193-209)相關(guān)的降解物β-CN(f196-209)、β-CN(f200-209)、β-CN(f202-209)的苦味閾值低于β-CN(f193-209)。Broadbent等[26]在Cheddar干酪中發(fā)現(xiàn)的αs1-CN(f1-7)有助于干酪產(chǎn)生苦味,而在牦牛乳硬質(zhì)干酪中也發(fā)現(xiàn)了類似的多肽序列RPKHPIK。

    綜上所述,本實(shí)驗(yàn)所測(cè)定的牦牛乳硬質(zhì)干酪中苦味肽具有呈現(xiàn)苦味的特征,且苦味較強(qiáng)的多肽主要有RPKHPIK、YQEPVLGPVRGPFPIIV、Q E P V L G P V R G P F P、Y Q E P V L G P V R G P F P、VYPFPGPIPN、QEPVLGPVRGPFPII、LPPTVMFPPQ、YQEPVLGPVRGPFPI、TPVVVPPFL、VYPFPGPIPN。

    4 結(jié) 論

    Sephadex G-25葡聚糖凝膠色譜將苦味肽分離成3 個(gè)不同分子質(zhì)量的組分,且組分Ⅱ具有明顯苦味。經(jīng)LC-MS/MS對(duì)組分Ⅱ進(jìn)行鑒定,組分Ⅱ中有14 種苦味肽,主要是氨基酸殘基數(shù)目為7~17 個(gè)、分子質(zhì)量小于 2 000 D的小肽,其中800~1 500 D的苦味肽占64.29%,苦味肽序列中出現(xiàn)的疏水性氨基酸頻數(shù)從高到低依次為脯氨酸、纈氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸,源自β-CN的降解產(chǎn)物的苦味肽占92.86%。

    [1] CHAMPION H M, STANLEY D W. HPLC separation of bitter peptides from Cheddar cheese[J]. Canadian Institute of Food Science and Technology Journal, 1982, 15(4): 283-288. DOI:10.1016/S0315-5463(82)72613-6.

    [2] FALLICO V, MCSWEENEY P L H, HORNE J, et al. Evaluation of bitterness in Ragusano cheese[J]. Journal of Dairy Science, 2005,88(4): 1288-1300. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(05)72795-8.

    [3] GOMEZ M, GARDE S, GAYA P, et al. Relationship between level of hydrophobic peptides and bitterness in cheese made from pasteurized and raw milk[J]. Journal of Dairy Research, 1997, 64(2): 289-297. DOI:10.1017/S0022029996002129.

    [4] PRIPP A H, ARD Y. Modelling relationship between angiotensin-(I)-converting enzyme inhibition and the bitter taste of peptides[J]. Food Chemistry, 2007, 102(3): 880-888. DOI:10.1016/ j.foodchem.2006.06.026.

    [5] LEMIEUX L, SIMARD R E. Bitter flavour in dairy products. 1. A review of the factors likely to influence its development, mainly in cheese manufacture[J]. Le Lait, 1991, 71(6): 599-636. DOI:10.1051/ lait:1991647.

    [6] GUIGOZ Y, SOLMS J. Isolation of a bitter tasting peptide from“Alpkase”, a Swiss mountain-cheese[J]. LWT Lebensmitt Wissensch Technol, 1974, 7(6): 356-357.

    [7] BROADBENT J R, BARNES M, BRENNAND C, et al. Contribution of Lactococcus lactis cell envelope proteinase specificity to peptide accumulation and bitterness in reduced-fat Cheddar cheese[J]. Applied and Environmental Microbiology, 2002, 68(4): 1778-1785. DOI:10.1128/AEM.68.4.1778-1785.2002.

    [8] TOELSTEDE S, DUNKEL A, HOFMANN T. A series of kokumi peptides impart the long-lasting mouthfulness of matured Gouda cheese[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2009, 57(4): 1440-1448. DOI:10.1021/jf803376d.

    [9] TOELSTEDE S, HOFMANN T. Quantitative studies and taste reengineering experiments toward the decoding of the nonvolatile sensometabolome of Gouda cheese[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, 56(13): 5299-5307. DOI:10.1021/jf800552n.

    [10] KARAMETSI K, KOKKINIDOU S, RONNINGEN I, et al. Identification of bitter peptides in aged Cheddar cheese[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2014, 62(32): 8034-8041. DOI:10.1021/jf5020654.

