肝素結(jié)合樣表皮生長因子和C-erbB-2檢測對于卵巢良惡性腫瘤鑒別診斷及程度的臨床意義

楊天平

(江蘇省張家港市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科　215600)

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·論著·

肝素結(jié)合樣表皮生長因子和C-erbB-2檢測對于卵巢良惡性腫瘤鑒別診斷及程度的臨床意義

楊天平

(江蘇省張家港市中醫(yī)醫(yī)院檢驗科215600)

目的探討肝素結(jié)合樣表皮生長因子(HB-EGF)和 C-erbB-2檢測在卵巢良惡性腫瘤鑒別診斷及判斷病情程度的臨床價值。方法收集該院2014年8月至2015年7月因卵巢腫瘤行手術(shù)治療的患者80例，其中良性卵巢瘤各20例，上皮性卵巢癌40例，Ⅰ期13例，Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期13例。另選取30例志愿者的正常子宮內(nèi)膜卵巢組織。采用流式細(xì)胞術(shù)檢測HB-EGF、C-erbB-2的表達(dá)情況；使用免疫組織化學(xué)法檢測子宮內(nèi)膜癌和正常子宮內(nèi)膜的C-erbB-2表達(dá)。結(jié)果HB-EGF和C-erbB-2在卵巢癌組織中陽性細(xì)胞率顯著高于良性卵巢瘤，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；C-erbB-2在正常子宮內(nèi)膜低表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌的含量比正常子宮表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；子宮內(nèi)膜癌的病理分期不同，C-erbB-2表達(dá)也不同，Ⅰ、Ⅱ期明顯低于Ⅲ、Ⅳ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論C-erbB-2蛋白高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，檢測C-erbB-2有助于臨床評估子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)行為和預(yù)后。

肝素結(jié)合樣表皮生長因子；C-erbB-2；卵巢癌；腫瘤

卵巢癌病死率較高，居女性生殖器3大惡性腫瘤之首位，其中85%～90%的卵巢癌為上皮來源[1]。早期卵巢癌，即Ⅰ～Ⅱ期手術(shù)聯(lián)合化療等綜合治療效果較為滿意，其5年生存率較高，可高達(dá)90%左右[2]。卵巢位于盆腔深部，大多數(shù)患者由于未及時就診而至晚期[3]。現(xiàn)探討肝素結(jié)合樣表皮生長因子(HB-EGF)和C-erbB-2檢測對卵巢良惡性腫瘤鑒別診斷及判斷病情程度的臨床意義，報道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇該院2014年8月至2015年7月因卵巢腫瘤行手術(shù)治療的患者80例(觀察組)，年齡32～60歲，平均年齡(42.1±3.1)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)早期可無癥狀：婦科檢查時偶然發(fā)現(xiàn)。(2)下腹不適感：最早為下腹或盆腔下墜感。(3)腹部腫物：當(dāng)囊腫長大呈球形，腹部可捫及腫物。(4)壓迫癥狀：腫瘤巨大時可出現(xiàn)壓迫癥狀，出現(xiàn)尿頻或尿潴留，大便不暢，壓迫橫膈引起呼吸困難、心慌；影響下肢靜脈血流，引起腹壁及兩下肢浮腫。(5)疼痛：腫瘤出現(xiàn)蒂扭轉(zhuǎn)時可致腹部劇烈疼痛。(6)婦科檢查：多為子宮1側(cè)、呈囊性、表面光滑、可活動、與子宮不粘連，蒂長時可捫及。陰道后穹窿常有脹滿感，有時可觸及腫瘤下界。(7)超聲波檢查：顯示卵巢腫瘤內(nèi)有液性回聲[4]。良性卵巢瘤、交界性卵巢瘤各20例；上皮性卵巢癌40例，Ⅰ期10例，Ⅱ期11例，Ⅲ～Ⅳ期9例。另選取30例正常子宮內(nèi)膜卵巢組織的志愿者作為對照組，年齡33～59歲，平均年齡(41.8±4.3)歲。2組研究對象的年齡、體質(zhì)量等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法檢測HB-EGF和C-erbB-2在卵巢組織中的表達(dá)：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測卵巢腫瘤組織中HB-EGF與C-erbB-2的平均熒光強(qiáng)度與陽性細(xì)胞率。鼠抗人C-erbB-2單克隆抗體(美國BD公司生產(chǎn))；鼠抗人HB-EGF單克隆抗體(美國Santa Cruz公司生產(chǎn))；FACScan流式細(xì)胞測試儀(美國BD公司生產(chǎn))。PBS溶液中剪碎、研磨、過濾，在術(shù)中取卵巢腫瘤組織，1 500 r/min，5 min，棄上清液，將PBS溶液調(diào)整為單細(xì)胞懸液，其中細(xì)胞數(shù)為5×105mL，再取100 mL鼠抗人HB-EGF-抗1 μL懸液，水浴加熱，震蕩，37 ℃，50 min；通過PBS漂洗、離心，棄上清液，再加入FITC標(biāo)記羊抗鼠2抗1 μL，避光反應(yīng)30 min，再經(jīng)PBS漂洗、離心，棄上清液，進(jìn)行抗原表達(dá)測定時檢測10 000個腫瘤細(xì)胞。C-erbB-2抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)與免疫組織化學(xué)SP試劑盒，具體操作步驟按試劑盒說明書。陽性對照：已知陽性乳腺導(dǎo)管浸潤癌切片，陰性對照：PBS緩沖液。

