不同貯藏時間及溫度對豬尿中鹽酸克倫特羅快速檢測的影響研究

伍曉紅，饒輝，謝永忠，吳志勇，聶婉，陳秋玲，王琤*

（1.江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西南昌330013；2.江西省畜牧技術(shù)推廣站，江西南昌330077）

不同貯藏時間及溫度對豬尿中鹽酸克倫特羅快速檢測的影響研究

伍曉紅1，饒輝2，謝永忠2，吳志勇2，聶婉1，陳秋玲1，王琤1*

（1.江西科技師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西南昌330013；2.江西省畜牧技術(shù)推廣站，江西南昌330077）

為研究不同貯藏時間及溫度對豬尿中鹽酸克倫特羅快速檢測的影響，向陰性豬尿中添加鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品，配制成5、50、500 μg/kg三個不同濃度后，分別在常溫（室溫）、冷藏（4℃）、冷凍（-20℃）條件下貯藏，于1、4、7、18、21、28 d用酶聯(lián)免疫吸附法和膠體金免疫層析法進行快速檢測。結(jié)果表明，所有的豬尿樣本都呈陽性，且可檢測到起始濃度為5 μg/kg的樣本隨時間延長檢測值降低，同時冷凍的保存效果最好。

鹽酸克倫特羅；豬尿；貯藏條件

鹽酸克倫特羅（CL）又稱鹽酸雙氯醇胺、克喘素，俗稱瘦肉精，能顯著提高豬的胴體瘦肉率和生長速度，但人食用含CL的豬肉制品會出現(xiàn)心悸、四肢震顫、面癱、抽搐等中毒癥狀（朱童心和黃曼曼，2013）。當(dāng)前監(jiān)管部門對CL進行快速檢測多采用酶聯(lián)免疫法（ELISA）和膠體金免疫層析法（GICA）（申慧敏等，2014）。雖然目前關(guān)于CL的檢測方法的相關(guān)研究有較多報道，但不同貯藏時間和溫度對豬尿中CL的快速檢測的影響卻鮮有報道。因此，本實驗擬研究貯藏時間和溫度對豬尿中CL快速檢測的影響，以期為監(jiān)測部門對豬尿樣品檢測前的保存提供理論參考。

1　材料與方法

1.1試劑和儀器鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品、ELISA試劑盒、克倫特羅快速檢測卡、全自動酶標(biāo)儀、移液槍。

1.2樣品的制備和檢測將收集到的陰性豬尿原液分別向其中添加鹽酸克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)品，配制成5、50、500 μg/kg三個不同濃度的樣品，每個濃度設(shè)3個重復(fù)，分別于常溫（室溫）保存、低溫冷藏（4℃）、低溫冷凍（-20℃）。在貯藏1、4、7、18、21、28 d時將每個樣本各取出一部分使之恢復(fù)常溫，進行膠體金免疫法（GICA）檢測，并依照農(nóng)業(yè)部頒布《豬尿液中鹽酸克倫特羅檢測方法-酶聯(lián)免疫吸附測定法》（農(nóng)牧發(fā)［2001］38號）進行ELISA法檢測，記錄檢測結(jié)果。

2　結(jié)果和分析

2.1陽性尿樣ELISA法檢測結(jié)果28 d內(nèi)，在對常溫、冷藏、冷凍三種保存條件下的樣本進行測定時，發(fā)現(xiàn)起始濃度為50 μg/kg和500 μg/kg的樣本吸光度值都超出試劑盒的檢測線性范圍。而對起始濃度為5 μg/kg的樣本數(shù)據(jù)進行分析時，可發(fā)現(xiàn)CL在常溫、冷藏、冷凍三種條件下保存均出現(xiàn)不同程度的降解。隨著貯藏時間的推進，起始濃度為5 μg/kg的樣本檢出值呈下降趨勢，且三種保存方式比較，冷凍環(huán)境下保存CL的降解速度最慢（圖1）。

圖1　起始濃度為5 μg/kg的樣本在不同貯藏時間及溫度下檢測值變化曲線

2.2陽性尿樣克倫特羅快速檢測卡檢測結(jié)果在使用膠體金試紙條對上述豬尿進行檢測時，不同貯藏時間及保存溫度條件下的三個平行樣本組均出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，未出現(xiàn)無效結(jié)果。

3　討論

本實驗通過ELISA和GICA兩種方法對不同貯藏時間和溫度下不同濃度的鹽酸克倫特羅進行檢測，兩種檢測方法的結(jié)果基本吻合。起始濃度為5 μg/kg樣本的ELISA法檢測結(jié)果表明，CL保存時間和條件的不同，降解情況也有差異。賴衛(wèi)華等（2009）用ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)，豬尿中萊克多巴胺（RAC）在一定貯藏時間內(nèi)置于常溫、冷藏和冷凍條件下均會出現(xiàn)不同程度的降解，其中冷藏條件下降解率最低，同時進行的GC-MS法定量檢測，得到了相同的試驗結(jié)果。可見，對于測定豬尿中CL時，貯藏時間和方式對于檢測值有一定的影響。

ELISA法和GICA法只能對豬尿樣本進行快速篩查，而不能進行最終的確證，同時ELISA法和GICA法分別存在線性范圍限制和無法確定待測物濃度的缺點（翟福麗等，2011）。因此在進行檢測時，仍需要采取其他的檢測方法對樣品進行確證，以佐證ELISA法和GICA法檢測結(jié)果的可靠性。

4　小結(jié)

本實驗結(jié)果表明，為保證豬尿中鹽酸克倫特羅檢測的準(zhǔn)確性，收集豬尿樣本后應(yīng)盡快轉(zhuǎn)移至冷凍環(huán)境中貯藏并完成初篩，并對發(fā)現(xiàn)的陽性樣品進行確證檢測。鑒于豬尿中的成分與鹽酸克倫特羅之間的相互影響尚未明確，導(dǎo)致鹽酸克倫特羅降解的因素仍需進一步研究。

［1］賴衛(wèi)華，張國華，徐國茂.不同貯藏時間及溫度下萊克多巴胺濃度變化的研究［J］.食品與機械，2009，6：99～101.

［2］申慧敏，杜鵑，賈秀珍.動物性食品中β-受體激動劑類殘留檢查方法研究進展［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2014，35（10）：80～81.

［3］翟福麗，賴克強，張衍亮，等.動物性食品β-興奮劑殘留概述［J］.食品科學(xué)，2011，32（5）：351～356.

［4］朱童心，黃曼曼.鹽酸克倫特羅的檢測方法研究進展［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（25）：10341～10342+10345.

This experiment was conducted to study the effect of different storage time and temperature on the rapid detection of clenbuterol hydrochloride in pig urine.Negative swine urine samples were spiked with clenbuterol to three different concentration（5 μg/kg，50 μg/kg and 500 μg/kg）and immediately stored at normal atmospheric temperature（room temperature），cold storage（4℃），refrigerated storage（-20℃）.Clenbuterol hydrochloride was rapid detectied by using enzyme linked immunosorbent adsorption method and colloidal gold immune chromatography on days 1，4，7，18，21 and 28 d. The results showed that all pig urine samples were positive，but the concentration of sample with initial concentration of 5 μg/kg extended values over time was reduced with time extension，the frozen preservation effect was best.

clenbuterol hydrochloride；swine urine；preservation conditions

S816.17

A

1004-3314（2016）13-0033-02

10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20161308

江西科技師范大學(xué)第九屆本科生創(chuàng)業(yè)、科研基金項目（20150901008）；2015江西省農(nóng)牧漁業(yè)科研項目