    [11] LIU Xiaowei, JIANG Deshou, PETERSON D G. Identification of bitter peptides in whey protein hydrolysate[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2014, 62(25): 5719-5725. DOI:10.1021/ jf4019728.

    [12] LI Haimei, MA Ying, DONG Aijun, et al. Protein composition of yak milk[J]. Dairy Science & Technology, 2010, 90(1): 111-117.

    [13] HARWALKAR V R, ELLIOTT J A. Isolation of bitter and astringent fractions from Cheddar cheese[J]. Journal of Dairy Science, 1971,54(1): 8-11. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(71)85772-7.

    [14] NEY K H. Prediction of bitterness of peptides from their amino acid composition[J]. Zeitschrift fur Lebensmittel-Untersuchung und-Forschung, 1971, 147(2): 64-68.

    [15] LEMIEUX L, SIMARD R E. Bitter flavour in dairy products. Il. A review of bitter peptides from caseins: their formation, isolation and identification, structure masking and inhibition[J]. Le Lait, 1992,72(4): 335-382. DOI:10.1051/lait:1992426 .

    [16] 王立暉. 胃蛋白酶酶解酪蛋白制備酪啡肽的研究[D]. 成都: 西華大學(xué), 2005: 3-4. DOI:10.7666/d.y906842.

    [17] ENGEL E, NICKLAUS S, SEPTIER C, et al. Evolution of the taste of a bitter Camembert cheese during ripening: characterization of a matrix effect[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2001,49(6): 2930-2939. DOI:10.1021/jf000967m.

    [18] TOPCU A, SALDAMLI I. Determination of peptides caused bitterness in Turkish white cheese and Kasar cheese[J]. Journal of Food Technology, 2007, 5(2): 131-134.

    [19] EDWARDS J, KOSIKOWSKI F V. Bitter compounds from Cheddar cheese[J]. Journal of Dairy Science, 1983, 66(4): 727-734. DOI:10.3168/jds.S0022-0302(83)81851-7.

    [20] TOSHIKAZU N, SATOSHI Y, MICHIO F, et al. Debittering of enzymatic hydrolysates using all aminopeptidase from the edible basidiomycete Grifola frondosa[J]. Journal of Bioscience and Bioengineering, 2002, 93(1): 60-63. DOI:10.1016/s1389-1723(02)80055-x.

    [21] FITZGERALD R J, O’CUINN, G. Enzymatic debittering of food protein hydrolysates[J]. Biotechnology Advances, 2006, 24(2): 234-237. DOI:10.1016/j.biotechadv.2005.11.002.

    [22] 丁建明, 謝小冬, 宋禮, 等. 酶解蛋白產(chǎn)物脫苦技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 糧食與油脂, 2012(8): 5-7. DOI:10.3969/j.issn.1008-9578.2012.08.004.

    [23] ISHIBASHI N, KUBO T, CHINO M, et al. Taste of proline-containing peptides[J]. Agricultural and Biological Chemistry, 1988, 52(1): 95-98. DOI:10.1271/bbb1961.37.2427.

    [24] NAKATANI M, OKAI H. Convenient synthesis of flavor peptides[C]// ACS Symposium Series, 1993: 149-157. DOI:10.1021/bk-1993-0528. ch011.

    [25] SINGH T K, YOUNG N D, DRAKE M, et al. Production and sensory characterization of a bitter peptide from β-casein[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2005, 53(4): 1185-1189. DOI:10.1021/jf049058d.

    [26] BROADBENT J R. Peptide accumulation and bitterness in Cheddar cheese made using single-strain Lactococcus lactis starters with distince proteinase specificities[J]. Journal of Dairy Science, 1998,81(2): 327-337. DOI:10.3168/jds.s0022-0302(98)75581-x.

