VEGF-C、VEGFR-3在NSCLC中的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移

丁旭青　韓玉培　楊鯤鵬

1) 河南南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院胸外科　南陽(yáng)　473012　2) 鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院胸外科　鄭州　450014

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·論著·

VEGF-C、VEGFR-3在NSCLC中的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移

丁旭青1)2)韓玉培1)楊鯤鵬2)

1) 河南南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院胸外科南陽(yáng)4730122) 鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院胸外科鄭州450014

目的探討VEGF-C及VEGFR-3與NSCLC淋巴轉(zhuǎn)移間的關(guān)系，為了解患者預(yù)后提供依據(jù)。方法采用免疫組化法檢測(cè)65例NSCLC中VEGF-C及VEGFR-3的表達(dá)，結(jié)合臨床病理特征進(jìn)行分析。結(jié)果NSCLC中VEGF-C和VEGFR-3的陽(yáng)性率明顯高于正常肺組織(P<0.05)。二者在Ⅲ期NSCLC中的表達(dá)率明顯高于Ⅰ、Ⅱ期，且隨病理分級(jí)的增高而顯著增加(P<0.05)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。結(jié)論VEGF-C及VEGFR-3在NSCLC中高表達(dá)，與其臨床分期、病理分級(jí)、病理類型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)。

VEGF-C；VEGFR-3；NSCLC；免疫組化；淋巴轉(zhuǎn)移

淋巴轉(zhuǎn)移是多種人體惡性腫瘤的重要預(yù)后因素，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)家族及其受體是淋巴轉(zhuǎn)移的重要調(diào)節(jié)通路之一。VEGF-C可通過自分泌途徑激活其受體VEGFR-3，誘導(dǎo)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞擴(kuò)增而形成新生淋巴管，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移[1]。本研究旨在探討VEGF-C及其受體VEGFR-3在非小細(xì)胞肺癌組織(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表達(dá)和淋巴轉(zhuǎn)移間的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院胸外科2010-06—2015-12間收治的NSCLC患者，隨機(jī)抽取術(shù)后病理組織標(biāo)本65例作為實(shí)驗(yàn)組，取腫瘤周圍正常肺組織(顯微鏡下證實(shí))16例為對(duì)照組。所有病例術(shù)前均未做任何治療。實(shí)驗(yàn)組中男48例，女17例；鱗癌40例，腺癌25例。高分化8例，中分化23例，低分化28例，未分化6例。TNMⅠ期10例、Ⅱ期21例、III期34例(Ⅰ/Ⅱ期為臨床早期組，III期為臨床晚期組)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組41例，無轉(zhuǎn)移組24例。中心型37例，周圍型28例。所有病例均經(jīng)過HE染色，光鏡下由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生進(jìn)行病理確診，并選擇腫瘤細(xì)胞壞死少及炎癥反應(yīng)輕的部位進(jìn)行免疫組化染色分析。患者均知情同意，并獲得南陽(yáng)市第二人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的同意。

1.2方法采用免疫組化S-P法，以 PBS代替一抗作陰性對(duì)照，所用兔抗人VEGF-C多克隆抗體、兔抗人VEGFR-3多克隆抗體、即用型SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3結(jié)果判斷VEGF-C及VEGFR-3染色結(jié)果判定：VEGF-C定位于癌細(xì)胞胞漿，VEGFR-3定位于癌細(xì)胞胞漿及癌巢周圍間質(zhì)內(nèi)皮細(xì)胞，均呈棕黃或棕褐色顆粒狀。取染色均勻區(qū)域400倍視野下，以著色細(xì)胞占視野細(xì)胞總數(shù)的多少分級(jí)。0級(jí)：0。1級(jí)：<25%。2級(jí)：26%～50%。3級(jí)：> 50%。0級(jí)為陰性，1級(jí)以上為陽(yáng)性[2]。微淋巴管密度(Microlymphatic vessel density，LVD)測(cè)定：在低倍鏡下尋找VEGFR-3陽(yáng)性脈管密集區(qū)，百倍視野下計(jì)數(shù)10個(gè)熱區(qū)中VEGFR-3陽(yáng)性脈管數(shù)，取均值為其LVD。腫瘤區(qū)內(nèi)單個(gè)或成叢的內(nèi)皮細(xì)胞，不管成堆與否均視為脈管計(jì)數(shù)，凡伴有肌層的脈管不予計(jì)數(shù)[3]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理全部數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS14.0版軟件包，根據(jù)數(shù)據(jù)類型分別進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，α=0.05。

