全自動(dòng)高通量與半自動(dòng)高通量檢測(cè)方法的對(duì)比

朱海燕 王國(guó)才 左 軍 宋紅寶 楊秀紅 丁 旭

（吉林大學(xué)第四醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林 長(zhǎng)春 130011）

全自動(dòng)高通量與半自動(dòng)高通量檢測(cè)方法的對(duì)比

朱海燕 王國(guó)才 左 軍 宋紅寶 楊秀紅 丁 旭

（吉林大學(xué)第四醫(yī)院檢驗(yàn)科，吉林 長(zhǎng)春 130011）

目的 研究以檢測(cè)抗雙鏈DNA抗體、抗髓過氧化物酶抗體（MPO）、抗蛋白酶3抗體（PR3）為例對(duì)比全自動(dòng)高通量和半自動(dòng)高通量檢測(cè)方法。方法 選取我院2014年1月至2015年12月確診為自身免疫病的患者85例，分別用全自動(dòng)和半自動(dòng)高通量Elisa方法對(duì)三種抗體進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)比兩種檢測(cè)方法的CV值差異。結(jié)果 全自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)各項(xiàng)ds-DNA、MPO、PR3的CV值分別為3.62%、5.52%、3.61%，均顯著小于半自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)的CV值（分別為7.11%、12.31%、7.98%）（P＜0.05），檢測(cè)符合率（96.64%）顯著大于半自動(dòng)高通量Elisa（87.52%）（P＜0.05）。結(jié)論 相對(duì)于半自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)ds-DNA、MPO、PR3，全自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)質(zhì)量更高、重復(fù)性更好、檢測(cè)準(zhǔn)確度和精確度更優(yōu)，更加利于系統(tǒng)化和標(biāo)準(zhǔn)化的建立。

全自動(dòng)高通量；半自動(dòng)高通量；抗雙鏈DNA抗體；抗髓過氧化物酶抗體；抗蛋白酶3抗體

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。Elisa是免疫學(xué)中的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)，目前已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、生物制藥和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)等多個(gè)領(lǐng)域［1］。在臨床上，可以應(yīng)用Elisa法對(duì)多種疾病的血清標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)。但是，由于不同Elisa檢測(cè)體系最終的檢測(cè)結(jié)果精確度、準(zhǔn)確度、重復(fù)性具有顯著的差異，所以有必要建立選擇一種高質(zhì)量、高精度以及重復(fù)性較高的Elisa檢測(cè)方法［2］。本文即研究以檢測(cè)抗雙鏈DNA抗體、抗髓過氧化物酶抗體（MPO）、抗蛋白酶3抗體（PR3）為例對(duì)比全自動(dòng)高通量和半自動(dòng)高通量檢測(cè)方法。

1　資料與方法

1.1一般資料：選取我院2014年1月至2015年12月確診為自身免疫病的患者85例，其中系統(tǒng)性紅斑狼瘡30例，自身免疫性肝炎33例，小血管炎22例，其中男63例，女22例，年齡13～80歲，所有診斷符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2儀器與試劑：全自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)儀器：品牌，美國(guó)Aushon Biosystems；型號(hào)，SearchLight技術(shù)平臺(tái)。半自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)儀器：品牌，瑞士TECAN；前處理系統(tǒng)，TECAN freedom EVO；酶標(biāo)儀，TECAN sunrise。所有檢測(cè)的ELisa試劑和手機(jī)盒均購(gòu)買于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：對(duì)本次所有需要進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析的數(shù)據(jù)均選用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPAA19.0進(jìn)行分析，組間差異性檢驗(yàn)通過卡方或者t檢驗(yàn)進(jìn)行，以P值作為差異與否的標(biāo)準(zhǔn)，其中當(dāng)P＜0.05時(shí)，認(rèn)為組間比較差異顯著具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，當(dāng)P＞0.05時(shí)認(rèn)為組間比較差異不顯著。

