七鰓鰻水通道蛋白3的克隆與生物學(xué)特性分析

趙春暉史金杰王浩劉欣李慶偉

（1.遼寧師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，遼寧省生物技術(shù)與分子藥物研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 大連 116081；2.遼寧師范大學(xué)七鰓鰻研究中心，大連 116081）

七鰓鰻水通道蛋白3的克隆與生物學(xué)特性分析

趙春暉1，2史金杰1王浩2劉欣2李慶偉2

（1.遼寧師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，遼寧省生物技術(shù)與分子藥物研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 大連 116081；2.遼寧師范大學(xué)七鰓鰻研究中心，大連 116081）

水通道蛋白3（aquaporin 3，AQP3）屬于水甘油通道蛋白家族，參與水、尿素和甘油的轉(zhuǎn)運(yùn)和促進(jìn)細(xì)胞增殖及遷移。從七鰓鰻中克隆得到了Aqp3（LjAqp3）cDNA（GenBank 序列號(hào)KR054618），其開放閱讀框?yàn)?00 bp，編碼299個(gè)氨基酸，含6個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域，有信號(hào)肽。序列分析結(jié)果表明，七鰓鰻AQP3有2個(gè)高度保守的天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸（NPA）模體和1個(gè)芳香族/精氨酸（ar/R）結(jié)構(gòu)。進(jìn)行同源序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)與其它物種具有較高的同源性。實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析表明，LjAqp3在七鰓鰻中分布廣泛，在多種組織器官中表達(dá)。

水通道蛋白3；七鰓鰻；天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸模體

膜內(nèi)在蛋白（membrane intrinsic proteins，MIPs），也被稱為水通道蛋白（aquaporins，AQPs），是分子質(zhì)量為26-35 kD的跨膜蛋白，可以促進(jìn)水和小分子溶質(zhì)運(yùn)輸，如甘油、尿素、氨、金屬和二氧化碳。這些蛋白質(zhì)構(gòu)成了一個(gè)古老、豐富、非常復(fù)雜的蛋白質(zhì)家族。AQPs具有高度保守的結(jié)構(gòu)域，在細(xì)胞膜上以四聚體形式存在，每個(gè)單體由6個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域組成，形成兩個(gè)選擇性孔道。一個(gè)孔道含有兩個(gè)相對(duì)的NPA（Asn-Pro-Ala）模體，與水分子形成氫鍵和質(zhì)子靜電斥力，構(gòu)成一個(gè)獨(dú)特的沙漏形孔道；另一個(gè)選擇性孔道含有ar/R（aromatic/arginine）模體，即Phe、Gly/Ser、Tyr/Ala 和Arg 4個(gè)氨基酸，位于孔道的最窄區(qū)域，控制著轉(zhuǎn)運(yùn)底物的專一性［1-3］。

AQPs廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物中，植物AQPs大致分為質(zhì)膜內(nèi)在蛋白（plasma intrinsic protein，PlPs）、液泡膜內(nèi)在蛋白（tonoplast intrinsicproteins，TIPs）、類NOD26膜內(nèi)在蛋白（nodulin 26-like intrinsic proteins，NIPs）、小分子堿性膜內(nèi)在蛋白（small and basic intrinsic proteins，SIPs）、類GlpF膜內(nèi)在蛋白（GlpF-like intrinsic proteins，GIPs）以及XIPs（X intrinsic proteins）和HIPs（hybrid intrinsic proteins）7種類型。位于生物膜上的AQPs參與水分跨膜運(yùn)輸，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞間的水分流動(dòng)，維持體內(nèi)水分平衡，從而使細(xì)胞正常進(jìn)行各種生理活動(dòng)［3，4］。哺乳動(dòng)物中AQPs的研究已十分廣泛，目前發(fā)現(xiàn)13種AQPs（AQP0-12），分為3個(gè)亞系：水通道蛋白（AQP0、1、2、4、5、6和8），超級(jí)水通道蛋白（AQP11和12）和水甘油通道蛋白（AQP3、7、9和10）。除了在體液的分泌、吸收以及調(diào)節(jié)細(xì)胞體積過(guò)程中對(duì)水的轉(zhuǎn)運(yùn)，在細(xì)胞黏附、遷移、增殖和分化等過(guò)程中也發(fā)揮重要的作用，其機(jī)制可能參與由cAMP（cyclic adenosine monophosphate）、MAPK（mitogen-activated protein kinase）、PKC（protein kinase C）和PI3K/Akt/mTOR介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路［5-7］。在魚中AQPs亞家族（AQP0-12）的序列分析也已完成，分為水通道蛋白（AQP0、1、4），水甘油轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白（AQP3和AQP7-10），水尿素轉(zhuǎn)運(yùn)通道蛋白（AQP8）和兩個(gè)非典型的水通道蛋白（AQP11和12）［8］。