2　結(jié)果

2.1VEGF-C的表達(dá)及其與NSCLC臨床病理特征的關(guān)系棕黃色VEGF-C陽(yáng)性顆粒均勻分布于癌細(xì)胞胞漿內(nèi)(圖-1)。65例NSCLC組織VEGF-C陽(yáng)性率為72.3% (47/65)，明顯高于對(duì)照組12.5%(2/16)，2組差異顯著 (P<0.05)。結(jié)合臨床病理特征分析發(fā)現(xiàn)：VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)率臨床早期組為54.84%，顯著低于臨床晚期組的84.24%。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為87.7%，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的45.83%，(P<0.05)。而VEGF-C表達(dá)與患者性別、年齡、臨床類型、病理類型和分化程度之間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

圖-1　VEGF-C陽(yáng)性表達(dá) (SP×400)

2.2VEGFR-3的表達(dá)及微淋巴管密度的測(cè)定VEGFR-3主要表達(dá)于淋巴管內(nèi)皮上，而癌組織內(nèi)部表達(dá)較少，陽(yáng)性產(chǎn)物呈棕褐色顆粒。65例NSCLC中，VEGFR-3陽(yáng)性表達(dá)35例(35/65，53.85%)，而對(duì)照組僅1例(1/16，6.3%)，2者差異顯著 (P<0.05)。VEGFR-3染色陽(yáng)性淋巴管散在分布于癌組織間質(zhì)中，以腫瘤組織周邊與正常組織交界處的浸潤(rùn)區(qū)域及增生活躍區(qū)域?yàn)橹鳎？梢姲┧ㄐ纬?圖-2)。VEGFR-3標(biāo)記的LVD為(29.32±7.14)，明顯高于對(duì)照組(10.63±5.80) (P<0.001)。

圖-2　VEGFR-3陽(yáng)性淋巴管 (SP×100)

2.3LVD與淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系在65例NSCLC中VEGFR-3標(biāo)記的LVD與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、病理類型、分化程度均有顯著相關(guān)。其中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為(32.74±5.90)，明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(23.46±4.98)(P<0.05)。臨床晚期組為(31.99±6.65)，明顯高于臨床早期組(26.39±6.58)(P<0.05)。鱗癌組為(31.26±9.67)，明顯高于腺癌組(26.20±6.39)(P<0.05)。低-未分化組為(31.23±5.93)，明顯高于高-中分化組(27.22±7.84)(P<0.05)。相反與患者的年齡、性別和臨床分型無相關(guān)性。

3　討論

在VEGF家族成員中，VEGF-C是新近發(fā)現(xiàn)的特異性促淋巴管生成因子，與其受體VEGFR-3結(jié)合后，可通過MEK/ERK和PI3-激酶-Akt途徑引起淋巴內(nèi)皮細(xì)胞增生。其蛋白水解后的成熟形式還可結(jié)合并激活VEGFR-2，作用于血管、淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞刺激血管、淋巴管新生[4]。

