海水氨氮國標法測定注意事項及改進

王秀芹　王娟娟　王德興　王寶峰　張素青　繳建華

摘 要：氨氮作為營養(yǎng)鹽普遍存在于海水中，它是環(huán)境檢測的重要指標之一。由于檢測環(huán)境中氨的含量較高，對檢測有很大影響，故將檢測過程注意事項的方方面面做一概括并做進一步改進，以使檢測工作順利開展。

關鍵詞：海水氨氮；測定；注意事項；改進

近年來隨著工業(yè)經(jīng)濟的發(fā)展，海洋環(huán)境日益惡化，海水水質不斷下降。天津渤海灣內分布有水產(chǎn)養(yǎng)殖區(qū)、增殖放流區(qū)、產(chǎn)卵區(qū)、海洋保護區(qū)等，是天津市主要海洋經(jīng)濟魚類生產(chǎn)區(qū)域。由于天津渤海灣是市內14條河道的入海終點，每天都有一定量的生活污水、工業(yè)污水排入，對海水水質造成一定污染，其中海水氨氮就是一項重要的檢測指標。農業(yè)部漁業(yè)環(huán)境及水產(chǎn)品質量監(jiān)督檢驗測試中心（天津）作為農業(yè)部最早一批成立的檢測機構一直承擔著渤海灣產(chǎn)卵場的監(jiān)測工作，每年的5月、8月都定期對其水域進行監(jiān)測。

由于海水中氨氮檢測受環(huán)境等各方面因素影響較大，致使海水氨氮的檢測有很大的難度。比如標準曲線線性達不到標準要求，質控不合格等。另外，內陸?zhàn)B殖水域如天津靜海區(qū)養(yǎng)殖水域，由于是鹽堿地，養(yǎng)殖用水的鹽度一般都在6‰以上，高的鹽度達到13‰左右。若選用淡水國標方法HJ 535-2009測定氨氮，由于氯離子濃度較高有很大的干擾，導致加入鈉氏試劑后水樣渾濁測定的結果嚴重偏高。對于鹽度在3‰以上的養(yǎng)殖用水選用海水方法檢測結果更準確，所以海水氨氮檢測的準確性顯得尤為重要，其對鹽堿地池塘養(yǎng)殖監(jiān)測同樣具有重要意義，在進行監(jiān)測時應選用高濃度標線測定?，F(xiàn)將氨氮測定過程中的注意事項加以概括總結。

1 標準方法選用

現(xiàn)行方法有3個，連續(xù)流動分析儀法即HY/T 147.1-2013是近兩年出的新方法，由于此方法儀器昂貴，不普遍使用；GB 17378.4-2007中有兩個方法，一個是靛酚藍分光度法，一個是次溴酸鹽氧化法，前者由于所用試劑苯酚污染較重，次氯酸鈉溶液不穩(wěn)定，此方法不常選用，后者是質檢機構常選用的方法，這里就針對次溴酸鹽氧化法進行分析總結。

2 標準溶液

2.1 來源

選購的是國家海洋局第二海洋研究所氨氮標準系列點，最大濃度為0.084 mg/L，這套標準是針對測定低濃度海水的，較高濃度海水的測定后面要通過改進的標線進行，高濃度的標線的配制標液是用的國家標物中心的氨氮標準溶液。

2.2 貯藏

由于氨氮屬于營養(yǎng)鹽，易被細菌吸收利用，造成濃度下降。建議購買后放冰箱冷藏保存，盡量縮短儲存時間，盡快使用。

2.3 配制高標準溶液

做高濃度標線時，可以自己配制標液。將硫酸銨[（NH4）2SO4]置于稱量皿在干燥箱110 ℃烘干1 h，放于干燥器中備用。也可直接使用國家標物中心的氨氮標準溶液。

3 檢測

3.1 樣品制備

水樣經(jīng)0.45 μm醋酸纖維濾膜過濾，貯于聚乙烯瓶中。若樣品采集后不能立即分析，則應快速冷凍至-20 ℃保存，7 d內必須測定。樣品溶化后回溫至10 ℃以上后測定，否則氧化還原不完全，測定結果偏小。

3.2 檢測環(huán)境

檢測地點最好與其他檢測項目分開，避免硝酸、氨水等試劑對氨氮的影響。另外，檢測時盡量減少檢測人數(shù)，避免檢測人員呼吸帶來的干擾。

3.3 試劑

3.3.1 存放 所用試劑最好單獨存放，避免其它試劑對其造成影響，最終使空白值偏高導致檢測結果不準確。

3.3.2 選購 現(xiàn)在市場上所售化學試劑魚目混珠，經(jīng)常出現(xiàn)不合格產(chǎn)品，導致實驗失敗，既浪費財力又浪費精力，選擇合格供應商尤為重要。為少走彎路，盡量購買國藥集團化學試劑有限公司的產(chǎn)品，經(jīng)驗證質量是可信賴的。

3.4 容器清洗

所用比色管、容量瓶都要先洗凈再用1+3硫酸溶液浸泡24 h后清洗干凈備用。移液管用鉻酸洗液浸泡沖洗干凈備用。容器清洗不凈會直接導致空白值過高，標準曲線的線性出不來，平行樣品偏差過大。

