湘西香醋對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)抗氧化作用

黃潤庭，李宗軍，譚 雅，杜 莎，吳 碩，伍 婧

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，食品科學(xué)與生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長沙 410128）

湘西香醋對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)抗氧化作用

黃潤庭，李宗軍*，譚 雅，杜 莎，吳 碩，伍 婧

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院，食品科學(xué)與生物技術(shù)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長沙 410128）

本研究對秀麗隱桿線蟲分別飼喂配制白醋、釀造白醋、發(fā)酵1 a香醋以及湘西原香醋，通過測定其體內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）含量，谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、過氧化氫酶（catalase，CAT）活力以及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況，對湘西香醋體內(nèi)抗氧化作用進(jìn)行評價。結(jié)果表明：湘西香醋具有明顯抗氧化效果，與對照組相比，發(fā)酵1 a香醋組與湘西原香醋組秀麗隱桿線蟲體內(nèi)ROS含量明顯降低（P＜0.01），分別為對照組的24.03%、39.44%。3 種抗氧化酶活力明顯升高（P＜0.01），湘西原香醋組秀麗隱桿線蟲體內(nèi)GSH-Px、SOD、CAT活力分別為對照組的2、1.3、3 倍。發(fā)酵1 a香醋組與湘西原香醋組秀麗隱桿線蟲體內(nèi)凋亡蛋白CED-3表達(dá)量明顯降低，分別為對照組的53.42%、73.39 %，抗凋亡蛋白CED-9表達(dá)量顯著升高，分別約為對照組的7 倍和6 倍（P＜0.01）。湘西香醋在秀麗隱桿線蟲體內(nèi)具有較強(qiáng)抗氧化作用。

醋；秀麗隱桿線蟲；活性氧；抗氧化酶；細(xì)胞凋亡

食醋是一種常見的調(diào)味品，我國是食醋生產(chǎn)及消費(fèi)大國。2013年我國食醋總產(chǎn)量約為250 萬t[1]，食醋也正朝著產(chǎn)品功能化、市場專業(yè)化、生產(chǎn)工業(yè)化、消費(fèi)理性化等幾個方面發(fā)展[2]。有文獻(xiàn)報道，食醋具有殺菌、抗病毒、軟化血管、預(yù)防動脈粥樣硬化、抗氧化等生理功能[3]，近年來大量醋功能性飲料已被開發(fā)，并受到廣大消費(fèi)者的歡迎。湘西原香醋為湖南省吉首市特產(chǎn)，其色澤棕紅透明、口感柔和甘甜、風(fēng)味清香。湘西原香醋是以當(dāng)?shù)禺a(chǎn)的“黃金葉”、“辣蓼草”等野生中草藥自然發(fā)酵制曲，以大米、泉水為原料，采用天然液態(tài)發(fā)酵方式釀造，并經(jīng)過兩年陳釀而得的成品。

自由基又稱為游離基，細(xì)胞在新陳代謝過程中會產(chǎn)生很多自由基，環(huán)境中化學(xué)污染以及異物刺激等因素也會導(dǎo)致體內(nèi)自由基的增加，體內(nèi)自由基參與一些如吞噬作用、細(xì)胞分裂、能量代謝等生理活動[4]。而體內(nèi)過多自由基的積累則會促進(jìn)細(xì)胞凋亡以及使得DNA分子中的5-甲基胞嘧啶發(fā)生改變從而使得DNA分子斷裂[5]；在生物老化過程中，自由基積累也會導(dǎo)致體內(nèi)蛋白羰基含量增多，從而促進(jìn)老化[6]。

秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans）是一種新型模式生物，以活的大腸桿菌（E. coli）OP50為食物，秀麗隱桿線蟲具有結(jié)構(gòu)簡單、身體透明、繁殖周期短、能感知?dú)馕都拔兜?、對光線和溫度有反應(yīng)等生理特點(diǎn)[7]。此外，對秀麗隱桿線蟲基因組測序已經(jīng)完成，發(fā)現(xiàn)其中60%～80%基因與人類相關(guān)基因高度保守，因此秀麗隱桿線蟲成為了一種受廣大科研工作者歡迎的模式生物[8]。秀麗隱桿線蟲在抗氧化作用方面的研究也有較多報道，例如Ishikado等[9]用白柳葉提取物對秀麗隱桿線蟲突變體gcs-1::Δ2::GFP進(jìn)行給藥，結(jié)果發(fā)現(xiàn)白柳葉提取物能夠促進(jìn)線蟲體內(nèi)SNK-1氧化應(yīng)激通道中的抗氧化基因的表達(dá)，激活抗氧化蛋白如抗氧化酶類，從而結(jié)合并清除自由基，起到保護(hù)細(xì)胞、延長壽命的功效。

目前已有較多研究結(jié)果證實(shí)食醋具有抗氧化作用[10-12]，本實(shí)驗(yàn)主要研究湘西原香醋在秀麗隱桿線蟲體內(nèi)的抗氧化作用，為揭示我國傳統(tǒng)特色調(diào)味品的生理功能特性提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

野生型秀麗隱桿線蟲C. elegans（Bristol N2）以及大腸桿菌（E. coli）OP50均為東南大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院孔璐教授惠贈。

湘西原香醋（發(fā)酵1a后陳釀1a）以及發(fā)酵1 a香醋采自湘西某企業(yè)；長沙白醋（配制、釀造各一瓶）購自長沙湘樺超市。

NGM培養(yǎng)基、LB液體培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）、M9緩沖液均參照文獻(xiàn)[13]配制而成；2’,7’-二氯二氫熒光素二乙酯（2’，7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate，H2DCF-DA）美國Sigma公司；谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）測試盒、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）測試盒、過氧化氫酶（catalase，CAT）測試盒 南京建成生物工程研究所；美麗線蟲凋亡基因（ced-3）酶聯(lián)免疫吸附（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）檢測試劑盒、秀麗隱桿線蟲CED-9蛋白試劑盒（人Bcl-2樣蛋白1（Bcl2L1））ELISA檢測試劑盒 美國RB公司。

1.2 儀器與設(shè)備

MJX-250B-Z電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；SW-CJ-1FD單人單面凈化操作臺 蘇州凈化設(shè)備有限公司；J3870C立式滅菌鍋 山東新華醫(yī)療器械股份有限公司；KW-1000DA數(shù)顯恒溫水浴鍋 上海浦東物理光學(xué)儀器廠；Varioskan Flash多孔化學(xué)發(fā)光檢測儀、Varioskan Flash多功能酶標(biāo)儀 美國Therm Scientific公司；BL92-IIDL超聲波細(xì)胞粉碎機(jī) 無錫沃信儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 食醋NGM培養(yǎng)基的配制

本實(shí)驗(yàn)以配制白醋、釀造白醋、發(fā)酵1 a香醋以及湘西原香醋為研究對象。以湘西原香醋pH值為準(zhǔn)，將其余3 種醋液pH值調(diào)至一致。用0.22 μm濾菌頭過濾后直接添加135 μL于倒有NGM培養(yǎng)基的9 cm平皿上并涂布均勻。待平板上醋液干燥后，涂布大腸桿菌OP50，涂布時應(yīng)盡量離平皿邊緣0.5～1 cm左右，以防止線蟲爬至平皿邊緣。

1.3.2 秀麗隱桿線蟲同步化

挑取20 條處于L4期的秀麗隱桿線蟲至涂有E. coli OP50的NGM培養(yǎng)基平板上，在20 ℃恒溫箱中培養(yǎng)2 h后將線蟲挑走，將平板于20 ℃恒溫箱中培養(yǎng)48～50 h后便可得到同期化的秀麗隱桿線蟲。

1.3.3 秀麗隱桿線蟲體內(nèi)活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平的測定

1.3.3.1 秀麗隱桿線蟲給藥操作

參照文獻(xiàn)[14]的方法并經(jīng)適當(dāng)修改：分別將L4期秀麗隱桿線蟲挑取至分別均勻涂布了135 μL配制白醋、釀造白醋、發(fā)酵1 a香醋、湘西原香醋醋液以及E. coli OP50菌液的NGM平板上，每個平板挑取30 條，以M9緩沖液代替食醋的NGM平板為對照組。