1.3觀察指標(biāo)HB-EGF和C-erbB-2在良性卵巢瘤、交界性卵巢瘤、上皮性卵巢癌中的陽性細(xì)胞率及平均熒光強(qiáng)度比較；C-erbB-2蛋白在正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)情況比較；C-erbB-2表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期的關(guān)系。

2　結(jié)　　果

2.13組研究對象HB-EGF和C-erbB-2檢測陽性細(xì)胞率結(jié)果比較HB-EGF和C-erbB-2在卵巢癌組織中陽性細(xì)胞率顯著高于良性卵巢瘤，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　　3組研究對象HB-EGF和C-erbB-2檢測陽性細(xì)胞率結(jié)果比較

2.2C-erbB-2蛋白在正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)結(jié)果比較C-erbB-2在正常子宮內(nèi)膜低表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌的含量比正常子宮表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=24.75，P<0.05)。見表2。

表2　　C-erbB-2蛋白在正常子宮內(nèi)膜與子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)結(jié)果比較[n(%)]

2.3C-erbB-2表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期的關(guān)系子宮內(nèi)膜癌的病理分期不同，C-erbB-2表達(dá)也不同，Ⅰ、Ⅱ期明顯低于Ⅲ、Ⅳ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=8.34，χ2=5.09，P<0.05)。見表3。

表3　　C-erbB-2表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌病理分期的關(guān)系[n(%)]

3　討　　論

近年來子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病率不斷增加，其發(fā)病率占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%，是婦科常見的惡性腫瘤，且發(fā)病年齡呈現(xiàn)低齡化的趨勢，嚴(yán)重威脅女性健康[4-5]。然而子宮內(nèi)膜癌的確切發(fā)生原因與機(jī)制尚不清楚，目前認(rèn)為其發(fā)生與雌激素長期刺激并缺乏孕激素拮抗有關(guān)。

