抗除草劑bar基因與EPSPS基因在轉(zhuǎn)基因甘蔗中的應(yīng)用研究

王文治 楊本鵬 蔡文偉 熊國(guó)如 馮翠蓮 王俊剛 武媛麗沈林波 張樹珍

（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所 農(nóng)業(yè)部熱帶作物生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，?？?571101）

抗除草劑bar基因與EPSPS基因在轉(zhuǎn)基因甘蔗中的應(yīng)用研究

王文治 楊本鵬 蔡文偉 熊國(guó)如 馮翠蓮 王俊剛 武媛麗沈林波 張樹珍

（中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院甘蔗研究中心 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所 農(nóng)業(yè)部熱帶作物生物學(xué)與遺傳資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，?？?571101）

通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，分別將bar基因和EPSPS基因?qū)氲礁收嶂?，分別獲得了抗草銨膦和草甘膦兩種除草劑的轉(zhuǎn)基因甘蔗。通過直接噴灑田間施用濃度的草銨膦和草甘膦除草劑，證明了轉(zhuǎn)基因甘蔗T0、T1代、宿根1代和宿根2代外源基因遺傳穩(wěn)定，且均具有穩(wěn)定的耐除草劑的功能。因此轉(zhuǎn)耐除草劑基因的甘蔗，可以與轉(zhuǎn)耐除草劑基因的玉米、大豆、油菜和棉花一樣，有廣闊的應(yīng)用前景。

轉(zhuǎn)基因甘蔗；耐除草劑；bar基因；EPSPS基因；草銨膦；草甘膦

田間雜草與作物競(jìng)爭(zhēng)陽光、水分、養(yǎng)分及生長(zhǎng)空間，同時(shí)又是作物病原菌和害蟲的中間寄主生物，嚴(yán)重影響了農(nóng)作物產(chǎn)量和農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量［1］。同其他作物如水稻、小麥、玉米、大豆和油菜等一樣，甘蔗雜草危害也相當(dāng)嚴(yán)重，使用除草劑除草是目前備受青睞的除草方式。然而傳統(tǒng)的除草劑如草銨膦和草甘膦除草無選擇性，不能直接用于作物的生長(zhǎng)期，因此這個(gè)時(shí)期的田間除草只能依賴于人工操作［2］。然而隨著中國(guó)農(nóng)村剩余勞動(dòng)力的減少和勞動(dòng)力成本的增加，使本來機(jī)械化水平就偏低的甘蔗生產(chǎn)成本進(jìn)一步提高［3-5］。種植耐除草劑轉(zhuǎn)基因作物是解決這個(gè)問題的最有效方法之一，在中國(guó)開展耐除草劑轉(zhuǎn)基因育種具有巨大的市場(chǎng)需求［6］。

2014年，全球種植轉(zhuǎn)基因作物1.815億hm2，相當(dāng)于全球總耕種面積的10%，其中具有耐除草劑性狀的轉(zhuǎn)基因作物占全球轉(zhuǎn)基因作物面積的61%［7，8］。開展耐除草劑轉(zhuǎn)基因研究的作物有很多種，得到大面積推廣應(yīng)用的主要以玉米、大豆、油菜和棉花為主［9］。國(guó)內(nèi)外對(duì)甘蔗耐除草劑轉(zhuǎn)基因方面的研究也有一些報(bào)道［10-12］，但對(duì)其推廣應(yīng)用還遠(yuǎn)不如大豆、玉米等其他作物，特別是在國(guó)內(nèi)，甘蔗抗除草劑轉(zhuǎn)基因的研究相對(duì)來說還比較落后。

世界上應(yīng)用得比較多的耐除草劑的基因主要為bar基因和EPSPS基因［13，14］。本研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，分別將bar基因和EPSPS基因?qū)敫收嶂?，通過直接噴灑田間施用濃度的草銨膦和草甘膦，以期獲得抗草銨膦和草甘膦的轉(zhuǎn)基因甘蔗。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 品種、質(zhì)粒和菌株 受體材料為甘蔗主栽品種新臺(tái)糖22號(hào)，抗草銨膦的bar基因來源于pCAMBIA3300載體，抗草甘膦的EPSPS基因來源于根癌農(nóng)桿菌CP4菌株。分別含兩個(gè)抗除草劑基因的植物表達(dá)載體均為本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建并保存，轉(zhuǎn)化所用農(nóng)桿菌菌株為EHA105。所使用草銨膦為浙江永農(nóng)生物科技有限公司生產(chǎn)，農(nóng)藥名稱為“百速頓”，產(chǎn)品批號(hào)：2014080701，其有效濃度為20%的草銨膦。所使用草甘膦為江蘇豐山集團(tuán)有限公司生產(chǎn)，農(nóng)藥名稱為“雙火”，產(chǎn)品批號(hào)：2014111201，其有效濃度為41%草甘膦異丙胺鹽。

實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因植物及植物用微生物環(huán)境安全監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（海口） ——文昌基地。