水通道蛋白3（aquaporin 3，AQP3）通常對(duì)水以及小分子溶質(zhì)，如甘油和尿素具有通透性。哺乳動(dòng)物AQP3在腎集合管、表皮、肺的氣道、結(jié)膜和膀胱等多種組織器官中表達(dá)；其表達(dá)水平受血管加壓素、cAMP、糖皮質(zhì)激素和高滲性調(diào)控；鎳、銅離子或者酸性條件下可阻斷AQP3的運(yùn)輸功能［6，9，10］。近來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，AQP3是受Notch信號(hào)通路調(diào)控的靶基因之一，AQP3通過(guò)與Notch信號(hào)通路的相互作用，可以抑制角質(zhì)形成細(xì)胞的分化［11］。AQP3還可通過(guò)激活ERK通路，進(jìn)而增加基質(zhì)金屬蛋白酶3（matrix metalloproteinase-3，MMP-3）在前列腺細(xì)胞中的表達(dá)和分泌，從而促進(jìn)前列腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移［12］。已有的研究表明，AQP3可能在細(xì)胞黏附、遷移、增殖和分化等過(guò)程中均發(fā)揮重要的作用，但其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。有關(guān)魚類AQP3的研究還較少，包括斑馬魚（Danio rerio）［8］、鳉魚（Fundulus heteroclitus）［13］、鯪魚（Tribolodon hakonensis）［14］、鰻魚（Anguilla anguilla）［15］、羅非魚（Oreochromis mossambicus）［16］、薩羅羅非魚（Sarotherodon melanotheron）［17］。這些研究結(jié)果表明，AQP3與魚類的防止細(xì)胞腫脹、失水，參與尿素、甘油、氨轉(zhuǎn)運(yùn)及滲透壓調(diào)節(jié)過(guò)程有密切關(guān)系。

在海洋生物中，七鰓鰻（Lampetra japonica）是迄今所知道的最原始的無(wú)頜類脊椎動(dòng)物之一，它印記了無(wú)脊椎動(dòng)物的進(jìn)化歷史，也為脊椎動(dòng)物的起源與進(jìn)化提供了豐富的遺傳信息。在進(jìn)化上，七鰓鰻是聯(lián)系無(wú)脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物之間的重要階元，具有極高的研究?jī)r(jià)值［18］。本研究首次克隆得到七鰓鰻（L. japonica）Aqp3基因cDNA全長(zhǎng)序列，并進(jìn)行序列進(jìn)化和組織特異性表達(dá)水平的分析，旨在為進(jìn)一步研究水通道蛋白的進(jìn)化及其在七鰓鰻中的功能提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年七鰓鰻購(gòu)買自黑龍江省松花江流域同江地區(qū)，體重約112.0-274.3 g，體長(zhǎng)約36.4-58.4 cm，七鰓鰻活體馴養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)室水族箱內(nèi)（2-5℃），3-4周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 試劑 DNA純化試劑盒、質(zhì)粒小量提取試劑盒、RNAiso Plus、PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser、TaKaRa 3'-Full RACE Core Set Ver.2.0、SYBR PrimeScriptTMRT-PCR試劑盒及DNA Marker等均購(gòu)于寶生物工程（大連）公司。