人類多種腫瘤組織均表達(dá)VEGF-C，且水平與腫瘤淋巴管生成及淋巴轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。VEGF-C 可增加淋巴管的滲透性和腫瘤間質(zhì)壓力，有利于腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管和靜脈[5]。胃癌組織VEGF-C陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期、淋巴管浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，VEGFR-3陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，其LVD計(jì)數(shù)與VEGF-C的表達(dá)呈正相關(guān)[6]。劉新蘭[7]等采用組織微陣列技術(shù)研究了胃癌組織中VEGF-C和VEGFR-3的表達(dá)和微淋巴管密度，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中VEGF-C和VEGFR-3均呈高表達(dá)，與淋巴管生成有關(guān)并參與了胃癌的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。胃癌細(xì)胞非攝入性高表達(dá)的 VEGF-C和 VEGF-D 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān), 可作為評(píng)估胃癌患者預(yù)后的重要參考指標(biāo)[8]。Wang[9]等分別用免疫組化和RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了VEGF-C和VEGFR-3在正常喉組織、原發(fā)喉癌及其淋巴結(jié)中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)他們的表達(dá)與喉癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Naruse T[10]等對(duì)口腔舌鱗癌的研究顯示VEGF-C/VEGFR-3軸可通過淋巴管的再生而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，確定VEGF-C/VEGFR-3表達(dá)狀態(tài)有助于預(yù)測(cè)哪些病人會(huì)出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)，同時(shí)可以為舌癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的治療提供新的靶點(diǎn)。劉樹庫(kù)[1]等發(fā)現(xiàn)VEGF-C和VEGFR-3 m-RNA的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)中，VEGF-C和VEGFR-3均呈現(xiàn)高表達(dá)，且與NSCLC的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤浸潤(rùn)呈正相關(guān)。趙楊[11]等發(fā)現(xiàn)大腸癌組織VEGF-C、VEGFR-3表達(dá)與LVD值存在顯著正相關(guān)，可促進(jìn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Kadota[12]等的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)淋巴管生成尤其是微淋巴管和微血管的生成是非小細(xì)胞肺癌獨(dú)立的不良預(yù)后因素。Zhao[13]等發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織中的VEGF-C在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移前即誘導(dǎo)了前哨淋巴結(jié)的淋巴管生成。

本研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC組織LVD 為(29.32±7.14)，顯著高于對(duì)照組(10.63±5.80)。相關(guān)分析顯示：LVD與NSCLC的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤浸潤(rùn)正相關(guān)，而與其分化程度負(fù)相關(guān)。同時(shí)，LVD與VEGF-C和VEGFR-3呈現(xiàn)正相關(guān)關(guān)系。65例NSCLC中，VEGF-C和VEGFR-3高表達(dá)的組織淋巴管密度明顯增高，說明VEGF-C和VEGFR-3能促進(jìn)NSCLC淋巴管形成。這可能是VEGF-C通過自分泌作用于淋巴管內(nèi)皮上的VEGFR-3，促使微淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞的增生和微淋巴管的延伸、增多，致使腫瘤細(xì)胞進(jìn)入淋巴管的機(jī)會(huì)增多，從而使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性增大。

總之，VEGF-C及VEGFR-3在NSCLC中高表達(dá)，與其臨床分期、病理分級(jí)、病理類型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均密切相關(guān)。VEGF-C和VEGFR-3與NSCLC淋巴管生成及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，VEGF-C及LVD可作為判斷NSCLC淋巴轉(zhuǎn)移及判斷預(yù)后的重要指標(biāo)給臨床提供幫助。

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(收稿2016-03-22)

Expression of VEGF-C and VEGFR-3 in Non-Small Cell Lung Cancer and Its Relationship with Lymphatic metastasis

DingXuqing，HanYupei,YangKunpeng.

1)ThoracicDepartment,theSecondHospitalofNanyangCity,Henan, 473012,China； 2)ThoracicDepartment,theSecondAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou, 453014,China)

ObjectiveTo study relationship between VEGF-C, VEGFR-3 expression and lymphatic metastasis in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) to know the prognosis of patients. MethodsImmunohistochemical staining was used to detect the expression of VEGF-C and VEGFR-3 in 65 cases of NSCLC. The significance of VEGF-C and VEGFR-3 expression was analyzed with their clinicopathological parameters. ResultsThe postive rates of VEGF-C and VEGFR-3 expression were higher in NSCLC than those in nomal lung tissue (P<0.05). The expression rates of VEGF-C and VEGFR-3 were higher in clinical stage Ⅰ, Ⅱ than those in stage Ⅲ, and which were increased with the grading (P<0.05). And the expressions were higher in patients with lymph node involvement than those without metastasis (P<0.05). ConclusionIn NSCLC, the abnormal expressions of VEGF-C and VEGFR-3 had obvious relationship to clinical stage, pathological grade, lymph node involvement.

VEGF-C; VEGFR-3; NSCLC; Immunohistochemical; Lymphatic Metastasis

R446.6

A

1077-8991(2016)06-0001-03