3.5 實驗用水

milli-Q制備儀質檢機構一般都具備，其制備用水可直接使用。

3.6 試劑配制

因空氣中就有一定的氮含量，將試劑放入燒杯，貼杯壁加milli-Q水，用超聲波溶解效果較好，盡量減少攪拌次數(shù)，溶解后轉入容量瓶定容。需注意加milli-Q水時貼壁與不貼壁以及溶解攪拌次數(shù)的多少對空白吸光度影響較大。

氫氧化鈉配制（400 g/L）：氫氧化鈉溶液一定煮后配制。稱取200 g氫氧化鈉溶于1 000 mL水中，加熱蒸發(fā)至大約500 mL，經(jīng)初步冷卻轉入500 mL聚乙烯瓶中冷卻至室溫，然后用milli-Q水定至500 mL刻線待用。

次溴酸鹽要現(xiàn)用現(xiàn)配，配制用量可按樣品多少將不同溶液按比例配制，這里鹽酸用優(yōu)級純較好。

磺胺和鹽酸萘乙二胺溶液一定貯于棕色試劑瓶中，冰箱保存，必須嚴格按有效期使用?；前泛望}酸萘乙二胺溶液有效期分別為2個月和1個月。

3.7 試劑篩選

3.7.1 空白測定 做空白試驗可以篩選試劑的好壞，節(jié)省試驗時間。這里用倒空白也可叫做樣品空白來做，正空白與倒空白樣吸光度（以空氣做參比）測定值相差較大，正空白值比倒空白值大（一般倒空白值0.050左右，正空白值0110左右，倒空白值與買的標準系列點值相當）。倒空白操作具體為：樣品加入次溴酸鹽氧化還原反應30 min時，在100 mL空白比色管中直接加入5 mL次溴酸鹽試劑，立即加入5 mL磺胺試劑，放置5 min向空白比色管中加入 50 mL milli-Q水，再加入1 mL鹽酸萘乙二胺試劑，混勻，放置15 min即可。在空白加磺胺試劑時與樣品同步進行。

在標準曲線及質控都符合標準要求的情況下，做空白質量控制圖，這里做20 d倒空白更能有效控制質量。見圖1。

20 d空白吸光度A平均值為0.059，標準方差S為0.010，上警戒線A+2S為0.079，下警戒線A-2S為0.039。當?shù)箍瞻孜舛戎翟?.039～0.079之間時，說明試劑是合格的。

3.7.2 試劑篩選 這些年試劑篩選投入很大精力，主要是氫氧化鈉對檢測起關鍵性作用，經(jīng)常買不到合格產(chǎn)品。若氫氧化鈉不合格，標線系列點反應后顏色一般都很深，眼睛辨別不出梯度顏色。下面提供多次篩選試驗中的一次，對不同廠家氫氧化鈉做的空白（倒空白）試驗比較（見表1）。

通過與空白質量控制圖比較，上面的試劑除進口氫氧化鈉外均是合格的。國藥三種規(guī)格的氫氧化鈉都是合格的?，F(xiàn)天津試劑三廠已經(jīng)不存在了。

3.8 標線及樣品測定

購買的標液系列點和配制的系列點空白與其它系列點一樣測定，即按正空白做。但樣品空白測定與正空白不同，實際為倒空白。樣品測定與標線步驟相同，倒空白測定與其稍有不同，在空白測定時已詳述。必須注意試劑篩選時測空白吸光度是以空氣做對照，具體做樣品和標線時一定要用實際空白做對照，這樣測定的結果就是扣掉空白后的測定結果。

當水溫高于10 ℃時，氧化時間30 min，若低于10 ℃時，氧化時間應適當延長。若有水浴鍋，標線與樣品放于20～25 ℃水中氧化還原30 min，效果更佳。

4 高濃度標準曲線

4.1 氨標準貯備溶液（100 mg/L-N）

稱取烘干備好的硫酸銨[（NH4）2SO4]0.235 8 g定容至500 mL容量瓶，貯于500 mL棕色試劑瓶，加1 mL三氯甲烷搖勻，冰箱內保存，有效期半年。也可用國家標物中心的氨氮標準溶液直接配制。

4.2 氨標準使用溶液（10 mg/L-N）

移取10 mL氨標準貯備溶液定容于100 mL容量瓶，混勻。臨用前現(xiàn)配。

4.3 繪制標準曲線

取事先洗凈的成套的100 mL比色管，依次加入10 mg/L-N使用液0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.6 mL、3.2 mL，加新制milli-Q水至50 mL刻線混勻，測定按方法進行。線性相關系數(shù)達兩個9以上為合格?？梢杂铆h(huán)境的氨氮質控樣來進行質量控制。

總之，若將上述注意事項一一做到，不僅標線相關系數(shù)達到兩個9以上，質控測定肯定也在規(guī)定范圍內，檢測工作會順利進行。

（收稿日期：2016-03-22；修回日期：2016-08-24）