1.1.3 引物合成和測(cè)序 引物合成及重組質(zhì)粒目的基因測(cè)序由生工生物工程（上海）股份有限公司測(cè)定。

1.2 方法

1.2.1 克隆七鰓鰻Aqp3 基因cDNA全長(zhǎng)序列 從七鰓鰻血液中分離外周血白細(xì)胞［19］，用RNAiso Plus試劑提取mRNA反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。七鰓鰻Aqp3（LjAqp3）的EST序列來(lái)自本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的七鰓鰻白細(xì)胞cDNA文庫(kù)（4.5×106pfu/mL），設(shè)計(jì)引物見(jiàn)表1。LjAqp3 RT-PCR擴(kuò)增反應(yīng)條件：94℃ 3 min；94℃1 min，56℃ 30 s，72℃ 1 min，共35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10 min。提取質(zhì)粒進(jìn)行DNA測(cè)序，獲得cDNA片段。3' RACE擴(kuò)增按照TaKaRa公司的3'-Full RACE Core Set Ver.2.0試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，1st PCR 反應(yīng)程序：94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 1 min，25個(gè)循環(huán)；2nd PCR 反應(yīng)程序：94℃ 30 s，55℃ 30 s，72℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)。RACE產(chǎn)物經(jīng)純化、克隆和測(cè)序后，用DNAman（Lynnon Biosoft）軟件拼接獲得七鰓鰻Aqp3基因cDNA全長(zhǎng)序列。重新設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增ORF區(qū)，PCR反應(yīng)條件：94℃ 3 min；94℃ 30 s，58℃ 30 s，72℃ 1 min，共30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10 min。

1.2.2 LjAQP3氨基酸序列及系統(tǒng)進(jìn)化分析 根據(jù)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行拼接得到LjAqp3的全長(zhǎng)cDNA序列，用Bioedit 7.0軟件推測(cè)其編碼的氨基酸序列，開放閱讀框（ORF）分析使用NCBI在線預(yù)測(cè)軟件（http：//www. ncbi.nlm.nih.gov/gorf/gorf.html）。信號(hào)肽預(yù)測(cè)分析使用SignalP 4.1（http：//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/）?？缒^(qū)域預(yù)測(cè)使用TMHMM Server v. 2.0（http：//www. cbs.dtu.dk/services/TMHMM/），用ClustalX 2.0軟件進(jìn)行多重序列比對(duì)，用MEGA 6.0軟件neighbor-joining（NJ）法進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建。

1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)LjAqp3 mRNA轉(zhuǎn)錄水平 使用RNAiso Plus試劑分別提取3條七鰓鰻的眼、鰓、腎、腸、腦、肌肉、口腔腺、生殖腺（雄性）、卵（雌性）及白細(xì)胞的總RNA。使用gDNA Eraser對(duì)RNA樣品進(jìn)行純化。LjAqp3 mRNA轉(zhuǎn)錄分析使用TaKaRa的PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser 反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR?Premix Ex TaqTMII熒光染料和TaKaRa TP7500 PCR檢測(cè)系統(tǒng)。七鰓鰻GAPDH基因作為內(nèi)參（表1）。PCR反應(yīng)體系為25 μL，包含12.5 μL Master SYBR Green（TaKaRa）mix，1 mL 引物（10 mmol/L），2 mL cDNA（100 ng/ mL）及水。PCR反應(yīng)條件為：95℃ 30 s；95℃ 5 s，56℃ 30 s，72℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品均重復(fù)3次，得到特異性的熔解曲線和擴(kuò)增曲線，通過(guò)2%瓊脂糖凝膠電泳確認(rèn)反應(yīng)是否完成。使用2-ΔΔCt方法對(duì)LjAqp3 mRNA轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行計(jì)算分析［20］。