本研究結(jié)果表明，HB-EGF和C-erbB-2在卵巢癌組織中陽性細(xì)胞率顯著高于良性卵巢瘤，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；C-erbB-2在正常子宮內(nèi)膜低表達(dá)，在子宮內(nèi)膜癌的含量比正常子宮表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；子宮內(nèi)膜癌的病理分期不同，C-erbB-2表達(dá)也不同，Ⅰ、Ⅱ期明顯低于Ⅲ、Ⅳ期，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。HB-EGF是由巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞等分泌產(chǎn)生，分布在人類和動物的多種組織中，如皮膚、骨骼、肌、肺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等，且具有廣泛的生物學(xué)作用[6-7]。HB-EGF生物活性與EGF類似，促細(xì)胞分裂較強(qiáng)，高于EGF[8]?？缒さ鞍追肿?proHB-EGF)是HB-EGF的前體，通過一系列的生物化學(xué)反應(yīng)降解后產(chǎn)生游離HB-EGF(sHB-EGF)[9]。鄰近細(xì)胞的增殖及抑制鄰近細(xì)胞的凋亡可通過proHB-EGF促進(jìn)。有研究表明HB-EGF與生殖內(nèi)分泌有極其密切的關(guān)系[10]。通常表達(dá)在子宮內(nèi)膜、早孕絨毛及蛻膜等組織中，對子宮內(nèi)膜生長與分化均具有促進(jìn)作用，因此在維持胎盤功能與介導(dǎo)胚泡黏附與著床方面起著非常重要的作用。C-erbB-2癌基因又稱HER-2/neu基因，是一種促癌基因，其編碼有跨膜受體糖蛋白(P185)，分別由185個氨基酸殘基組成，且具有表皮生長因子受體和受體氨基酸激酶的活性和功能[11]。在正常情況下，C-erbB-2基因參與細(xì)胞生長與分化的調(diào)節(jié)，處于非激活狀態(tài)，當(dāng)受到某些致癌因素的作用后,其激活形式主要以基因擴(kuò)增方式進(jìn)行。有研究表明,C-erbB-2基因擴(kuò)增與蛋白表達(dá)之間具有很強(qiáng)的相關(guān)性,因此如果想反映基因擴(kuò)增情況，可通過檢測C-erbB-2的表達(dá)產(chǎn)物P185[12]。在人類正常上皮組織中C-erbB-2有少量表達(dá)，其表達(dá)能力與這些組織的再生修復(fù)有關(guān)，導(dǎo)致癌基因激活的原因為C-erbB-2癌基因過表達(dá)和擴(kuò)增，并參與細(xì)胞的生長調(diào)控，因此癌細(xì)胞的生長增殖和細(xì)胞癌變受到促進(jìn)。本研究結(jié)果顯示，C-erbB-2在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與發(fā)展可能由于細(xì)胞凋亡，是由C-erbB-2分子內(nèi)區(qū)的C末端介導(dǎo)，通過抑制凋亡、促進(jìn)細(xì)胞C-erbB-2在激活后而存活，進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤形成。

綜上所述，HB-EGF和C-erbB-2檢測可作為卵巢良惡性腫瘤鑒別診斷的輔助指標(biāo)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生與C-erbB-2蛋白的高表達(dá)密切相關(guān)，臨床可通過檢測C-erbB-2評估子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)行為和預(yù)后，推薦HER-2/neu蛋白作為臨床共價疫苗投入臨床研究。

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Study of HB EGF,C-erbB-2 test in differential diagnosis of ovarian benign and malignant tumor and determine the meaning of a complex condition

YANGTianping

(DepartmentofLaboratory,ZhangjiagangHospitalofTraditionalChineseMedicine,Zhangjiagang,JiangSu215600,China)

ObjectiveTo study HB-EGF,C-erbB-2 test in differential diagnosis of ovarian benign and malignant tumor and determine the meaning of a complex condition.MethodsTotally 80 cases of patients with ovarian tumors were collected from August 2014 to July 2015,including 20 cases benign ovarian tumor,and 40 cases epithelial ovarian cancer,13 cases of Ⅰ period,Ⅱ period in 14 cases,Ⅲ～Ⅳ period 13 cases.At the same time,normal endometrium ovarian tissue from 30 cases volunteers were collected.HB EGF,C-erbB-2 expression in ovarian tissue were detected by using flow cytometry.The immune histochemical method was used to detect C-erbB-2 expression from 40 examples carcinoma,30 cases of normal endometrium intrauterine membrane.ResultsThe rate of positive cells of HB-EGF,C-erbB-2 was significantly higher than that of benign ovarian tumor(P<0.05);C-erbB-2 for lower expression in normal endometrium,endometrial carcinoma in content was higher than the normal uterus express,the difference was statistically significant(P<0.05);Endometrial cancer of different pathological staging,C-erbB-2 expression was different also,including C-erbB-2 expression in endometrial carcinoma of stage Ⅰ,Ⅱ significantly below Ⅲ,Ⅳ period,the difference was statistically significant(P<0.05).ConclusionThe high expression of C-erbB-2 protein is associated with the occurrence and development of endometrial carcinoma,C-erbB-2 testing could help to clinically evaluate the biological behavior and prognosis of endometrial carcinoma.

HB-EGF；C-erbB-2;ovarian cancer;tumor

楊天平，女，副主任技師，主要從事臨床微生物及免疫學(xué)研究。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.19.021

A

1673-4130(2016)19-2713-03

2016-03-21

2016-05-16)