固相萃取-高效液相色譜法測定化妝品中樂殺螨和克螨特

顧宇翔*， 周澤琳， 熊 薇

(上海市質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)技術(shù)研究院，上海 200233)

克螨特又名炔螨特，對成螨、若螨、幼螨有效，殺卵效果相對較差，并能有效控制螨類的繁殖，是一種低毒廣譜性殺螨劑。樂殺螨對螨類有速效作用，對卵、幼蟲、成蟲的各個(gè)階段均有效，但吸入、攝入或皮膚吸收均可中毒，對眼睛有輕微刺激性。目前，市場上存在不少宣稱具有除螨效果的化妝品，但《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》(2007年版)中對這兩種禁用廣譜殺螨劑沒有相應(yīng)的檢測方法，為了加強(qiáng)化妝品禁限用物質(zhì)的監(jiān)督管理，有必要建立除螨類化妝品中樂殺螨和克螨特的測定技術(shù)。

已見報(bào)道的克螨特含量測定方法主要針對植物、魚類等[1 - 6]，主要有氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜法等方法。在前處理領(lǐng)域，比較多的是有機(jī)溶劑提取，然后經(jīng)過萃取或者過柱進(jìn)行凈化等，整個(gè)過程操作較為復(fù)雜。樂殺螨的檢測方法很少，但有標(biāo)準(zhǔn)(SN 0523-1996)《出口水果中樂殺螨殘留量檢驗(yàn)方法》可供參考[7]。國外報(bào)道的樂殺螨和克螨特測定多為幾十種乃至上百種農(nóng)藥的同時(shí)檢測[8 - 10]，其前處理和測定方法為了兼顧各個(gè)農(nóng)藥故針對性不強(qiáng)。鑒于化妝品的基質(zhì)和植物、魚類存在較大差異，需要研究適合于化妝品的前處理和測定技術(shù)。本文采用固相萃取-高效液相色譜法測定化妝品中樂殺螨和克螨特，可為我國化妝品的市場監(jiān)督與企業(yè)管理提供技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Waters2695型液相色譜儀，帶二極管陣列檢測器；Waters Florosil固相萃取柱。

樂殺螨和克螨特混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：稱取樂殺螨和克螨特標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg(購自美國Sigma公司，精確至0.1 mg)至50 mL容量瓶中，用乙腈溶解，定容成混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。使用時(shí)稀釋成所需濃度梯度。乙腈為色譜純，其它試劑為分析純。實(shí)驗(yàn)所用水為二級去離子水。

1.2 色譜條件

色譜柱：安捷倫SB C18柱(250×4.6 mm，5 μm)；流動相：水∶乙腈=26∶74(V/V)，流量：1 mL·min-1；柱溫：30 ℃，進(jìn)樣量：10 μL；檢測波長：224 nm。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

稱取樣品1.000 g于25 mL具塞刻度離心管中，加入正己烷，漩渦振蕩1 min混勻，定容至10 mL。水浴中超聲提取15 min，8 000 r·min-1離心3 min。將Florosil固相萃取柱先用5 mL正己烷活化，然后取離心后的樣品上清液2 mL加入小柱(如上清液較為渾濁，可以提高離心速度或用濾膜過濾后再上樣)。上樣結(jié)束后用3 mL正己烷洗滌，然后用3 mL 5%丙酮-正己烷溶液洗脫，收集洗脫液于常溫氮吹至干，用1 mL 乙腈溶解并超聲助溶，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后檢測。上述過程的流速均控制在1 mL·min-1以下。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜柱和流動相的選擇

實(shí)驗(yàn)比較了默克RP18柱、資生堂MG C18柱和安捷倫SB C18柱，當(dāng)流動相中乙腈的體積分?jǐn)?shù)為74%～80%時(shí)對基質(zhì)復(fù)雜、干擾多的化妝品樣品分離效果的影響。結(jié)果表明，使用RP18柱、MG C18柱時(shí)，樂殺螨和克螨特易受到雜質(zhì)組分的干擾。使用SB C18柱，當(dāng)流動相中乙腈為74%時(shí)，分離效果較好。優(yōu)化的色譜條件見1.2節(jié)。

