靳三針療法干預(yù)對T2DM大鼠模型胰島素抵抗的影響

翁瑜君唐梁廣州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院511457廣州市豐澤東路105號何海明廣州市藥品檢驗(yàn)所510160

靳三針療法干預(yù)對T2DM大鼠模型胰島素抵抗的影響

翁瑜君唐梁廣州市第一人民醫(yī)院南沙醫(yī)院511457廣州市豐澤東路105號
何海明廣州市藥品檢驗(yàn)所510160

目的：通過觀察靳三針療法干預(yù)2型糖尿?。═2DM）大鼠模型，探討靳三針療法對T2DM大鼠IR的影響機(jī)制。方法：Wistar大鼠隨機(jī)分為靳三針療法組（A組）、模型對照組（B組）、健康對照組（C組）三組，觀察各組大鼠治療干預(yù)前后血FPG、2hPG、HbA1c、FINS、TNF-α、ADPN，HOMA-IR及HOMA-β等指標(biāo)變化。結(jié)果：A組的針灸干預(yù)對降低FPG、2hPG、HbA1c、TNF-α、HOMA-IR及改善FINS、ADPN、HOMA-β均有效（均P＜0.05）。干預(yù)前A組、B組與C組比較，血清FPG、2hPG、HbA1c、TNF-α、HOMA-IR水平較高，而ADPN、HOMA-β水平較低（均P＜0.05）。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)證明糖尿病模型組大鼠出現(xiàn)胰島素抵抗；細(xì)胞因子TNF-α、ADPN與T2DM大鼠的胰島素抵抗密切相關(guān)，胰島素抵抗程度與TNF-α水平呈正相關(guān)，與ADPN水平呈負(fù)相關(guān)；靳三針療法對改善T2DM大鼠模型IR具有較好的療效。

糖尿??；靳三針；胰島素抵抗；腫瘤壞死因子；脂聯(lián)素

2型糖尿病是一種常見的慢性代謝性疾病，致殘率及死亡率位居世界第三［1］。胰島素抵抗（IR）是2型糖尿病（T2DM）發(fā)病機(jī)制的主要環(huán)節(jié)之一，并貫穿于T2DM全過程。目前，強(qiáng)化生活方式干預(yù)對于預(yù)防和延緩T2DM進(jìn)展效果雖好，但在短期內(nèi)完全糾正生活習(xí)慣并且需要醫(yī)療保健專家長期指導(dǎo)使得大多數(shù)患者難以堅持；藥物治療的不足則表現(xiàn)在療效及副作用方面，所以尋求一種能夠針對T2DM病理機(jī)制、有效改善IR、保護(hù)胰島細(xì)胞且不增加低血糖風(fēng)險、簡便經(jīng)濟(jì)的治療方法是迫切需要解決的問題。本研究通過對T2DM大鼠模型的干預(yù)，觀察靳三針療法對改善T2DM大鼠IR的療效，進(jìn)一步探討T2DM大鼠IR的病理機(jī)制，現(xiàn)報道如下。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1動物雄性Wistar大鼠（南京君科生物工程有限公司，合格證號SCXK 2010007）60只，8周齡，體重150～210 g，在通風(fēng)、室溫20～22℃、相對濕度50%～60%的動物室內(nèi)喂養(yǎng)，光照每天12 h。清潔級飼養(yǎng)，自由攝水、攝食?；A(chǔ)飼料為普通飼料；高糖高脂肪飼料比例：豬油20%，蔗糖20%，蛋黃粉10%，膽酸鈉0.5%，普通飼料49.5%。

1.1.2試劑和儀器主要試劑：①鏈脲霉素（STZ）（上?？畦b生物科技有限公司），②血糖測定試紙（美國羅氏公司），③大鼠胰島素ELISA試劑盒（瑞典Mercodia公司），④大鼠TNF-αELISA試劑盒（日本IBL公司），⑤大鼠脂聯(lián)素ELISA試劑盒（上海常斤生物科技有限公司），⑥大鼠糖化血紅蛋白ELISA測定試劑盒（上海常斤生物科技有限公司）。主要儀器設(shè)備：①血糖試紙及快速血糖儀（美國雅培安妥超越型），②電子分析天平（上海卓精電子1204型），③全自動生化分析儀（奧林巴斯AU5811），④高速低溫離心機(jī)（德國哈默Z323K），⑤電子恒溫水浴鍋（力辰科技HH-2）。