1.1.2 培養(yǎng)基配方 胚性愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+ 2，4-D 1 mg/L+蔗糖30 g/L+卡拉膠8 g/L，pH5.8。

胚狀體分化培養(yǎng)基：MS+6-BA 1 mg/L+KT 0.5 mg/L+蔗糖30 g/L+卡拉膠8 g/L，pH5.8。

生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS（大量元素減半，其他成分不變）+NAA 2 mg/L+蔗糖20 g/L+ 椰水100 mL/L+卡拉膠8 g/L+活性炭0.2 g/L，pH 5.8［15］。

MR培養(yǎng)基：MS（1/5大量元素）+30 g/L蔗糖+100 μm/L乙酰丁香酮，pH5.2。

1.2 方法

1.2.1 甘蔗胚性愈傷組織的誘導(dǎo) 以田間生長(zhǎng)良好的甘蔗頂端生長(zhǎng)點(diǎn)處的幼葉組織為外植體，經(jīng)酒精及升汞消毒、無菌水沖洗后，于無菌濾紙上吸干其表面的水分后，切成1 mm左右厚度的薄片接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，于避光條件下進(jìn)行培養(yǎng)至誘導(dǎo)出愈傷組織。

1.2.2 農(nóng)桿菌侵染菌液的制備 通過凍融法將含bar基因及EPSPS基因的植物表達(dá)載體分別導(dǎo)入到EHA105中。將經(jīng)PCR鑒定為陽性的農(nóng)桿菌在含抗生素的YEP平板上劃線，挑取單菌落接種到5 mL YEP的液體培養(yǎng)基中，振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，于150 mL三角瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)，培養(yǎng)至OD為0.6左右，將菌液轉(zhuǎn)移到離心管中，5 000 r/min離心5 min，棄上清，吸干殘液，用MR液體培養(yǎng)基重懸菌體，最后置于28℃，200 r/min激活2 h，誘導(dǎo)細(xì)菌Vir基因的表達(dá)，作為轉(zhuǎn)化材料的浸染液。

1.2.3 愈傷組織的轉(zhuǎn)化 挑取生長(zhǎng)旺盛的愈傷組織于濾紙上吹干使其處于干縮狀態(tài)，于工程菌液中浸泡30 min后，濾去菌液，用濾紙吸干殘液，吹干，轉(zhuǎn)移到MR固體培養(yǎng)基上。共培養(yǎng)3-4 d后，繼代篩選培養(yǎng)20 d后，分化篩選培養(yǎng)15 d。待愈傷長(zhǎng)出1 cm左右的小苗后，生根篩選培養(yǎng)30 d。

1.2.4 轉(zhuǎn)化植株的移栽與培養(yǎng) 當(dāng)分別轉(zhuǎn)入抗草銨膦的bar基因及抗草甘膦的EPSPS基因的植株在抗性生根培養(yǎng)基上生長(zhǎng)至4-7 cm后，將經(jīng)PCR鑒定為陽性的轉(zhuǎn)化株系移栽到大花盆里，并置于室外進(jìn)行種植培養(yǎng)，此次培養(yǎng)得到的植株設(shè)為T0代。到T0生長(zhǎng)8個(gè)月左右后，砍去主莖，適量培土進(jìn)行宿根培養(yǎng)，重新生長(zhǎng)出來的植株設(shè)為宿根1代。待宿根1代生長(zhǎng)到8個(gè)月左右，再次砍去所有主莖，再次進(jìn)行宿根培養(yǎng)，重新生長(zhǎng)出來的植株設(shè)為宿根2代。而將所砍取的T0代的甘蔗莖段作為種莖，移栽大田擴(kuò)繁種植，稱為T1代。

1.2.5 轉(zhuǎn)化植株的分子檢測(cè) 分別合成bar基因及EPSPS基因的特異性引物，分別對(duì)T0代、T1代、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，分析bar基因及EPSPS基因在轉(zhuǎn)基因甘蔗中的遺傳穩(wěn)定性。進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測(cè)，擴(kuò)增時(shí)設(shè)置正負(fù)對(duì)照。并對(duì)植株擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行回收測(cè)序，檢測(cè)擴(kuò)增目的條帶的準(zhǔn)確性。

1.2.6 T0代、T1代、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株的耐除草劑特性檢測(cè) 對(duì)轉(zhuǎn)有bar基因的T0代、T1代、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株，噴灑田間建議使用濃度4.5/hm2的百速頓草銨膦除草劑（200 g/L草銨膦，永農(nóng)生物科技有限公司，浙江）。對(duì)轉(zhuǎn)有EPSPS基因的T0、T1、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株，噴灑田間建議使用濃度6 L/hm2的農(nóng)達(dá)草甘膦除草劑（41%草甘膦異丙胺鹽，豐山集團(tuán)有限公司，江蘇）。

