飼料中n—3長鏈多不飽和脂肪酸水平對花鱸幼魚血清生化指標(biāo)的影響

徐瀚林

摘 要：為研究飼料中n-3 長鏈多不飽和脂肪酸（n-3 LC-PUFA）水平對花鱸幼魚血清生化指標(biāo)的影響，以初始體重（29.2±1.34）g的花鱸幼魚為研究對象，分別投喂n-3 LC-PUFA含量分別為0.13、0.30、056、1.03、1.45、2.41（%飼料干物質(zhì)）的飼料，實(shí)驗(yàn)周期63 d。結(jié)果表明，飼料中n-3 LC-PUFA水平對花鱸幼魚血清堿性磷酸酶（ALP）、乳酸脫氫酶（LDH）活性、總甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）含量無顯著性影響（P>0.05），而血清中肌酐（CREA）水平在飼料中n-3含量為1.45%時(shí)顯著高于其余各組（P<0.05）。結(jié)果表明，以血清CREA含量為標(biāo)準(zhǔn)，花鱸幼魚飼料中n-3 LC-PUFA含量應(yīng)低于1.45%。

關(guān)鍵詞：花鱸；n-3長鏈多不飽和脂肪酸；血清生化指標(biāo)

魚油是海水魚類飼料中非常重要的組成部分，其主要功能之一就是為魚類提供生長所需的n-3 長鏈多不飽和脂肪酸（n-3 LC-PUFA）。對大多數(shù)海水魚類而言，n-3 LC-PUFA是其必需脂肪酸。其對魚類的作用包括：（1）促進(jìn)魚類組織細(xì)胞正常發(fā)育，維持其正常生理機(jī)能[1-2]；（2）促進(jìn)魚類神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育[3]；（3）促進(jìn)魚類繁育[4]；（4）提高免疫力[5]。但大多數(shù)海水魚類缺乏由亞油酸和亞麻酸合成LC-PUFA的能力[6]。在自然環(huán)境中，海水魚類從藻類或是食物鏈中等級較低的生物中攝入n-3 LC-PUFA。而對于養(yǎng)殖的海水經(jīng)濟(jì)魚類而言，飼料是其最主要的營養(yǎng)來源，因此，在飼料中必須添加適量n-3 LC-PUFA以滿足海水魚類正常生理需要。當(dāng)前，魚油是海水養(yǎng)殖魚類飼料中n-3 LC-PUFA的主要提供者。但隨著近年來水產(chǎn)飼料工業(yè)的不斷發(fā)展，魚油需求量逐年增加，而近年來捕撈業(yè)衰退、海洋資源嚴(yán)重匱乏導(dǎo)致魚粉和魚油產(chǎn)量逐年下降，難以滿足市場需求，魚油資源不足是導(dǎo)致養(yǎng)殖成本升高的一個(gè)重要因素。同時(shí)，為發(fā)展低魚油低魚粉含量的環(huán)境友好水產(chǎn)飼料，貫徹水產(chǎn)行業(yè)可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略，必須提高飼料中魚油的利用率。因此，科研人員已經(jīng)從各個(gè)方面研究飼料中n-3 LC-PUFA水平對養(yǎng)殖魚類影響，以期提高魚類對于n-3 LC-PUFA的利用率，以達(dá)到降低飼料中魚油水平的目的。

花鱸（Lateolabrax japonicus）是我國重要的海水養(yǎng)殖品種，在我國南北方均有養(yǎng)殖，肉食性，性格兇猛，具有養(yǎng)殖周期短，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高等優(yōu)勢。根據(jù)中國漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒（2015），2014年我國花鱸產(chǎn)量為113 803 t，位居海水養(yǎng)殖魚類前列?；|的一個(gè)非常重要的特點(diǎn)是其飼料普及率較高。研究n-3 飼料中LC-PUFA水平對花鱸幼魚血清生化指標(biāo)的影響能夠一定程度上為設(shè)計(jì)營養(yǎng)合理，高效健康的花鱸幼魚飼料提供參考。