2.2 樂殺螨和克螨特的定性確證

在優(yōu)化色譜條件下，樂殺螨和克螨特的保留時(shí)間分別為9.7 min和15.0 min，用二極管陣列檢測器掃描獲得其210～400 nm間的特征光譜曲線作為鑒別所分離峰的依據(jù)。該曲線可用于干擾峰的鑒別，結(jié)合保留時(shí)間一起作為定性依據(jù)，提高沒有質(zhì)譜情況下的確證能力。

2.3 固相萃取條件的選擇

實(shí)驗(yàn)比較了Florosil、Silica、NH2、PSA和CN 5種固相萃取(SPE)柱的萃取效果。表1列出了不同固相萃取柱使用10%丙酮-正己烷洗脫液時(shí)的回收率，其中NH2、PSA和CN固相萃取柱的回收率偏低?？疾?了不同濃度的丙酮-正己烷洗脫液對于Florosil、Silica固相萃取柱洗脫效果的影響，發(fā)現(xiàn)Florosil固相萃取柱使用5%丙酮-正己烷時(shí)能將樣品中的樂殺螨和克螨特洗脫下來，而Silica固相萃取柱需要10%丙酮-正己烷才能洗脫完全，鑒于丙酮的量越多可能使更多的雜質(zhì)被洗脫下來，因此實(shí)驗(yàn)選用Florosil固相萃取柱和5%丙酮-正己烷作為洗脫液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

繪制了標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明樂殺螨質(zhì)量濃度(X)在1.02～102 μg·mL-1范圍內(nèi)與色譜峰面積(Y)呈線性關(guān)系，線性回歸方程為：Y=37 760X(μg·mL-1)+7 625，相關(guān)系數(shù)R2=0.999?？蓑刭|(zhì)量濃度在2.80～112 μg·mL-1范圍內(nèi)與色譜峰面積呈線性關(guān)系，線性回歸方程為：Y=17 350X(μg·mL-1)+2732，相關(guān)系數(shù)R2=0.999。

2.5 方法檢出限和精密度

在所建立的條件下，分別以3、10倍空白樣品的標(biāo)準(zhǔn)偏差結(jié)合空白基質(zhì)樣品加標(biāo)的情況確定樂殺螨和克螨特的檢出限分別為3.5 mg·kg-1和8.0 mg·kg-1；定量限分別為10 mg·kg-1和25 mg·kg-1。

將某一樂殺螨和克螨特低含量樣品提取液連續(xù)進(jìn)樣測定10次，計(jì)算得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為4.0%和3.1%。將某一樂殺螨和克螨特高含量樣品提取液連續(xù)進(jìn)樣測定10次，計(jì)算得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為2.23%和3.02%。

2.6 回收率

取不同量的樂殺螨和克螨特標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入各類樣品中，得高、中、低樣品加標(biāo)回收率，如表2所示。樂殺螨回收率為82.6%～107.0%，克螨特回收率為80.4%～105.9%。

表2 加標(biāo)回收率(n=10)

2.7 樣品分析

用本方法對市售幾十種宣稱具有除螨作用的化妝品進(jìn)行測定，未檢出含有樂殺螨和克螨特的產(chǎn)品。

3 結(jié)論

本研究建立了正己烷超聲提取-固相萃取-HPLC測定化妝品中樂殺螨和克螨特的方法，填補(bǔ)了國內(nèi)檢測技術(shù)的空白。該方法樂殺螨檢出限和定量限分別為3.5 mg·kg-1和10 mg·kg-1;克螨特檢出限和定量限分別為8.0 mg·kg-1和25 mg·kg-1，加標(biāo)回收率分別為82.6%～107.0%(樂殺螨)和80.4%～105.9%(克螨特)，適用于監(jiān)管部門對產(chǎn)品中違規(guī)使用樂殺螨和克螨特的鑒別。