308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)輕度斑塊狀銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞因子的影響

陸家睛　易雪梅　于　寧　陳福娟　丁楊峰

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·論著·

308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)輕度斑塊狀銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞因子的影響

陸家睛易雪梅于寧陳福娟丁楊峰

目的：確定308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)輕度斑塊狀銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)的影響。方法：采用ELISA方法檢測(cè)308 nm準(zhǔn)分子激光治療前后60例輕度斑塊狀銀屑病患者及20名健康正常人血清中IL-17和IL-22的水平。結(jié)果：銀屑病患者308 nm準(zhǔn)分子激光治療前外周血IL-17和IL-22的表達(dá)水平為(98.14±27.83)ng/L和(73.17±20.53)ng/L，高于正常對(duì)照組的(44.25±12.64)ng/L和(19.56±6.61)ng/L，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；治療后銀屑病患者外周血IL-17和IL-22水平下降至(51.73±26.32)ng/L和(25.24±18.16)ng/L，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論：308 nm準(zhǔn)分子激光可調(diào)節(jié)外周血IL-17和IL-22的水平。

輕度斑塊狀銀屑??；308 nm準(zhǔn)分子激光；IL-17；IL-22

Th17細(xì)胞屬新型的CD4+T細(xì)胞亞群，分泌白細(xì)胞介素-17A(IL-17A)、IL-17F、IL-22等細(xì)胞因子[1]。目前認(rèn)為T(mén)細(xì)胞是308 nm準(zhǔn)分子激光作用的靶細(xì)胞，該激光通過(guò)抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生而發(fā)揮作用[2]。本研究通過(guò)檢測(cè)輕度斑塊狀銀屑病患者308 nm準(zhǔn)分子激光治療前后外周血IL-17、IL-22的表達(dá)水平，探討其與銀屑病發(fā)病及病情嚴(yán)重程度之間的關(guān)系，從而達(dá)到更有效地治療銀屑病的目的。

1　資料與方法

1.1病例資料本研究為開(kāi)放性研究，所選患者來(lái)自2013年1月至2015年1月我院皮膚內(nèi)科門(mén)診及病房患者，根據(jù)適應(yīng)證，確立入選標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)及剔除標(biāo)準(zhǔn)，篩選輕度斑塊狀銀屑病患者60例，年齡18～70歲，平均(47.30±16.32)歲，病程1個(gè)月至20年，平均(5.04±3.81)年；以PASI評(píng)分評(píng)價(jià)銀屑病嚴(yán)重程度，PASI評(píng)分1.23～7.69，60例患者平均(4.68±1.26)分。篩選正常健康志愿者20名作為對(duì)照組，年齡18～70歲，平均(47.15±14.70)歲。兩組在性別、年齡上差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。試驗(yàn)組與對(duì)照組均簽署知情同意書(shū)。

1.1.1入選標(biāo)準(zhǔn)a.臨床上符合銀屑病診斷標(biāo)準(zhǔn)，且皮損面積小于體表面積5%的斑塊狀銀屑病；b.年齡18～70歲，性別不限；c.無(wú)嚴(yán)重的心腦血管器質(zhì)性病變及肝、腎功能損害者；d.無(wú)免疫功能低下者；e.入選患者均未進(jìn)行系統(tǒng)用藥，僅局部外用我院自制制劑尿囊素維他乳膏，每日2次;f.已簽署知情同意書(shū)的患者。

1.1.2排除標(biāo)準(zhǔn)a.患者有光敏性皮膚病以及可能因光照射誘發(fā)或加重的疾病等;b.近1周有服用光敏性藥物;c.有惡性皮膚腫瘤史者;d.孕婦及哺乳期婦女;e.合并有精神、神經(jīng)疾病患者;f.有不宜入選的其他原因。

1.1.3剔除標(biāo)準(zhǔn) a.未按照治療方案治療者;b.入選后發(fā)現(xiàn)不符合入選標(biāo)準(zhǔn)或符合排除標(biāo)準(zhǔn);c.入組后無(wú)任何隨訪記錄者。

1.1.4評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)按照銀屑病治療指南中PASI評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分[3]。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1308 nm準(zhǔn)分子激光照射試驗(yàn)組給予308 nm準(zhǔn)分子激光局部照射2次/周，照射前測(cè)定MED，患者初始劑量為1倍的MED,每次劑量均在前次照射劑量的基礎(chǔ)上增加10%～25%，如果局部出現(xiàn)明顯紅斑，則減少前次照射劑量的10%；如出現(xiàn)痛性紅斑或水皰則停止照射1次或2次。一個(gè)療程為10次，如照射部位在10次以?xún)?nèi)痊愈則停止照射308 nm準(zhǔn)分子激光。