    Separation and Characterization of Bitter Peptides from Hard Cheese Made from Yak Milk

    SONG Xuemei1,2, ZHANG Yan1,2, YANG Min2,3, LIANG Qi1,2,*
    (1. College of Food Science and Engineering, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China;2. Functional Dairy Product Engineering Laboratory of Gansu, Lanzhou 730070, China;3. College of Science, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, China)

    The intention of this work was to investigate the structural characteristics of bitter peptides in hard cheese made from yak milk. Bitter peptides were extracted with chloroform-methanol mixture and isolated by using gel chromatography,and the more bitter fractions were identified by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS-MS). The results showed that three fractions named as fractions I, II and III were obtained through Sephadex G-25 column chromatography and fraction II tasted the most bitter among these and had a flavor described as slightly bitter. Fourteen peptides were identified in fraction II and these peptides were composed of 7-17 amino acid residues in a molecular weight range less than 2 000 D. Hydrophobic amino acids such as proline, valine, leucine, phenylalanine and isoleucine constituted these bitter peptides. The bitter peptides in a molecular weight range of 800-1 500 D accounted for 64.29% and bitter peptides derived from β-casein(β-CN) accounted for 92.86%. Therefore, polypeptides derived from β-casein with high hydrophobicity and molecular weight below 2 000 D may have a significant influence on the bitterness of cheese.

    hard cheese made from yak milk; bitter peptide; characteristic; β-casein

    10.7506/spkx1002-6630-201615027

    TS252.1

    A

    1002-6630(2016)15-0160-05

    2015-10-20

    國(guó)家自然科學(xué)基金地區(qū)科學(xué)基金項(xiàng)目(31260383)

    宋雪梅(1980—),女,博士,研究方向?yàn)槿槠房茖W(xué)與技術(shù)。E-mail:springwinter110@126.com

    梁琪(1969—),女,教授,博士,研究方向?yàn)槭称菲焚|(zhì)、乳品科學(xué)。E-mail:liangqi@gsau.edu.cn

    引文格式:

    猜你喜歡
    硬質(zhì)干酪葡聚糖
    50號(hào)硬質(zhì)瀝青在海南省瀝青路面中的應(yīng)用研究
    石油瀝青(2022年4期)2022-09-03 09:30:04
    煤基超硬質(zhì)瀝青改性瀝青研究現(xiàn)狀與評(píng)述
    石油瀝青(2022年3期)2022-08-26 09:13:06
    副干酪乳桿菌RS26培養(yǎng)條件優(yōu)化
    副干酪乳桿菌RS26培養(yǎng)基優(yōu)化
    圓盤(pán)鋸超硬質(zhì)耐磨被覆層下方防磨損措施
    石材(2020年11期)2021-01-08 09:21:48
    硬質(zhì)道路石油瀝青產(chǎn)品開(kāi)發(fā)
    石油瀝青(2019年2期)2019-04-28 08:42:24
    葡聚糖類抗病誘導(dǎo)劑在水稻上的試驗(yàn)初報(bào)
    小麥麩皮中β-葡聚糖的分離純化及組成研究
    (1,3)-β-D葡聚糖檢測(cè)對(duì)侵襲性真菌感染早期診斷的意義
    益生菌干酪的研究進(jìn)展
    亚洲色图综合在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 麻豆一二三区av精品| 成熟少妇高潮喷水视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 日本一区二区免费在线视频| 日韩有码中文字幕| 日本 欧美在线| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 黑丝袜美女国产一区| 黄色视频不卡| 久久久精品欧美日韩精品| 一二三四社区在线视频社区8| 国产精品九九99| 久热这里只有精品99| 亚洲国产精品999在线| 此物有八面人人有两片| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品亚洲美女久久久| 国产高清videossex| 老司机午夜福利在线观看视频| 青草久久国产| 精品免费久久久久久久清纯| 丰满的人妻完整版| 亚洲第一av免费看| 国产av一区二区精品久久| 亚洲全国av大片| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 亚洲中文字幕日韩| 国产99久久九九免费精品| 亚洲国产中文字幕在线视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 757午夜福利合集在线观看| 国产精品野战在线观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 中文字幕色久视频| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| e午夜精品久久久久久久| 一进一出抽搐动态| 好男人在线观看高清免费视频 | 后天国语完整版免费观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | АⅤ资源中文在线天堂| 18禁美女被吸乳视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲av电影在线进入| 久久精品影院6| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 国产三级黄色录像| 国产成年人精品一区二区| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品一区二区三区四区久久 | 午夜激情av网站| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲精品一区av在线观看| www.自偷自拍.com| 此物有八面人人有两片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 搡老岳熟女国产| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 91大片在线观看| 免费在线观看日本一区| 中文字幕av电影在线播放| 在线观看舔阴道视频| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品久久电影中文字幕| 国产亚洲欧美精品永久| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 日韩欧美在线二视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲中文日韩欧美视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 香蕉久久夜色| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产高清videossex| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久久国产成人精品二区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 可以在线观看毛片的网站| 欧美中文综合在线视频| 亚洲avbb在线观看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日韩高清综合在线| 国产伦人伦偷精品视频| 最近最新免费中文字幕在线| 制服诱惑二区| 真人一进一出gif抽搐免费| 中文字幕人妻熟女乱码| 黄色片一级片一级黄色片| 可以在线观看的亚洲视频| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 精品午夜福利视频在线观看一区| 高清在线国产一区| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产免费男女视频| 又紧又爽又黄一区二区| 自线自在国产av| 免费看a级黄色片| 丁香欧美五月| 精品一品国产午夜福利视频| 免费高清视频大片| 亚洲九九香蕉| www.www免费av| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日本在线视频免费播放| 黄片播放在线免费| 久久 成人 亚洲| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| av免费在线观看网站| 一进一出抽搐gif免费好疼| 久久人人精品亚洲av| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产一卡二卡三卡精品| 午夜福利免费观看在线| 最近最新中文字幕大全免费视频| 久久久久久久精品吃奶| 后天国语完整版免费观看| 首页视频小说图片口味搜索| 黄色丝袜av网址大全| 9191精品国产免费久久| 午夜激情av网站| 国产野战对白在线观看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 变态另类丝袜制服| 成人手机av| 亚洲avbb在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲国产看品久久| 变态另类丝袜制服| 午夜精品在线福利| 亚洲av电影不卡..在线观看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久伊人香网站| 亚洲天堂国产精品一区在线| 咕卡用的链子| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 久久精品国产综合久久久| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲av日韩精品久久久久久密| videosex国产| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品二区激情视频| 亚洲中文av在线| 国产高清有码在线观看视频 | 亚洲免费av在线视频| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 一级毛片高清免费大全| 精品久久久精品久久久| 国语自产精品视频在线第100页| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 日韩中文字幕欧美一区二区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 1024香蕉在线观看| 90打野战视频偷拍视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 香蕉丝袜av| 国产成人av教育| 热99re8久久精品国产| 欧美一级毛片孕妇| 精品久久久久久成人av| 久久影院123| 日韩欧美国产在线观看| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 