2　結(jié) 果

見表1。

表1　兩種高通量Elisa檢測(cè)方法對(duì)ds-DNA、MPO、PR3檢測(cè)符合率和CV值對(duì)比分析（%）

3　討 論

Elisa是目前實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最為廣泛的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，在臨床上也被廣泛的應(yīng)用于疾病血清學(xué)和體液標(biāo)志物的檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果的精確度、準(zhǔn)確度和檢測(cè)的質(zhì)量將直接影響臨床醫(yī)師對(duì)病患病情、預(yù)后的判斷。而Elisa檢測(cè)主要包括待檢樣品前處理、檢測(cè)試劑的準(zhǔn)備、加樣、實(shí)驗(yàn)條件溫育、封閉液封閉、試劑洗板、顯色劑顯色以及結(jié)果檢測(cè)，其中任何一步出現(xiàn)錯(cuò)誤或者操作不規(guī)范都會(huì)對(duì)Elisa實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)結(jié)果造成嚴(yán)重的影響。因此，對(duì)Elisa實(shí)驗(yàn)的各個(gè)步驟進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化系統(tǒng)化的建立十分重要［3-4］。但是，目前我國(guó)各級(jí)醫(yī)院Elisa檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的自動(dòng)化水平具有明顯的差異，這也造成目前我國(guó)醫(yī)院Elisa檢測(cè)各個(gè)步驟的標(biāo)準(zhǔn)化工作十分不完善。高通量檢測(cè)技術(shù)憑借高通量、自動(dòng)化、微量化、快速、靈敏、精確、無污染等特點(diǎn)近年來被應(yīng)用于免疫學(xué)、微生物學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)等學(xué)科。同時(shí)隨著我國(guó)醫(yī)學(xué)水平的發(fā)展和醫(yī)學(xué)發(fā)展的需要，流行病學(xué)的檢測(cè)、臨床檢測(cè)、檢驗(yàn)樣本的數(shù)量逐年增加，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度及精確度的要求也越來越高，迫切需要醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)高通量技術(shù)的應(yīng)用。

本文對(duì)比目前最為常見的全自動(dòng)化和半自動(dòng)化通量Elisa檢測(cè)方法對(duì)ds-DNA、MPO、PR3的檢測(cè)。研究發(fā)現(xiàn)，全自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)自身抗體血清標(biāo)志物ds-DNA、MPO、PR3的CV值分別為3.62、5.52、3.61%；而半自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)ds-DNA、MPO、PR3的CV值分別為7.11、12.31、7.98%。全自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)各項(xiàng)的CV值均顯著小于半自動(dòng)高通量Elisa（P＜0.05），檢測(cè)符合率（96.64%）顯著大于半自動(dòng)高通量Elisa（87.52%）（P＜0.05）。

分析其原因發(fā)現(xiàn)，半自動(dòng)高通量檢測(cè)方法需要人為對(duì)試劑準(zhǔn)備、洗滌液的配置、溫育條件的控制等各個(gè)進(jìn)行控制，人為可控因素較多，而全自動(dòng)高通量檢測(cè)具有完整的檢測(cè)系統(tǒng)，人為影響因素明顯少于半自動(dòng)［5］。綜上所述，相對(duì)于半自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)方法，全自動(dòng)高通量Elisa檢測(cè)質(zhì)量更高、重復(fù)性更好、檢測(cè)準(zhǔn)確度和精確度更優(yōu)，更容易實(shí)現(xiàn)不同實(shí)驗(yàn)室間檢驗(yàn)結(jié)果的一致性，其系統(tǒng)化和標(biāo)準(zhǔn)化的建立，將會(huì)促進(jìn)不同級(jí)醫(yī)療機(jī)構(gòu)間的結(jié)果互認(rèn)的實(shí)現(xiàn)，是全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)的重要組成部分。

［1］ 董海新，金呈強(qiáng)，余維星.ELISA實(shí)驗(yàn)影響因素的研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2015，12（4）:115-117.

［2］ 職通瑞，宋曉玲，張曉靜，等.多抗間接ELISA方法的建立及其在海洋細(xì)菌快速檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2015，36（2）:71-76.

［3］ 孫德軍，王同華，仲偉香，等.高通量ELISA法檢測(cè)多種傳染病的系統(tǒng)化標(biāo)準(zhǔn)化研究［J］.國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，5（21）:2978-2979.

［4］ 李忠，郭龍嬌，陸佳玲，等.兩種參數(shù)估計(jì)方法在ELISA檢測(cè)結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)化中的應(yīng)用［J］.熱帶醫(yī)學(xué)雜志，2014，14（10）:1279-1283.

［5］ 范雪嬌，沈菁，蔡鵬威，等.乙肝標(biāo)志物ELISA檢測(cè)不同方法的比較研究［J］.標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，23（1）:78-82.

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1671-8194（2016）25-0032-01