1.2.2觀察時(shí)間每周1次，隨訪5次。

1.2.3觀察內(nèi)容a.每周1次治療前研究者對(duì)患者癥狀進(jìn)行評(píng)分；b.每周1次治療前研究者對(duì)患者治療的靶部位拍照；c.并詢(xún)問(wèn)患者是否發(fā)生不良事件并進(jìn)行相關(guān)性分析；d.預(yù)約下次治療、隨訪時(shí)間。

1.2.4治療前后用ELISA法檢測(cè)試驗(yàn)組和對(duì)照組外周血IL-17、IL-22的表達(dá)水平采集輕度斑塊狀銀屑病患者和正常對(duì)照者靜脈血3 mL，靜置留取血清500 μL，1000 r/min離心15 min，吸取上層血清置于-20℃保存待檢。正常對(duì)照組查體時(shí)采血，處理方法同前。采用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清IL-17、IL-22的含量。操作步驟嚴(yán)格按照ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，用酶標(biāo)儀在450 nm處測(cè)A值，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品中含量。

2　結(jié)果

2.1.1外周血Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-22檢測(cè)結(jié)果比較(表1)輕度斑塊狀銀屑病患者308 nm準(zhǔn)分子激光治療前外周血IL-17和IL-22的表達(dá)水平分別為(98.14±27.83)%和(73.17±20.53)%，均顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；輕度斑塊狀銀屑病患者308 nm準(zhǔn)分子激光治療后外周血IL-17和IL-22的表達(dá)水平分別為(51.73±26.32)%和(25.24±18.16)%，均顯著低于治療前患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；輕度斑塊狀銀屑病患者308 nm準(zhǔn)分子激光治療后外周血IL-17和IL-22的表達(dá)水平分別為(51.73±26.32)%和(25.24±18.16)%，正常對(duì)照組外周血IL-17和IL-22的表達(dá)水平分別為(44.25±12.64)%和(19.56±6.61)%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.1.2Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-22與PASI評(píng)分的相關(guān)性分析本研究中所選輕度斑塊狀銀屑病患者308 nm準(zhǔn)分子激光治療前PASI評(píng)分1.23～7.69，60例患者平均為(4.68±1.26)分；治療后PASI評(píng)分0.96～5.48分，平均為(3.22±0.78)分。輕度斑塊狀銀屑病患者PASI評(píng)分與Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-22的表達(dá)水平呈正相關(guān)(r值分別為0.613，0.547，P<0.01)。

表1　試驗(yàn)組治療前后與正常對(duì)照組IL-17、IL-22表達(dá)水平的比較

注：t值為對(duì)照組與試驗(yàn)組(治療前)比較，t1值為試驗(yàn)組(治療前)與試驗(yàn)組(治療后)比較，均P<0.01；t2值為對(duì)照組與試驗(yàn)組(治療后)比較，均P>0.05

3　討論

IL-17是Th17最主要的效應(yīng)因子，IL-17因能直接參與銀屑病的致病而成為研究熱點(diǎn)[4]。IL-22屬于IL-10細(xì)胞因子家族，主要由激活的Th1細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞以及最近發(fā)現(xiàn)的Th17細(xì)胞產(chǎn)生，通過(guò)結(jié)合上皮細(xì)胞表達(dá)的IL-22受體，激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄因子3(STAT3)途徑，誘導(dǎo)上皮細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子發(fā)揮作用[5]。IL-23誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化增殖,分化成熟的Th17細(xì)胞可以分泌IL-17、IL-22等多種細(xì)胞因子,Th17類(lèi)細(xì)胞因子在銀屑病的發(fā)病中起到重要作用[6]。

Coimbra等[7]用ELISA 方法檢測(cè)尋常型銀屑病患者外周血中IL-22、IL-17、IL-23等的表達(dá)水平，與正常對(duì)照組相比均明顯升高。NB-UVB按療程治療，外周血中IL-23 的表達(dá)水平在治療3周后首先下降，外周血中IL-22 和IL-17 的表達(dá)水平在治療6周后明顯下降，認(rèn)為是由于IL-23水平的明顯下降，隨之Th17相關(guān)細(xì)胞因子IL-17和IL-22的表達(dá)水平均下降，該結(jié)果證實(shí)IL-23、Th17軸可能在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中有重要作用，故銀屑病是以IL-23/Th17/IL-17免疫應(yīng)答通路為主介導(dǎo)的免疫異常性疾病[8]。