1 材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料

實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)飼料以脫脂魚粉和豆粕為主要蛋白源，粗蛋白含量約為46%，粗脂肪含量約為12%，通過向基礎(chǔ)飼料中添加不同量的DHA富含油（DHA含量：總脂肪酸的37.65%；形式：DHA-甘油三酯；江蘇天凱生物科技有限公司）以及EPA富含油（EPA含量：總脂肪酸的52%；形式：EPA-甘油三酯；河北海源健康生物科技有限公司），用軟脂酸甘油酯調(diào)平，保持DHA/EPA為205左右，制作含有不同濃度（0.10%、0.25%、0.60%、1.00%、1.50%、2.50%干物質(zhì)）n-3 LC-PUFA的6種等氮等能的飼料，同時(shí)在飼料中添加2%ARA富含油以滿足花鱸幼魚生長的需求。飼料中n-3 LC-PUFA含量通過高效氣相色譜（GS， HP6890， USA）測定，分別占干物質(zhì)含量的0.13%、0.30%、0.56%、1.03%、1.45%、2.41%。

飼料原料磨碎后過320 μm篩，按比例由少到多混勻后，加入不同比例的n-3 LC-PUFA富含油，充分混合后加水制粒（FII型雙螺桿擠條機(jī)，華南理工大學(xué)，廣州）。顆粒大小約為2.5 mm× 5.0 mm，制好的飼料顆粒45 ℃烘干12 h，存放于-20 ℃待用。

1.2 養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)用魚由寧波市象山縣外高泥村象山港灣育苗場購得，為當(dāng)年同批孵化所得苗種。正式養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，先將實(shí)驗(yàn)所用到的花鱸幼魚暫養(yǎng)，養(yǎng)殖環(huán)境為海水浮式網(wǎng)箱（3.0 m× 3.0 m× 3.0 m），同時(shí)投喂商業(yè)飼料2周，以促使實(shí)驗(yàn)魚轉(zhuǎn)餌，以適應(yīng)實(shí)驗(yàn)用顆粒飼料以及所處養(yǎng)殖水環(huán)境。

實(shí)驗(yàn)開始前24 h，停止商業(yè)飼料的投喂，使實(shí)驗(yàn)魚處于饑餓狀態(tài)，用丁香酚（1：10 000）麻醉后對實(shí)驗(yàn)魚體重進(jìn)行稱量。選取規(guī)格相近的實(shí)驗(yàn)魚（29.2±1.34）g，將其隨機(jī)分配到18個(gè)海水浮式網(wǎng)箱中（1.5 m×1.5 m×2.0 m），每個(gè)網(wǎng)箱放入30尾。每組飼料設(shè)三個(gè)重復(fù)網(wǎng)箱。每日早晚（早晨5：00及下午5：00）各飽食投喂一次。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)共持續(xù)9周，期間水溫為22.5 ℃到29.5 ℃，鹽度為28‰ 到33‰，海水溶氧約為6 mg/L。

1.3 血清生化指標(biāo)的測定

待養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束，將實(shí)驗(yàn)魚饑餓24 h，準(zhǔn)備進(jìn)行取樣。取樣前用丁香酚對實(shí)驗(yàn)魚進(jìn)行麻醉，用酒精擦拭魚體，用27號針和1 mL注射器通過抽取尾靜脈血的方式由花鱸尾部取血，將取出的血液放入無菌的新1.5 mL離心管中，室溫靜置2 h，然后放入4 ℃冰箱靜置4 h。將分層后的全血在4 ℃下500 g離心10 min，吸取上層血清入新無菌的1.5 mL離心管中，-20 ℃保存待用。將每個(gè)網(wǎng)箱獲得的血清混合。血清堿性磷酸酶（ALP）活性、肌酐（CREA）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）及乳酸脫氫酶（LDH）含量根據(jù)相應(yīng)試劑盒說明書使用邁瑞B(yǎng)S-100自動(dòng)生化分析儀（邁瑞，中國）進(jìn)行測定。