表1 PCR引物的序列

2 結(jié)果

2.1 LjAqp3基因克隆及序列分析

RT-PCR擴(kuò)增得到長(zhǎng)806 bp的片段，克隆測(cè)序后經(jīng)BLAST分析確認(rèn)為L(zhǎng)jAqp3基因的核心序列，3' RACE獲得 224 bp的3' 末端序列，將這2部分序列拼接最終得到LjAqp3基因的全長(zhǎng)cDNA序列1 137 bp。用LjAqp3 Forward和 LjAqp3 Reverse擴(kuò)增得到900 bp的ORF區(qū)。LjAqp3完整的cDNA序列及其氨基酸序列（圖1）顯示，LjAqp3 cDNA的全長(zhǎng)序列包括13 bp 5'非翻譯區(qū)（5' UTR），900 bp的閱讀框ORF以及224 bp 3' 非翻譯區(qū)（3' UTR），推測(cè)ORF可編碼299個(gè)氨基酸，蛋白質(zhì)分子質(zhì)量預(yù)測(cè)為32.1 kD，理論等電點(diǎn)為8.86。七鰓鰻Aqp3基因的3' UTR有一個(gè)polyA加尾信號(hào)AATAAA。通過(guò)氨基酸序列分析發(fā)現(xiàn)，LjAQP3的-NH2和COOH-均位于膜內(nèi)，含有2個(gè)形成水孔道的天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸（Asn-Pro-Ala，NPA）模體。信號(hào)肽和跨膜區(qū)域預(yù)測(cè)結(jié)果表示，LjAQP3的 N 端前 27 個(gè)為信號(hào)肽，含有6個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域，即TM1-TM6（21-43，58-80，101-123，156-175，188-210，238-260），同時(shí)由5個(gè)loop環(huán)連接，即loopA-E（44-57，81-100，124-155，176-187，211-237），其中3個(gè)胞外環(huán)loopA、loopC、loopE，2個(gè)胞內(nèi)環(huán)loop B和loop D，而loop B和loop E均為半螺旋環(huán)（圖1）。LjAqp3序列已被提交到NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)（KR054618）。

AQP3單體的6個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域（TM1-TM-6），2個(gè)NPA模體分別位于loop B和loop E半螺旋環(huán)上，形成芳香族/精氨酸（ar/R）結(jié)構(gòu)的4個(gè)氨基酸殘基以及形成水孔道的5個(gè)保守殘基P1-P5（Y、D、R、P和I/V）（圖2-A）。使用ClustalX 2.0軟件對(duì)LjAQP3與其它11個(gè)物種AQP3進(jìn)行序列比對(duì)，序列分析發(fā)現(xiàn)LjAQP3同其它物種有很高的保守性，含有較多的同源序列（圖2-B）。與非洲爪蟾（Xenopus（Silurana）tropicalis）、日本鰻鱺（Anguilla japonica）、斑馬魚（Danio rerio）、原鰭魚（Protopterus annectens）、歐洲鱸（Dicentrarchus labrax）、薩羅羅非魚（Sarotherodon melanotheron）、底鳉（Fundulus heteroclitus）、暗紋東方鲀（Takifugu obscurus）、羅非魚（Oreochromis mossambicus）、金頭雕（Sparus aurata）和恒河青鳉（Oryzias dancena）的相似性分別為82%、82%、83%、85%、79%、79%、81%、80%、79%、78%和92%。第一個(gè)高度保守的NPA前端序列為SGGH（L/I），第二個(gè)高度保守的NPA后端序列為RD，且其羧基末端的序列-KKXX幾乎都包含2個(gè)賴氨酸殘基。苯丙氨酸（F63）、甘氨酸（G199）、酪氨酸（Y208）、精氨酸（R214）4種氨基酸殘基形成1個(gè)ar/R結(jié)構(gòu)。