1.3.3.2 ROS水平測定

給藥48 h后，向平板中加入200 μL PBST（PBS中含有0.5%吐溫-20）洗滌秀麗隱桿線蟲20 min，以排除線蟲體內(nèi)食醋；向96 孔板中加入10 μL PBST、70 μL PBS，將線蟲轉(zhuǎn)移至對應(yīng)孔中；隨后加入20 μL 250 μmol/L H2DCF-DA，加入少量E. coli OP50菌液，以促進(jìn)線蟲更好吸收H2DCF-DA；將96 孔板放置于20 ℃搖床孵育30 min，并蓋上蓋子，以免蒸發(fā)；利用多孔化學(xué)發(fā)光檢測儀進(jìn)行熒光檢測，激發(fā)波長485 nm，發(fā)射波長535 nm。

1.3.4 秀麗隱桿線蟲體內(nèi)抗氧化酶活力的測定

1.3.4.1 秀麗隱桿線蟲給藥操作

每個平板挑?。?00f5）條秀麗隱桿線蟲，其余操作同1.3.3.1節(jié)。

1.3.4.2 酶液制備以及酶活力測定

給藥48 h后，將100 條線蟲挑至1.5 mL EP管中，加入1 mL PBS，于超聲波細(xì)胞破碎儀以破碎功率900 W、破碎總時間12 s（超聲3 s，間隔3 s）為超聲參數(shù)對線蟲進(jìn)行破碎。待蟲體裂解后，將混合液4 000 r/min離心15 min，將上清液小心轉(zhuǎn)移至新EP管中，于60 ℃水浴15 min，待其冷卻后，4 000 r/min離心20 min，上清液即為酶液提取液，將酶液提取液轉(zhuǎn)移至新1.5 mL EP管中，4 ℃保存?zhèn)溆肹15]。

各組線蟲GSH-Px、SOD以及CAT活力的測定分別嚴(yán)格按照南京建成生物工程研究所生產(chǎn)試劑盒說明書要求進(jìn)行。

根據(jù)試劑盒說明書，3 種酶活力單位（U）的定義分別為：1）GSH-Px活力單位：每毫克蛋白質(zhì)，扣除非酶反應(yīng)的作用，每分鐘使反應(yīng)體系中GSH濃度降低1 μmol/L為一個酶活力單位；2）SOD活力單位：每毫克組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時所對應(yīng)的SOD量為一個酶活力單位；3）CAT活力單位：每毫克組織蛋白每秒分解1 μmol H2O2的量為一個酶活力單位。

1.3.5 湘西香醋對秀麗隱桿線蟲細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

1.3.5.1 秀麗隱桿線蟲給藥操作

秀麗隱桿線蟲給藥操作同1.3.4.1節(jié)。

1.3.5.2 ELISA法檢測CED-3、CED-9蛋白含量

給藥5 d后，將100 條線蟲挑至1.5 mL EP管中，加入500 μL M9緩沖液，2 000 r/min離心30 s，重復(fù)5 次，以清洗線蟲身上食醋以及E. coli OP50。利用超聲波細(xì)胞破碎儀以破碎功率900 W、破碎總時間12 s（超聲3 s，間隔3 s）為超聲參數(shù)對線蟲進(jìn)行細(xì)胞破碎。破碎勻漿于4 000 r/min離心10 min，小心將上清液分裝至100 μL EP管中，做好標(biāo)記于－20 ℃保存。

各組線蟲CED-3以及CED-9表達(dá)量分別嚴(yán)格按照試劑盒說明書要求進(jìn)行測定。CED-3含量以CED-3標(biāo)準(zhǔn)蛋白（IU/L）表示，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=0.202C+0.071（R2=0.992）來計(jì)算線蟲勻漿中CED-3蛋白含量，其中A為吸光度，C為標(biāo)準(zhǔn)CED-3蛋白含量（IU/L）。CED-9含量以CED-9標(biāo)準(zhǔn)蛋白（ng/mL）表示，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=0.007C+0.540（R2=0.991）來計(jì)算線蟲勻漿中CED-9蛋白含量，其中A為吸光度，C為標(biāo)準(zhǔn)CED-9蛋白質(zhì)量濃度（ng/mL）。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果以Excel 2007以及SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果均以fs表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 湘西香醋對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)自由基的影響