1.4 計(jì)算與數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)使用SPSS 20.0，首先進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），當(dāng)數(shù)據(jù)達(dá)到顯著水平后（P<0.05），采用Turkey方差齊性分析，數(shù)據(jù)表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”。

2 結(jié)果

在本實(shí)驗(yàn)研究水平內(nèi)，飼料中n-3 LC-PUFA含量未對花鱸幼魚血清ALP、TG、TC及LDH造成顯著性影響（P>0.05）（圖1）。而血清中肌酐水平在n-3含量為1.45%時(shí)顯著高于其余各組（P<0.05）。

3 討論

血液是動(dòng)物十分重要的組織，其生理生化指標(biāo)能夠很好地反映機(jī)體狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，隨著飼料中n-3 LC-PUFA水平上升，花鱸血清中ALP含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，但這種趨勢并不顯著。ALP在調(diào)控水產(chǎn)動(dòng)物代謝中起到十分重要的作用，在體內(nèi)能夠直接調(diào)控磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移與代謝[7]，除此之外，研究表明ALP在魚類體內(nèi)還參與了對免疫反應(yīng)的調(diào)控[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，飼料中n-3 LC-PUFA能夠在一定程度上增強(qiáng)魚體健康水平，但這種作用效果并不明顯。

而在飼料中n-3 LC-PUFA水平為145%（干物質(zhì)）組，實(shí)驗(yàn)魚血清CREA的含量顯著高于其它各組。CREA是肌酸和磷酸肌酸的代謝最終產(chǎn)物，主要通過腎小球進(jìn)行代謝。臨床上，血清CREA常用于反映腎臟受損情況。而在魚類的研究中，其與肌肉活動(dòng)量相關(guān)[9]。本實(shí)驗(yàn)在海水浮式網(wǎng)箱中進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分組，因此實(shí)驗(yàn)魚可認(rèn)為有較相似的活動(dòng)量。因此，1.45% n-3 LC-PUFA組肌酐的顯著性升高可能與實(shí)驗(yàn)魚腎臟受損有關(guān)。

血清TC和TG含量是衡量魚體脂肪沉積與否的重要因素。本實(shí)驗(yàn)中，血清TC和TG含量并未顯著受到飼料中n-3 LC-PUFA水平的影響，這與在Wistar大鼠中的研究結(jié)果類似：在飼料中添加n-3 LC-PUFA后，其血清TG與TC含量與對照組無顯著性差異。同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)中，血清TC含量呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢，但趨勢并不顯著，這可能是由于當(dāng)飼料中的n-3 LC-PUFA處在合適水平時(shí)，魚體健康水平上升，TC含量恢復(fù)正常所致。

LDH存在于機(jī)體各組織器官中，參與機(jī)體糖酵解過程。臨床上，乳酸脫氫酶也用于反映組織細(xì)胞受損程度的指標(biāo)。在本實(shí)驗(yàn)中LDH的水平并未隨著n-3 LC-PUFA水平的變化發(fā)生顯著變化。這從一定程度上說明，本研究所涉及的n-3 LC-PUFA水平并不會(huì)對花鱸幼魚組織如心臟、肝臟等造成顯著性傷害。

綜上所述，飼料中適宜n-3 LC-PUFA水平（約1.03%干物質(zhì)）能夠一定程度提高花鱸幼魚魚體健康水平，而從血清CREA的角度表明，花鱸幼魚飼料中n-3 LC-PUFA含量應(yīng)低于1.45%。

參考文獻(xiàn)：

[1]Rsj C， Berg T， Manum K， et al. Effects of temperature and dietary n-3 and n-6 fatty acids on endocytic processes in isolated rainbow trout （Oncorhynchus mykiss， Walbaum） hepatocytes[J]. Fish physiology and biochemistry， 1994， 13（2）： 119-132