圖1 LjAqp3基因全長(zhǎng)cDNA及其氨基酸序列

使用MEGA 6.0軟件中neighbor-joining建樹方法對(duì)LjAQP3與其它16個(gè)物種AQP3/AQP進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建（圖3），相似性見(jiàn)表2。系統(tǒng)發(fā)育樹主要包括4個(gè)集群：（1）哺乳動(dòng)物、鳥類和爬行動(dòng)物（小鼠、人、恒河猴、半環(huán)扁尾蛇、鳳頭鸊鷉、鵪鶉）；（2）兩棲動(dòng)物和魚類（非洲爪蟾、日本鰻鱺、斑馬魚、原鰭魚、歐洲鱸、薩羅羅非魚）；（3）節(jié)肢動(dòng)物（蚤水溞、海虱）；（4）線形動(dòng)物（錫蘭鉤蟲）；果蠅為Out group。LjAQP3處于“兩棲動(dòng)物和魚類”分支。

圖2 LjAQP3同源序列多重比對(duì)

2.2 LjAqp3基因在各組織中的表達(dá)分析

對(duì)七鰓鰻各個(gè)組織中LjAqp3的轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行測(cè)定。設(shè)LjAqp3基因在腦中表達(dá)量為1，根據(jù)LjAqp3在各組織中的相對(duì)表達(dá)量作圖。結(jié)果（圖4）表明，LjAqp3在七鰓鰻上述10種組織中均有表達(dá)，其中在鰓中表達(dá)量最高；其次是肌肉、口腔腺、腸、腎、卵、生殖腺、白細(xì)胞；而在眼中表達(dá)量較少。

圖3 鄰接法構(gòu)建LjAQP3的系統(tǒng)發(fā)育樹

表2 LjAQP3與其他已知物種的水通道蛋白氨基酸相似性

圖4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)正常七鰓鰻各組織中LjAqp3 mRNA表達(dá)

3 討論

水通道蛋白是一個(gè)古老、豐富、非常復(fù)雜的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族，其可運(yùn)輸水分或小分子溶質(zhì)，如甘油、CO2、尿素等。至今，哺乳動(dòng)物中已發(fā)現(xiàn)13個(gè)成員；植物中已發(fā)現(xiàn)7種類型；兩棲類、魚類、昆蟲、菌類中也相繼發(fā)現(xiàn)不同成員［2-4］。水通道蛋白3屬于水甘油轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其分布廣泛，與多種體內(nèi)代謝活動(dòng)相關(guān)。

七鰓鰻以其獨(dú)特的進(jìn)化地位和獨(dú)有的免疫系統(tǒng)成為研究脊椎動(dòng)物免疫系統(tǒng)起源和進(jìn)化的重要物種［21］。本研究首次從七鰓鰻中克隆得到AQP3基因。其氨基酸序列顯示，LjAQP3含有兩個(gè)典型的NPA（T）基序和1個(gè)ar/R結(jié)構(gòu)域，并保留了較多高度保守的殘基（Y123、D215、R219、P242和V243/I243）和氨基酸序列（GT、ILV、FGCG、AFGF、SGGHLNPA、VIF、IGT、AL、NNPXP、IG、SMGXN、VNPARD、GPR和GWG）［8］。LjAQP3的2個(gè)NPA模體和1個(gè)ar/R結(jié)構(gòu)對(duì)水或溶質(zhì)分子（如甘油和尿素等）孔道的形成非常關(guān)鍵［2，22，23］。在與非洲爪蟾、日本鰻鱺、斑馬魚等11個(gè)物種的AQP3進(jìn)行序列比對(duì)時(shí)發(fā)現(xiàn)，這些物種的AQP3的B環(huán)上均有半胱氨酸（Cys91），該半胱氨酸為汞的抑制位點(diǎn)，AQP3也因此被稱為汞敏感水通道蛋白［9-13］。而七鰓鰻AQP3的序列中該位點(diǎn)已被丙氨酸（Gla91）取代，表明七鰓鰻AQP3有其結(jié)構(gòu)和功能的獨(dú)特性，其具體結(jié)構(gòu)與功能還有待進(jìn)一步研究。