秀麗隱桿線蟲體內(nèi)ROS含量以DCF熒光強(qiáng)度表示，如表1、圖1所示，與對照組相比，給藥4 種食醋的線蟲體內(nèi)ROS含量明顯降低，其中釀造白醋組線蟲體內(nèi)ROS含量顯著下降（P＜0.05），而發(fā)酵1 a香醋組和湘西原香醋組線蟲體內(nèi)ROS含量均極顯著下降（P＜0.01）；而配制白醋組線蟲體內(nèi)ROS含量與對照組不存在顯著差異（P＞0.05）。與釀造白醋組相比，發(fā)酵1 a香醋組和湘西原香醋組線蟲體內(nèi)ROS含量亦極顯著降低（P＜0.01）。發(fā)酵1 a香醋組秀麗隱桿線蟲體內(nèi)DCF熒光強(qiáng)度僅為12.38，與對照組相比下降了75.97%，與釀造白醋組相比下降了63.80%，可見發(fā)酵1 a香醋對ROS的清除效果最好。

表1 4 種食醋對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)DCF熒光強(qiáng)度的影響Table 1 Effect of four kinds of vinegar on DCF fluorescence intensity in C. elegans

圖1 4 種食醋對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)ROS含量的影響Fig.1 Effect of four kinds of vinegar on ROS level in C. elegans

2.2 湘西香醋對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)抗氧化酶的影響

秀麗隱桿線蟲體內(nèi)GSH-Px、SOD、CAT 3 種抗氧化酶活力如圖2所示，4 種食醋均能提高線蟲體內(nèi)3 種抗氧化酶活性。與對照組相比，釀造白醋組與發(fā)酵1 a香醋組線蟲體內(nèi)GSH-Px活力極顯著提高，分別為對照組的2.3 倍與2.7 倍（P＜0.01）。湘西原香醋與配制白醋作用效果相似，線蟲體內(nèi)GSH-Px活力為對照組的2 倍（P＜0.01），但是效果不如釀造白醋組與發(fā)酵1 a香醋組強(qiáng)。與配制白醋組相比，3 種釀造食醋均能明顯提高線蟲體內(nèi)SOD和CAT活力；湘西原香醋組線蟲體內(nèi)SOD、CAT活力分別為對照組的1.3、3 倍；與釀造白醋組以及發(fā)酵1 a香醋組相比，湘西原香醋組線蟲體內(nèi)CAT活力分別提高了32.45%、29.73%（P＜0.05）。

圖2 4 種食醋處理對線蟲體內(nèi)抗氧化酶活力的影響Fig.2 Effect of four kinds of vinegar on the relative activity of three antioxidant enzymes in C. elegans

2.3 湘西香醋對秀麗隱桿線蟲細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

秀麗隱桿線蟲體內(nèi)CED-3、CED-9含量如表2及圖3、4所示，4 種食醋處理均使線蟲體內(nèi)凋亡蛋白CED-3的表達(dá)量較對照組有所下降，其中發(fā)酵1 a香醋組線蟲體內(nèi)CED-3含量降低了46.57%（P＜0.05）；與釀造白醋組相比，發(fā)酵1 a香醋組線蟲體內(nèi)CED-3表達(dá)量下降了37.53%（P＜0.05）。與對照組相比，4 種食醋處理均使線蟲體內(nèi)CED-9含量升高（P＜0.01），與配制白醋組相比，3 種釀造食醋組更能促進(jìn)CED-9表達(dá)；與釀造白醋組比較，發(fā)酵1 a香醋組與湘西原香醋組線蟲體內(nèi)CED-9含量分別提高了45.48%、30.90%（P＜0.01）。以上結(jié)果說明，發(fā)酵1 a香醋對于減少線蟲體內(nèi)CED-3含量以及提高CED-9含量均有較明顯的作用。

表2 4 種食醋處理線蟲體內(nèi)CED-3以及CED-9含量比較Table 2 Effect of four kinds of vinegar on CED-3 and CED-9 levels in C. elegans