丝袜美足系列| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 又黄又爽又免费观看的视频| 久热爱精品视频在线9| 久久人人97超碰香蕉20202| 免费在线观看完整版高清| 亚洲无线在线观看| 成在线人永久免费视频| 日韩欧美免费精品| 亚洲精华国产精华精| 给我免费播放毛片高清在线观看| aaaaa片日本免费| 91精品国产国语对白视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲五月色婷婷综合| 午夜视频精品福利| 国产高清激情床上av| 免费观看人在逋| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲成国产人片在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 成年版毛片免费区| 一区福利在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 在线观看66精品国产| 两个人免费观看高清视频| 母亲3免费完整高清在线观看| 操美女的视频在线观看| 亚洲在线自拍视频| 真人做人爱边吃奶动态| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲全国av大片| 一级a爱片免费观看的视频| 久久天堂一区二区三区四区| 午夜福利免费观看在线| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 啦啦啦韩国在线观看视频| 757午夜福利合集在线观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| av中文乱码字幕在线| 两个人免费观看高清视频| 男女床上黄色一级片免费看| 国产av精品麻豆| 午夜福利在线观看吧| 桃色一区二区三区在线观看| 在线国产一区二区在线| av中文乱码字幕在线| 制服丝袜大香蕉在线| 精品欧美一区二区三区在线| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产欧美日韩一区二区三| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲情色 制服丝袜| 精品不卡国产一区二区三区| 丁香欧美五月| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲一区二区三区色噜噜| 免费av毛片视频| cao死你这个sao货| www.精华液| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久精品欧美日韩精品| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 一级毛片精品| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| АⅤ资源中文在线天堂| 操出白浆在线播放| 一区二区三区国产精品乱码| 神马国产精品三级电影在线观看 | 欧美另类亚洲清纯唯美| 757午夜福利合集在线观看| 村上凉子中文字幕在线| 90打野战视频偷拍视频| 精品熟女少妇八av免费久了| 91老司机精品| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 身体一侧抽搐| 免费高清视频大片| 中文字幕人妻熟女乱码| 中文字幕最新亚洲高清| 欧美成人午夜精品| 日本欧美视频一区| av视频在线观看入口| 首页视频小说图片口味搜索| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 美女免费视频网站| 高清黄色对白视频在线免费看| 两人在一起打扑克的视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 99在线人妻在线中文字幕| 国产色视频综合| 亚洲情色 制服丝袜| 国产视频一区二区在线看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 嫩草影视91久久| 美女高潮到喷水免费观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 人人澡人人妻人| 午夜两性在线视频| 亚洲激情在线av| 一级片免费观看大全| 老司机福利观看| 曰老女人黄片| 日本 av在线| 老鸭窝网址在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 精品久久久久久,| 日韩视频一区二区在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 中文字幕av电影在线播放| 老司机靠b影院| 少妇粗大呻吟视频| 亚洲激情在线av| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 国产成人免费无遮挡视频| 久久婷婷成人综合色麻豆| 十八禁网站免费在线| 99在线视频只有这里精品首页| 91在线观看av| www.自偷自拍.com| 久久久久久久午夜电影| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久青草综合色| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 亚洲国产中文字幕在线视频| 不卡av一区二区三区| 丰满的人妻完整版| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 麻豆一二三区av精品| 不卡一级毛片| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 午夜免费激情av| 最新美女视频免费是黄的| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产91精品成人一区二区三区| 日韩大码丰满熟妇| 久久久久久久久免费视频了| 精品不卡国产一区二区三区| 宅男免费午夜| 午夜免费激情av| 9色porny在线观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产精品,欧美在线| 午夜精品在线福利| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| www.熟女人妻精品国产| 一二三四在线观看免费中文在| 一进一出好大好爽视频| 桃红色精品国产亚洲av| 精品国产乱子伦一区二区三区| 亚洲精品在线美女| 午夜免费观看网址| 日韩高清综合在线| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 国产一区二区三区视频了| 99在线人妻在线中文字幕| 黄色片一级片一级黄色片| 在线国产一区二区在线| 波多野结衣av一区二区av| 精品免费久久久久久久清纯| 国产精品久久电影中文字幕| 国语自产精品视频在线第100页| av视频免费观看在线观看| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | av超薄肉色丝袜交足视频| 久久热在线av| 日韩欧美国产一区二区入口| 51午夜福利影视在线观看| 国产97色在线日韩免费| 不卡av一区二区三区| 午夜a级毛片| 十八禁人妻一区二区| 免费观看精品视频网站| 少妇粗大呻吟视频| 大型av网站在线播放| 国产99久久九九免费精品| 国产在线观看jvid| 一区在线观看完整版| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 99热只有精品国产| 国产国语露脸激情在线看| 午夜日韩欧美国产| 涩涩av久久男人的天堂| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 精品久久久久久成人av| 国产成人欧美| 亚洲五月天丁香| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日本欧美视频一区| 这个男人来自地球电影免费观看| xxx96com| 日韩精品青青久久久久久| 91av网站免费观看| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产视频一区二区在线看| 国产精品日韩av在线免费观看 | 亚洲精品国产区一区二| 十八禁网站免费在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国语自产精品视频在线第100页| 久久精品人人爽人人爽视色| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久香蕉精品热| 女性生殖器流出的白浆| 欧美成人免费av一区二区三区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久中文字幕一级| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 