[2] Tocher D R， Bell J G， Dick J R， et al. Fatty acyl desaturation in isolated hepatocytes from Atlantic salmon （Salmo salar）： Stimulation by dietary borage oil containing γ-linolenic acid[J]. Lipids， 1997， 32（12）： 1237-1247

[3] Estévez A， Kanazawa A. Fatty Acid Composition of Neural Tissues of Normally Pigmented and Unpigmented Juveniles of Japanese Flounder Using Rotifer and Artemia Enriched in n-3 HUFA[J]. Fisheries science， 1996， 62（1）： 88-93

[4] Jaya-Ram A， Kuah M K， Lim P S， et al. Influence of dietary HUFA levels on reproductive performance， tissue fatty acid profile and desaturase and elongase mRNAs expression in female zebrafish Danio rerio[J]. Aquaculture， 2008， 277（3）： 275-281

[5] Zuo R， Ai Q， Mai K， et al. Effects of dietary n-3 highly unsaturated fatty acids on growth， nonspecific immunity， expression of some immune related genes and disease resistance of large yellow croaker （Larmichthys crocea） following natural infestation of parasites （Cryptocaryon irritans）[J]. Fish & shellfish immunology， 2012， 32（2）： 249-258

[6] Ghioni C， Tocher D R， Bell M V， et al. Low C 18 to C 20 fatty acid elongase activity and limited conversion of stearidonic acid， 18： 4 （n–3）， to eicosapentaenoic acid， 20： 5 （n–3）， in a cell line from the turbot， Scophthalmus maximus[J]. Biochimica et Biophysica Acta （BBA）-Molecular and Cell Biology of Lipids， 1999， 1437（2）： 170-181

[7] 張繼平， 林建成， 謝進(jìn)金， 等. 草魚堿性磷酸酶的分離純化與部分性質(zhì)研究[J]. 廈門大學(xué)學(xué)報(bào)： 自然科學(xué)版， 2005， 44（5）： 684-687

[8] Meyran J C， Graf F. Ultrahistochemical localization of Na+ K+ ATPase， Ca2+-ATPase and alkaline phosphatase activity in a calcium-transporting epithelium of a crustacean during moulting[J]. Histochemistry and cell biology， 1986， 85（4）： 313-320

[9] 溫安祥， 周定剛. 幾種不同食性魚類部分血液生化指標(biāo)的比較研究[J]. 四川動(dòng)物， 2005， 24（4）： 518-522

[10] 柳紅芳， 陸菊明， 母義明， 等. n-3 多不飽和脂肪酸對高脂誘導(dǎo)胰島素抵抗大鼠肝臟和骨骼肌胰島素受體及葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 4 的作用[J]. 中華糖尿病雜志 （1006-6187）， 2005， 13（3）： 192-195

Abstract：The study was conducted to evaluate the effect of dietary n-3 LC-PUFA content on serum biochemical indexes of juvenile Japanese seabass （Lateolabrax japonicus）. Triplicate groups of 30 Japanese seabass were fed with six diets with grade levels of n-3 LC-PUFA （0.13%， 0.30%， 0.56%， 1.03%， 1.45% and 2.41% of dry weight） to apparent satiation twice daily for 9 weeks. According to the results， the activity of serum alkaline phosphatase （ALP） and lactate dehydrogenase （LDH） and the content of serum total cholesterol （TC） and triglyceride were not significantly affected by the dietary n-3 LC-PUFA level （P<0.05）. In the 1.45% n-3 LC-PUFA group， the creatinine （CREA） content was significantly higher than other groups. Based on the index of CREA， the optimum dietary n-3 LC-PUFA level may not be higher than 1.45%.

Key words：Japanese seabass； n-3 LC-PUFA； serum biochemical indexes

（收稿日期：2016-05-31）