圖3 4 種食醋處理對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)CED-3含量的影響Fig.3 Effect of four kinds of vinegar on CED-3 level in C. elegans

圖4 4 種食醋處理對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)CED-9含量的影響Fig.4 Effect of four kinds of vinegar on CED-9 level in C. elegans

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)利用秀麗隱桿線蟲為模式生物，對湘西香醋的體內(nèi)抗氧化作用進(jìn)行探究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)湘西香醋組與對照組以及配制白醋組、釀造白醋組相比，對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)ROS具有更好的清除作用，能夠明顯提高線蟲體內(nèi)GSH-Px、SOD、CAT這3 種抗氧化酶的活力，并且既能減少線蟲體內(nèi)凋亡蛋白CED-3的表達(dá)，也能提高抗凋亡CED-9表達(dá)量。結(jié)合湘西香醋生產(chǎn)所用原料以及釀造工藝[16]可知，中草藥原料中抗氧化物質(zhì)如多酚類物質(zhì)[17-18]能夠進(jìn)入到香醋中，同時發(fā)酵過程中微生物如紅曲霉在發(fā)酵過程中也會產(chǎn)生具有抗氧化作用的功能性物質(zhì)[19]，從而使得香醋含有大量抗氧化功能活性物質(zhì)。有研究表明，湘西原香醋中總酯、氨基態(tài)氮含量以及還原糖含量均處于較高水平[20]，這也使得湘西原香醋具有獨(dú)特的風(fēng)味。有研究發(fā)現(xiàn)香醋中總酚含量以及總黃酮含量分別達(dá)到2.21、1.62 mg/mL，并且具有較好的體外清除自由基能力[21]。對于湘西原香醋抗氧化作用的研究，近年也有報道，王揮等[22]發(fā)現(xiàn)湘西原香醋對肌肉注射黃體酮小鼠產(chǎn)生的黃褐斑具有淡化作用，主要作用機(jī)制為降低小鼠皮膚組織丙二醛以及NO含量，并同時提高了SOD活力。因此可以證實(shí)香醋能夠激活線蟲體內(nèi)抗氧化酶，增強(qiáng)其催化活性。另有報道稱秀麗隱桿線蟲體內(nèi)細(xì)胞凋亡信號通道與人類相似[23]，其中主要基因以及蛋白如表3所示。當(dāng)細(xì)胞接收到凋亡信號時，秀麗隱桿線蟲細(xì)胞能夠在轉(zhuǎn)錄水平上上調(diào)促凋亡蛋白EGL-1的表達(dá)；EGL-1能夠與CED-9結(jié)合，并使得CED-9構(gòu)象發(fā)生變化，從而釋放CED-4二聚體，CED-4二聚體進(jìn)一步寡聚形成CED-4凋亡小體，凋亡小體能夠激活CED-3，引起細(xì)胞凋亡[24]。而線蟲CED-9蛋白是哺乳動物抗凋亡蛋白Bcl-2家族成員中的一員，能與CED-4二聚體結(jié)合，從而拮抗細(xì)胞凋亡[25]。

表3 秀麗隱桿線蟲細(xì)胞凋亡信號通道主要基因及蛋白[24-25]Table 3 Core apoptosis pathway of C. elegans[24-25]

綜合以上結(jié)果可知，湘西原香醋對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)抗氧化具有一定的保護(hù)作用。然而湘西原香醋與沒有經(jīng)過陳釀的發(fā)酵1 a香醋在抗氧化能力上有所差異，由此可以推斷香醋在陳釀過程中，其中一些抗氧化物質(zhì)組分發(fā)生變化，從而導(dǎo)致發(fā)酵時間不同的香醋在體內(nèi)所起的作用有所差異。因此，對不同發(fā)酵時間的湘西原香醋中抗氧化活性物質(zhì)組分鑒定和功能作用仍需進(jìn)一步研究，從而為揭示我國傳統(tǒng)特色香醋抗氧化作用提供科學(xué)依據(jù)，對功能食醋的開發(fā)具有重大意義。

[1] 中商情報網(wǎng). 2013年調(diào)味品百強(qiáng)企業(yè)食醋總產(chǎn)量同比增長13%[N/OL]. (2014-05-26) [2015-04-17]. http://www.askci.com/ news/201405/26/26165852249719.shtml.