午夜福利欧美成人| 满18在线观看网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 此物有八面人人有两片| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲精品国产色婷婷电影| 丁香欧美五月| 大香蕉久久成人网| 热re99久久国产66热| 免费少妇av软件| 久久久久国内视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 性少妇av在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日本精品一区二区三区蜜桃| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 咕卡用的链子| 丰满的人妻完整版| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜两性在线视频| 久久久久久国产a免费观看| 女人被狂操c到高潮| 久热爱精品视频在线9| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 免费在线观看亚洲国产| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲视频免费观看视频| 可以在线观看的亚洲视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲av美国av| 美女 人体艺术 gogo| 搞女人的毛片| 在线观看免费视频网站a站| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美乱色亚洲激情| 欧美日本中文国产一区发布| 大码成人一级视频| 两个人免费观看高清视频| 变态另类丝袜制服| 女人被狂操c到高潮| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产av精品麻豆| 欧美一级a爱片免费观看看 | 18禁美女被吸乳视频| 看免费av毛片| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 美女 人体艺术 gogo| 黄色成人免费大全| 亚洲中文av在线| www.精华液| 男女午夜视频在线观看| 日韩高清综合在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品久久久久久精品电影 | 男人的好看免费观看在线视频 | 嫩草影院精品99| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩免费av在线播放| 久久精品成人免费网站| 亚洲国产精品合色在线| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 黄片播放在线免费| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 性欧美人与动物交配| 亚洲电影在线观看av| 性色av乱码一区二区三区2| 中文字幕久久专区| 久热这里只有精品99| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| av网站免费在线观看视频| 国产亚洲精品一区二区www| 嫩草影院精品99| 成人精品一区二区免费| 免费高清视频大片| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 美女大奶头视频| 三级毛片av免费| 国产乱人伦免费视频| 91成年电影在线观看| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产成人系列免费观看| 一区在线观看完整版| 欧美精品亚洲一区二区| 免费高清在线观看日韩| 看免费av毛片| 18禁国产床啪视频网站| 久久久久国产一级毛片高清牌| 久久久久久人人人人人| 久久亚洲真实| netflix在线观看网站| 午夜福利,免费看| 欧美成人免费av一区二区三区| 自线自在国产av| 亚洲五月婷婷丁香| 午夜激情av网站| 成在线人永久免费视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 色精品久久人妻99蜜桃| 美女国产高潮福利片在线看| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| or卡值多少钱| 一级毛片高清免费大全| 岛国视频午夜一区免费看| 黄色a级毛片大全视频| 免费高清视频大片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 久久热在线av| 宅男免费午夜| 中文字幕最新亚洲高清| 国产精品久久久久久精品电影 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 午夜a级毛片| 极品人妻少妇av视频| 久久香蕉精品热| 亚洲中文av在线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲中文日韩欧美视频| 在线永久观看黄色视频| 亚洲免费av在线视频| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 色播在线永久视频| 日本精品一区二区三区蜜桃| 午夜久久久在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久午夜综合久久蜜桃| 99re在线观看精品视频| 亚洲一区高清亚洲精品| 精品久久久久久,| 婷婷丁香在线五月| 国产在线观看jvid| 免费不卡黄色视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 一区二区三区精品91| 免费无遮挡裸体视频| 99国产精品一区二区蜜桃av| 又黄又粗又硬又大视频| 国产成人精品无人区| 久久香蕉精品热| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 亚洲精品在线美女| 午夜福利视频1000在线观看 | av视频在线观看入口| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲国产精品成人综合色| 搞女人的毛片| 最近最新中文字幕大全免费视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 久久久久国内视频| 欧美日韩黄片免| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 在线观看免费视频日本深夜| 麻豆av在线久日| 激情视频va一区二区三区| 国产精华一区二区三区| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产极品粉嫩免费观看在线| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 精品一区二区三区四区五区乱码| 波多野结衣高清无吗| 无人区码免费观看不卡| 最好的美女福利视频网| 大码成人一级视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| e午夜精品久久久久久久| 免费看a级黄色片| 国产单亲对白刺激| 搡老岳熟女国产| 狂野欧美激情性xxxx| 日韩精品免费视频一区二区三区| 中文字幕最新亚洲高清| 免费av毛片视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 婷婷丁香在线五月| 国产不卡一卡二| 午夜久久久在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 多毛熟女@视频| 免费av毛片视频| 久久人妻av系列| 日韩欧美三级三区| 怎么达到女性高潮| 欧美激情极品国产一区二区三区| 丁香六月欧美| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 久久香蕉国产精品| 欧美中文综合在线视频| 黄色女人牲交| 国产av一区在线观看免费| 国产一卡二卡三卡精品| 久久午夜综合久久蜜桃| 亚洲第一青青草原| 黄色a级毛片大全视频| 日韩三级视频一区二区三区| 久久 成人 亚洲| 香蕉丝袜av| 老司机在亚洲福利影院| 视频在线观看一区二区三区| 国产亚洲av高清不卡| 精品熟女少妇八av免费久了| 自线自在国产av| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 免费少妇av软件| 制服人妻中文乱码| 亚洲av成人av| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲av成人av|