1.2.實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1動物模型構(gòu)建及分組雄性Wistar大鼠60只按隨機(jī)數(shù)字表法分成3組：靳三針療法組（A組），模型對照組（B組），健康對照組（C組）。3組大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，A組、B組給予高糖高脂肪飼料喂養(yǎng)3周，第3周末禁食12 h后行鏈脲霉素（STZ）腹腔內(nèi)注射，將STZ溶解于PH4.5枸櫞酸緩沖液中，按20 mg/kg體重腹腔內(nèi)注射，1次/天，連續(xù)3天，繼續(xù)高糖高脂肪飼料喂養(yǎng)4周。行口服糖耐量試驗(yàn)（OGTT試驗(yàn)）：大鼠禁食12 h后，按2 g/kg的劑量給予50%葡萄糖溶液灌胃，采用血糖儀分別在0、30、60、90和120 min時采集鼠尾靜脈血進(jìn)行血糖測定，糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)參照日本大冢制藥株式會社德島研究所關(guān)于OLETF大鼠的實(shí)驗(yàn)研究［2］，OGTT測定0、30、60、90和120min的血糖，血糖峰值＞16.7 mmol/L，且120min血糖＞11.1mmol/L，診斷為糖尿病。健康對照組（C組）單純給予普通飼料喂養(yǎng)。造模和分組后，各組大鼠均在通風(fēng)、室溫20～22℃、相對濕度50%～60%的動物室內(nèi)喂養(yǎng)，光照每天12 h。各組大鼠自由攝食和飲水，給予普通飼料喂養(yǎng)。

1.2.2治療干預(yù)造模成功后，各組給予相應(yīng)的干預(yù)。A組：將T2DM大鼠捆綁于自制的固定器中，用0.25 mm×13mm毫針，取靳三針中脂三針穴組治療；足三里、三陰交捻轉(zhuǎn)補(bǔ)法，內(nèi)關(guān)捻轉(zhuǎn)瀉法。取穴方法參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［3］：足三里（后三里）：大鼠膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，在腓骨小頭下約5 mm處，左右各一穴直刺7mm；三陰交：大鼠后肢內(nèi)踝尖上直上10 mm，左右側(cè)各一穴，直刺4～5mm；內(nèi)關(guān)：前肢內(nèi)側(cè)，腕關(guān)節(jié)上3 mm，尺橈骨間，左右側(cè)各一穴，直刺1 mm。療程：1周內(nèi)連續(xù)治療5天，共治療4周。

B組及C組：用同樣方式每日將大鼠捆綁于自制的固定器中，捆綁時間同A組，以排除應(yīng)激因素引起的實(shí)驗(yàn)偏倚，其余不作處理。

1.2.3觀察指標(biāo)及檢測方法①檢測各組大鼠前后空腹血糖（FPG）、餐后2 h血糖（2hPG），血清空腹胰島素（FINS）、糖化血紅蛋白（HbA1c）、脂聯(lián)素（ADPN）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α），各組大鼠尾靜脈取血，采用血糖儀試紙法測定FPG及2hPG，另尾靜脈取血6 ml，注入非抗凝試管中，室溫靜置30min后，離心15 min（3 000轉(zhuǎn)/分），分離血清，取血清按酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測FINS、HbA1c、ADPN及TNF-α水平。②胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）及β細(xì)胞功能指數(shù)（HOMA-β）。HOMA，又稱HOMA穩(wěn)態(tài)模型，在1985年由英國牛津大學(xué)Turner的科研小組首先提出，目前已成為廣泛應(yīng)用于臨床的評價糖尿患者胰島素敏感性、胰島素抵抗水平與胰島β細(xì)胞功能的常用指標(biāo)。HOMA-IR=FPG（mmol/L）×FINS（m IU/L）/22.5（正常個體的HOMA-IR為1。隨著IR水平升高HOMA-IR將高于1）；HOMA-β= 20×FINS（m IU/L）/（FPG mmol/L-3.5）（正常個體的HOMA-β為100%，糖尿患者群中，胰島β細(xì)胞功能降低則其數(shù)值降低，功能增強(qiáng)則其數(shù)值升高）。