[2] 張萬. 2012ü2018年我國食醋競爭格局及行業(yè)發(fā)展趨勢分析[N/OL]. (2013-01-24) [2015-04-17]. http://www.china-consulting.cn/ news/20130124/s83300.html.

[3] 章國洪, 譚檑華, 章麗霞, 等. 論食醋功能及產(chǎn)品多樣化現(xiàn)狀[J]. 中國調(diào)味品, 2013, 38(3): 21-24. DOI:10.3969/ j.issn.1000-9973.2013.03.005.

[4] SIES H. Oxidative stress[M]. Manhattan: Academic Press, 2013: 41-42.

[5] BACK P, BRAECKMAN B P, MATTHIJSSENS F. ROS in aging Caenorhabditis elegans: damage or signaling?[J]. Oxidative Medicine and Cellular Longevity, 2012, 2012: 608478. DOI:10.1155/2012/608478.

[6] 塞冬. 自由基與健康[M]. 沈陽: 遼寧科學(xué)技術(shù)出版社, 2012: 147-150.

[7] HASHMI S, WANG Y, PARHAR R S, et al. A C. elegans model to study human metabolic regulation[J]. Nutrition & Metabolism, 2013, 10(1): 31. DOI:10.1186/1743-7075-10-31.

[8] PETERSEN C, DIRKSEN P, SCHULENBURG H. Why we need more ecology for genetic models such as C. elegans[J]. Trends in Genetics, 2015, 31(3): 120-127. DOI:10.1016/j.tig.2014.12.001.

[9] ISHIKADO A, SONO Y, MATSUMOTO M, et al. Willow bark extract increases antioxidant enzymes and reduces oxidative stress through activation of Nrf2 in vascular endothelial cells and Caenorhabditis elegans[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2013, 65: 1506-1515. DOI:10.1016/j.freeradbiomed.2012.12.006.

[10] 張村雪, 朱渭兵, 李志西, 等. 紫甘薯醋及其不同發(fā)酵階段產(chǎn)物的抗氧化活性[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(11): 88-93.

[11] 孫瑩瑩, 劉建書, 李志西, 等. 葡萄醋抗氧化活性比較研究[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(5): 120-123.

[12] CHOU C H, LIU C W, YANG D J, et al. Amino acid, mineral, and polyphenolic profiles of black vinegar, and its lipid lowering and antioxidant effects in vivo[J]. Food Chemistry, 2015, 168: 63-69. DOI:10.1016/j.foodchem.2014.07.035.

[13] 宮鑫. 以秀麗隱桿線蟲RT130品系為模式生物的環(huán)境雌激素活體篩選方法的建立于應(yīng)用[D]. 青島: 中國海洋大學(xué), 2014: 20-21.

[14] SMITH J V, LUO Y. Elevation of oxidative free radicals in Alzheimer’s disease models can be attenuated by Ginkgo biloba extract EGb 761[J]. Journal of Alzheimer’s Disease, 2003, 5(4): 287-300.

[15] 唐曉明. 香豆素對秀麗隱桿線蟲抗氧化作用研究[D]. 長春: 長春理工大學(xué), 2012: 30.

[16] 馮菲. 湘西香醋抗氧化及美容功效研究[D]. 長沙: 中南林業(yè)科技大學(xué), 2010: 28-29.

[17] 馬錦錦, 王曉宇, 張娟, 等. 三種食醋中酚類物質(zhì)及抗氧化能力的比較研究[J]. 食品工業(yè)科技, 2014, 35(24): 128-131. DOI:10.13386/ j.issn1002-0306.2014.24.018.

[18] 李丹亞. 鎮(zhèn)江香醋生產(chǎn)過程中風(fēng)味物質(zhì)和功能因子的變化規(guī)律[D].無錫: 江南大學(xué), 2008: 32-33.

[19] SHI Y C, LIAO V H C, PAN T M. Monascin from red mold dioscorea as a novel antidiabetic and antioxidative stress agent in rats and Caenorhabditis elegans[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2012, 52(1): 109-117. DOI:10.1016/j.freeradbiomed.2011.09.034.