本實(shí)驗(yàn)中涉及的308 nm準(zhǔn)分子激光在1997年首次用于銀屑病的治療，已有研究顯示，與傳統(tǒng)UVB相比較，308 nm準(zhǔn)分子激光能更有效地治療斑塊狀銀屑病[9]。目前認(rèn)為T(mén)細(xì)胞是308 nm準(zhǔn)分子激光作用的靶細(xì)胞，通過(guò)抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生而發(fā)揮作用[10]。 本研究結(jié)果顯示308 nm準(zhǔn)分子激光治療前輕度斑塊狀銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-22的表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組，說(shuō)明兩者在銀屑病的發(fā)生發(fā)展中至關(guān)重要，并且目前兩者的共同表達(dá)被認(rèn)為是自身攻擊性T細(xì)胞和促炎癥T細(xì)胞的標(biāo)志[11]。308 nm準(zhǔn)分子激光治療后輕度斑塊狀銀屑病外周血Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-22的表達(dá)水平顯著低于治療前，說(shuō)明308 nm準(zhǔn)分子激光在治療皮損的同時(shí)，可適當(dāng)調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞下游細(xì)胞因子的表達(dá)水平，而IL-17和IL-22水平下降有助于角質(zhì)形成細(xì)胞正常分化[8]，從而對(duì)病情恢復(fù)起到一定作用。而輕度斑塊狀銀屑病患者308 nm準(zhǔn)分子激光治療后外周血Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子與正常對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明通過(guò)308 nm準(zhǔn)分子激光對(duì)皮損處的治療，在一定程度上能充分調(diào)動(dòng)抑制免疫反應(yīng)的功能，使病情逐步趨于正常。且60例患者均按療程經(jīng)過(guò)308 nm準(zhǔn)分子激光照射10次，42例患者原皮損處顏色明顯轉(zhuǎn)暗，厚斑塊明顯變薄，基本無(wú)脫屑，PASI評(píng)分較前明顯下降；另18例患者的皮損達(dá)到基本治愈；治療期間受試患者均未出現(xiàn)皮膚瘙癢、痛性紅斑或水皰等副反應(yīng)。同時(shí)經(jīng)分析IL-17、IL-22與PASI評(píng)分呈正相關(guān)，說(shuō)明IL-17、IL-22與銀屑病的病情輕重程度密切相關(guān)。

綜上所述，Th17細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子IL-17、IL-22與銀屑病致病密切相關(guān)，308 nm準(zhǔn)分子激光治療可適當(dāng)調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞下游細(xì)胞因子IL-17、IL-22的表達(dá)水平，從而對(duì)銀屑病的病情恢復(fù)起到一定作用。

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(收稿：2015-10-19修回：2015-12-24)

Effects of 308 nm excimer laser on the Th17 cytokines in the patients with mild plaque psoriasis

LUJiajing,YIXuemei,YUNing,CHENFujuan,DINGYangfeng.

ShanghaiSkinDiseasesHospital,Shanghai200443,China

Correspondingauthor：DINGYangfeng,E-mail：mmmm_111111@126.com

Objective: To determine the effects of 308 nm excimer laser on the levels of Th17 cytokines in the patients with mild plaque psoriasis. Methods: The levels of IL-17 and IL-22 in 60 patients with mild plaque psoriasis and 20 healthy controls were detected by ELISA. Results: The levels of IL-17and IL-22 in patients before treatment were (98.14±27.83) ng/L and (73.17±20.53) ng/L and those in controls were (44.25±12.64) ng/L and (19.56±6.61) ng/L, with significant differences (P<0.01). The levels of IL-17and IL-22 in the patients after treatment decreased to (51.73±26.32) ng/L and (25.24±18.16) ng/L. The differences in the levels of IL-17 and IL-22before and after the treatment were significant (P<0.01). Conclusion: 308 nm excimer laser can regulate the levels of Th17 cytokines in the patients with mild plaque psoriasis.

mild plaque psoriasis; 308 nm excimer laser; IL-17; IL-22

上海市皮膚病醫(yī)院，上海,200443

丁楊峰，E-mail：mmmm_111111@126.com