1.2.4統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，計數(shù)資料以百分比（%）表示，計量資料組內(nèi)比較采用配對設(shè)計資料的t檢驗(yàn)，組間比較采用Levene方差齊性檢驗(yàn)及Bonferroni方差分析。取P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1　三組干預(yù)前后各項觀察指標(biāo)比較（±s）

表1　三組干預(yù)前后各項觀察指標(biāo)比較（±s）

注：與同組治療前比較，①P＜0.05；與B組治療后比較，②P＜0.05；與C組治療前比較，③P＜0.05

觀察指標(biāo)A組（n=18）B組（n=16）C組（n=18）干預(yù)前干預(yù)后干預(yù)前干預(yù)后干預(yù)前干預(yù)后FPG（mmol/L）9.72±2.12③5.03±0.56①②11.01±2.70③10.17±2.29 5.20±0.70 4.96±0.16 2hPG（mmol/）L 16.07±2.62③6.87±0.61①②15.18±2.85③15.85±2.69 7.14±0.55 7.09±0.55 FINS（m IU/L）6.54±1.96③10.44±3.38①②6.94±2.30③7.68±1.97 10.65±2.39 9.21±2.81 HbA1c（%）10.89±2.80③4.94±0.93①②10.31±1.80③10.93±2.39 4.85±0.88 4.86±0.84 TNF-α（nmol/L）1.51±0.34③0.47±0.21①②1.44±0.29③1.46±0.38 0.54±0.20 0.49±0.18 ADPN（μg/m l）5.45±2.72③16.75±7.56①②4.97±2.53③6.11±3.05 16.97±8.48 15.96±8.05 HOMA-IR 2.83±1.09③2.35±0.84①②3.32±1.17③3.52±1.29 2.44±0.56 2.02±0.63 HOMA-β23.62±12.13③159.90±88.09①②22.31±17.42③25.60±10.73 159.43±95.57 126.40±67.56

2　結(jié)果

60只大鼠在造模及過程中共脫落8只，最終列入結(jié)果觀察的A組18只、B組16只、C組18只。三組干預(yù)前后各項觀察指標(biāo)比較見表1。

3　討論

胰島素抵抗是指胰島素作用的靶器官，主要指肝臟、肌肉、脂肪組織對胰島素生物學(xué)效應(yīng)的反應(yīng)性降低或喪失，胰島素維持正常血糖的能力下降，從而產(chǎn)生一系列病理和臨床表現(xiàn)。IR是T2DM的重要特征，被認(rèn)為是引發(fā)T2DM的始動因素，也是貫穿多種代謝異常和心血管疾病的主線［4］。而與IR密切相關(guān)的脂聯(lián)素是由分化成熟的脂肪細(xì)胞合成和分泌的一種內(nèi)源性生物活性多肽或蛋白質(zhì)，具有改善IR、抗炎、抗動脈粥樣硬化等作用，是預(yù)測IR綜合征發(fā)生、發(fā)展的重要生物學(xué)標(biāo)志物。近年來發(fā)現(xiàn)TNF-α在IR發(fā)生的病理機(jī)制中起非常重要的作用，并且與血漿胰島素水平、葡萄糖代謝及脂質(zhì)代謝密切相關(guān)［5］。