[20] 余佶, 黃黎慧, 黃群, 等. 湘西原香醋陳釀過程中主要成分變化動態(tài)[J]. 糧食科技與經(jīng)濟(jì), 2013, 38(4): 58-60. DOI:10.3969/ j.issn.1007-1458.2013.04.022.

[21] 劉東波, 李堅(jiān), 夏志蘭. 湘西原香醋抗氧化性研究[J]. 中國調(diào)味品, 2011, 36(2): 47-50. DOI:10.3969/j.issn.1000-9973.2011.02.013.

[22] 王揮, 馮菲, 李忠海, 等. 湘西香醋體內(nèi)抗氧化及其淡化黃褐斑作用的研究[J]. 中國食品學(xué)報, 2014, 14(3): 30-33.

[23] LANT B, DERRY W B. Analysis of apoptosis in Caenorhabditis elegans[J]. Cold Spring Harbor Protocols, 2014: 447-453. DOI:10.1101/pdb.top070458.

[24] PINAN-LUCARRE B, GABEL C V, REINA C P, et al. The core apoptotic executioner proteins CED-3 and CED-4 promote initiation of neuronal regeneration in Caenorhabditis elegans[J]. PLoS Biology, 2012, 10(5): e1001331. DOI:10.1371/journal.pbio.1001331.

[25] HUANG D C S, STRASSER A. BH3-only proteins: essential initiators of apoptotic cell death[J]. Cell, 2000, 103(6): 839-842. DOI:10.1016/ S0092-8674(00)00187-2.

In Vivo Antioxidant Activity of Xiangxi Vinegar： A Study in Caenorhabditis elegans

HUANG Runting， LI Zongjun*， TAN Ya， DU Sha， WU Shuo， WU Jing
(Hunan Province Key Laboratory of Food Science and Biotechnology, College of Food Science and Technology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China)

The antioxidant activity of Xiangxi vinegar was evaluated by determining the level of reactive oxygen species（ROS）， the activities of glutathione peroxidase （GSH-Px）， superoxide dismutase （SOD） and catalase （CAT）， and cell apoptosis in Caenorhabditis elegans. The results showed that Xiangxi vinegar had a remarkable antioxidant effect in C. elegans. Compared with the control group （M9 buffer）， the level of ROS in Caenorhabditis elegans treated with one-year fermented， one-year aged Xiangxi vinegar and one-year fermented Xiangxi vinegar decreased significantly （P ＜ 0.01） by 39.44% and 24.03%， respectively. The activities of GSH-Px， SOD and CAT in the first treatment group increased remarkably (P ＜ 0.01） compared with the control group， showing a 2-， 1.3- and 3-fold increase， respectively. The expression level of CED-3 in both Xiangxi vinegar treatment groups dropped significantly to 53.42% and 73.39% of the control group， respectively， whereas the expression level of CED-9 in the treatment groups increased significantly （P ＜ 0.01） 7 and 6 times， respectively. Therefore，Xiangxi vinegar has strong antioxidant activity in C. elegans.

vinegar； Caenorhabditis elegans； reactive oxygen species； antioxidant enzymes； apoptosis

10.7506/spkx1002-6630-201607038

TS264.2

A

1002-6630（2016）07-0208-05

黃潤庭， 李宗軍， 譚雅， 等. 湘西香醋對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)抗氧化作用［J］. 食品科學(xué)， 2016， 37（7）： 208-212. DOI：10.7506/ spkx1002-6630-201607038. http：//www.spkx.net.cn

HUANG Runting， LI Zongjun， TAN Ya， et al. In vivo antioxidant activity of Xiangxi vinegar： a study in Caenorhabditis elegans［J］. Food Science， 2016， 37（7）： 208-212. （in Chinese with English abstract） DOI：10.7506/spkx1002-6630-201607038. http：//www.spkx.net.cn

2015-06-25

黃潤庭（1990—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail：tammywong@yeah.net

*通信作者：李宗軍（1968—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称飞锛夹g(shù)。E-mail：hnlizongjun@163.com