氨基酸序列比對(duì)分析表明本研究獲得的水通道蛋白3的序列與其它物種的AQP3具有較高的同源性，與恒河青鳉（Oryzias dancena）AQP3序列最為相似，氨基酸酸同源性高達(dá)92%。七鰓鰻是目前存在的最古老的脊椎動(dòng)物之一。系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明，LjAQP3可能是AQP3較原始的形式，相較于節(jié)肢動(dòng)物，其結(jié)構(gòu)上與高等動(dòng)物AQP3更加接近，位于高等脊椎動(dòng)物AQP3的“魚類”分支，這也與目前研究的七鰓鰻的進(jìn)化地位相一致。

哺乳動(dòng)物AQP3在腎集合管、表皮、肺的氣道、結(jié)膜和膀胱等多種組織器官中表達(dá)［9］。七鰓鰻AQP3在檢測(cè)的眼、鰓、腎、腸、腦、肌肉、口腔腺、生殖腺（雄性）、卵（雌性）、白細(xì)胞組織及細(xì)胞中均有表達(dá)，表明其作為細(xì)胞膜重要的水通道蛋白，在水和非離子型的溶質(zhì)運(yùn)輸及維持機(jī)體體液穩(wěn)態(tài)中起著至關(guān)重要的作用。其中，在鰓中表達(dá)量最高，可能與鰓作為滲透壓調(diào)節(jié)的主要器官，是體內(nèi)與體外環(huán)境進(jìn)行離子和水交換的主要場(chǎng)所有關(guān)［17］。七鰓鰻AQP類型分布是否有著組織細(xì)胞部位的選擇性，其在體內(nèi)受到哪些因素的調(diào)節(jié)，將是下一步深入研究的問(wèn)題。

4 結(jié)論

本研究首次從七鰓鰻中克隆了LjAqp3基因，基因全長(zhǎng)1 137 bp，由900 bp的開放閱讀框組成，可編碼299個(gè)氨基酸，含有6個(gè)跨膜螺旋結(jié)構(gòu)域和一個(gè)信號(hào)肽；有2個(gè)NPA模體和1個(gè)ar/R結(jié)構(gòu)；其序列具有較高的保守性；LjAqp3在七鰓鰻中分布廣泛，在多種組織器官中表達(dá)。

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

Cloning and Biological Characterization of Aquaporin 3 from Lampetra japonica

ZHAO Chun-hui1，2SHI Jin-jie1WANG Hao2LIU Xin2LI Qing-wei2
（1. Liaoning Provincial Key Laboratory of Biotechnology and Drug Discovery，College of Life Sciences，Liaoning Normal University，Dalian 116081；2. Lamprey Research Center，Liaoning Normal University，Dalian 116081）

Aquaporin 3（AQP3）belongs to the family of aquaglyceroporin，and it involves in the transport of water，urea and glycerol and promotes cell proliferation and migration. In this study，the complete cDNA sequence of Aqp3（designated as LjAqp3）was cloned from Arctic lamprey Lampetra japonica（GenBank accession number KR054618）. The open reading frame of LjAqp3 was 900 bp，encoding 299 amino acids，with a predicted 6 transmembrane helix domains and a putative signal peptide. There were 2 highly conserved asparagine-prolinealanine（NPA）motifs and the aromatic/arginine（ar/R）structure in LjAQP3. Additionally，LjAQP3 shared high sequence homology with AQP3 of other species. Real-time quantitative PCR revealed the constitutive expression of LjAqp3 in multiple tissues and organs.

aquaporin 3；Lampetra japonica；asparagine-proline-alanine motif

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.021

2015-06-23

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31170353）

趙春暉，女，副教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：細(xì)胞生物學(xué)與蛋白質(zhì)工程；E-mail：zch@lnnu.edu.cn