中醫(yī)認(rèn)為糖尿病屬于中醫(yī)學(xué)的“消渴病”范疇。病因包括稟賦虛弱、飲食失節(jié)、情志失調(diào)、勞欲過度及外感六淫；主要以陰虛為本、燥熱為標(biāo)為基本病機(jī)；痰濕、瘀血為病理產(chǎn)物。易京紅等［6］通過臨床觀察，認(rèn)為痰、濕、熱、瘀即是消渴病的重要原因，又是日后發(fā)展變化的病理基礎(chǔ)，可加重病情。臨床研究表明，T2DM合并IR患者發(fā)病時多見身體肥胖，多伴有高血壓、高血脂癥、高粘血癥，臨床表現(xiàn)為乏力、痰多、脘痞胸悶、口中粘膩、身體困重、舌苔厚膩等癥，其特點(diǎn)與中醫(yī)學(xué)的“脾虛痰濕證”相符。

長期以來，中醫(yī)陰陽平衡理論及辨證論治法在代謝性疾病治療中運(yùn)用有其獨(dú)到之處。而針灸作為中醫(yī)特色療法，以其簡便廉驗(yàn)的優(yōu)勢而得到認(rèn)可。靳三針是靳瑞教授經(jīng)過近20年臨床總結(jié)及科學(xué)研究創(chuàng)立的具有嶺南特色的針灸療法，其特色主要體現(xiàn)在“三穴為主，辨證配穴”的處方原則。根據(jù)實(shí)驗(yàn)大鼠模型的痰瘀阻遏型的辨證特點(diǎn)，以健脾化痰祛瘀為法，選取靳三針療法中脂三針穴組干預(yù)，其中內(nèi)關(guān)為手厥陰心包經(jīng)的絡(luò)穴，八脈交會穴之一，通于陰維脈，并與之合于心、胸、胃，有寬胸理氣和胃的作用，且心主血脈，有疏通經(jīng)脈、行氣活血之功；足三里為足陽明胃經(jīng)之下合穴，“合治內(nèi)腑”，足陽明胃經(jīng)為多氣多血之經(jīng)，善治氣血、血脈方面的疾病，又脾胃二經(jīng)相為表里，故足三里有和胃健脾、去濕化痰之效。二穴合用可達(dá)理氣活血、化痰除濕的作用。三陰交為足三陰經(jīng)之交會穴，三臟氣調(diào)，則氣機(jī)調(diào)達(dá)，津液運(yùn)化正常，血行通暢，痰瘀無以內(nèi)存。

本研究采用高糖高脂肪飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ腹腔注射的方法復(fù)制胰島素抵抗大鼠模型，結(jié)果顯示，該模型基本符合臨床特征，即高血糖、高胰島素血癥和糖耐量減低。本實(shí)驗(yàn)同時以穩(wěn)態(tài)模型（HOMA）公式計算胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）和β細(xì)胞功能指數(shù)評價胰島素抵抗的造模效果。結(jié)果表明，糖尿病模型大鼠出現(xiàn)胰島素抵抗；細(xì)胞因子TNF-α、ADPN與T2DM大鼠的胰島素抵抗密切相關(guān)。胰島素抵抗程度與TNF-α水平呈正相關(guān)，與ADPN水平呈負(fù)相關(guān)；靳三針療法對改善T2DM大鼠模型IR具有較好的療效。

［1］中華醫(yī)學(xué)會糖尿病學(xué)分會.糖尿病防治中的三級預(yù)防［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：6.

［2］Kawano K，Hirashima T，Mori S，et al. Spontaneous long-term hyperglycemic ratwith diabetic complications Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty（OLETF）strain［J］.Diabetes，1992（11）：1422-1428.

［3］李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)［M］.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007：1.

［4］Zimmet P，Alberti K G，Shaw J.Global and societal imp lications of the diabetes epidemic［J］.Nature，2001，6865（414）：782-787.

［5］劉洪鳳.黃芪多糖對2-DM大鼠胰島素抵抗的早期干預(yù)作用［D］.佳木斯：佳木斯大學(xué)，2007.

［6］易京紅，陳靜.糖尿病前期的干預(yù)［J］.中外醫(yī)療，2009，28（5）：153.

（2016-08-30收稿/編輯熊瑜）

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1003-0719（2016）05-0069-03