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    細胞周期同步化知識概述

    2016-11-02 10:15高彤解凱彬
    中學生物學 2016年7期
    關鍵詞:交界處秋水仙素運轉

    高彤 解凱彬

    1 細胞周期同步化的含義

    在一般培養(yǎng)條件下,群體中的細胞處于不同的細胞周期時相之中。為了研究某一時相細胞的代謝、增殖、基因表達或凋亡,借助某種實驗手段(自然的或經(jīng)人為的),使細胞群體中處于細胞周期不同時相的細胞停留在同一時相,這就是細胞同步化技術。如:選用DNA合成抑制劑可逆地抑制S期細胞DNA合成而不影響其他細胞周期運轉,最終可將細胞群體阻斷在G1/S期交界處;一些抑制微管聚合的藥物,因抑制有絲分裂裝置的形成和功能行使,可將細胞阻斷在有絲分裂中期,即使細胞同步于M期。使細胞大量的處于同一細胞時期,可獲得某一時期大量的物質,如細胞中期時的染色體等。

    2 細胞周期同步化的分類

    2.1 自然同步化

    自然存在的、不受人為條件干擾的是自然同步化,在動、植物細胞都有發(fā)現(xiàn)。如粘菌、瘧原蟲等因只進行核分裂,不發(fā)生胞質分裂,從而形成多核體。數(shù)量眾多的核處于同一細胞質中,進行同步化分裂。再如大量海膽卵同時授精,最初的3次細胞分裂是同步的;大量海參卵受精后,前9次細胞分裂也是同步化進行的。還有真菌的休眠孢子移入適宜環(huán)境后,增殖抑制解除,它們一起發(fā)芽,同步分裂。

    2.2 人工同步化

    在培養(yǎng)過程中用各種理化因素處理細胞而獲得的同步化生長是人工同步化。

    3 細胞周期同步化的人工方法

    細胞周期人工同步化的常用方法主要有選擇同步化、誘導同步化或兩者的結合。

    3.1 選擇同步化

    (1) 有絲分裂選擇法:使單層培養(yǎng)的細胞處于對數(shù)增殖期,此時分裂活躍,分裂指數(shù)高。有絲分裂細胞變圓隆起,與培養(yǎng)皿的附著性低,此時輕輕振蕩,M期細胞脫離器壁,懸浮于培養(yǎng)液中,收集培養(yǎng)液,再加入新鮮培養(yǎng)液,依此繼續(xù)收集,這樣每隔一定時間搖一次并收獲一次冷藏保存,即可獲得一定數(shù)量的中期細胞。其優(yōu)點是操作簡單,同步化程度高,細胞不受藥物傷害,缺點是獲得的細胞數(shù)量較少,約僅占1%~2%。

    (2) 細胞沉降分離法:不同時期的細胞體積不同,而細胞在給定離心場中沉降的速度與其半徑的平方成正比,因此可用此方法分離,其缺點是同步化程度較低。

    3.2 誘導同步化

    (1) DNA合成阻斷法:選用5-氟脫氧尿嘧啶、羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度TdR等相應的抑制劑,可逆地抑制DNA合成,而不影響其他時期細胞的運轉,最終將細胞群阻斷在S期或G/S交界處,以達到細胞同步于S期的目的。其中高濃度TdR對S期細胞的毒性較小,因此常用TdR雙阻斷法誘導細胞同步化(圖1):以海倫細胞為例(海倫細胞周期時間為21 h,其中G1期為10 h,S期為7 h,G2期為3 h,M期為1 h):在細胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)基中加入過量TdR,S期細胞被抑制,其它時期細胞繼續(xù)運轉,最后停在G1/S交界處。然后移去TdR,洗滌細胞并加入新鮮培養(yǎng)液、細胞又開始分裂。當釋放時間大于7 h時,所有細胞均脫離S期,再次加入過量TdR,細胞繼續(xù)運轉至G1/S交界處,被過量TdR抑制而停止。優(yōu)點是同步化程度高,可將幾乎所有的細胞同步化。

    (2) 中期阻斷法:利用破壞微管的藥物將細胞阻斷在中期,常用的藥物有秋水仙素和秋水仙酰胺,但由于秋水仙素或秋水仙胺對細胞有一定毒性,用量較小或作用時間較短細胞活性尚可恢復,而用量過大或時間過長則細胞不能存活,因此使用時應嚴格控制其劑量和作用時間。

    另外,將與細胞周期調控有關的條件依賴性突變株轉移到限定條件下培養(yǎng),也可將細胞同步化在細胞周期中某一特定時期。

    4 細胞周期同步化的檢測

    對各個時期的同步化細胞主要可通過流式細胞術來鑒定其細胞周期,通過比較各時相細胞的百分比,看是否達到預期的目的。如圖2所示,DNA含量為2C的細胞占相當大的百分比,結合圖3就可以分析出細胞周期同步化處理后大多數(shù)細胞處于G1期。

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