2 結(jié)果

2.1 bar基因及EPSPS基因植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌的鑒定

用合成的bar基因及EPSPS基因的特異性引物，對(duì)通過凍融法將含抗草銨膦的bar基因及抗草甘膦的EPSPS基因的兩個(gè)植物表達(dá)載體分別導(dǎo)入EHA105中的農(nóng)桿菌菌株進(jìn)行PCR鑒定，并通過農(nóng)桿菌質(zhì)粒DNA間接酶切鑒定法進(jìn)行質(zhì)粒載體的酶切鑒定［16］。如圖1所示，1、2號(hào)菌株能擴(kuò)增出與預(yù)期條帶359 bp大小一致的條帶，且如圖2-A所示，通過酶切可以獲得與bar基因550 bp大小一致的條帶，說明含抗草銨膦的bar基因的植物表達(dá)載體已經(jīng)正確導(dǎo)入到EHA105農(nóng)桿菌菌株中。同樣如圖1所示，3、4號(hào)菌株能擴(kuò)增出與預(yù)期條帶643 bp大小一致的條帶，且如圖2-B所示，通過酶切可以切出與EPSPS基因1 600 bp大小一致的條帶，說明含抗草甘膦的EPSPS基因的植物表達(dá)載體已經(jīng)正確導(dǎo)入到EHA105農(nóng)桿菌菌株中。

圖1 農(nóng)桿菌菌株P(guān)CR鑒定

圖2 植物表達(dá)載體的酶切鑒定

2.2 轉(zhuǎn)基因植株的獲得

通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，用含抗草銨膦的bar基因及抗草甘膦的EPSPS基因的兩個(gè)植物表達(dá)載體分別對(duì)甘蔗新臺(tái)糖22號(hào)進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，結(jié)果（圖3）表明，為轉(zhuǎn)化篩選后得到了分別含抗草銨膦的bar基因及抗草甘膦的EPSPS基因的轉(zhuǎn)化植株。

圖3 轉(zhuǎn)含bar基因（A）EPSPS基因（B）的甘蔗遺傳轉(zhuǎn)化

2.3 T0代轉(zhuǎn)化株系的PCR檢測(cè)

當(dāng)所獲得的轉(zhuǎn)化抗性植株生長(zhǎng)至4-7 cm，按編號(hào)剪取小苗葉片組織約10-20 mg，剪碎置于eppendorf管中，用CTAB法提取DNA。用1.2.5合成的bar基因及EPSPS基因的特異性引物，對(duì)分別轉(zhuǎn)有bar基因及EPSPS基因的轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行PCR檢測(cè)。圖4顯示，所檢測(cè)的轉(zhuǎn)bar基因的23株轉(zhuǎn)化抗性植株中有20株為bar基因陽性（編號(hào)為：b1、b2、b3、b5、b6、b7、b8、b9、b10、b12、b13、b14、b15、b17、b18、b19、b20、b21、b22、b23）。而所檢測(cè)的轉(zhuǎn)EPSPS基因的23株轉(zhuǎn)化抗性植株中有15株為EPSPS基因陽性（編號(hào)為：E1、E5、E6、E8、E9、E10、E12、E14、E15、E17、E18、E20、E21、E22、E23）。

圖4 轉(zhuǎn)化bar基因（A）及EPSPS基因（B）植株T0代的PCR檢測(cè)

2.4 T1代、宿根1代及宿根2代的轉(zhuǎn)化植株的PCR鑒定

砍取T0代為陽性的植株主莖轉(zhuǎn)移到大田擴(kuò)繁種植，稱為T1代。而T0代在花盆中留下的蔗頭則連續(xù)進(jìn)行兩次宿根培養(yǎng)，稱為宿根1代及宿根2代。通過bar基因及EPSPS基因的特異性引物，對(duì)T1代、宿根1代及宿根2代進(jìn)行PCR檢測(cè)，以檢測(cè)bar基因及EPSPS基因在轉(zhuǎn)基因甘蔗中的遺傳穩(wěn)定性。圖5顯示，T0代檢測(cè)為bar基因PCR陽性的20個(gè)轉(zhuǎn)化植株，在T1代、宿根1代及宿根2代中均能檢測(cè)到bar基因的存在，說明bar基因可以在轉(zhuǎn)基因甘蔗中得到穩(wěn)定的遺傳。圖6則顯示，T0代檢測(cè)為EPSPS基因PCR陽性的15個(gè)轉(zhuǎn)化植株，在T1代、宿根1代及宿根2代中均能檢測(cè)到EPSPS基因的存在，說明EPSPS基因也可在轉(zhuǎn)基因甘蔗中得到穩(wěn)定的遺傳。

圖5 轉(zhuǎn)bar基因甘蔗的遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)

圖6 轉(zhuǎn)EPSPS基因甘蔗的遺傳穩(wěn)定性檢測(cè)

2.5 T0代、宿根1代及宿根2代的耐除草劑特性檢測(cè)

分別對(duì)轉(zhuǎn)bar基因與EPSPS基因的轉(zhuǎn)基因甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代，噴灑田間施用濃度的草銨膦4.5 L/hm2和草甘膦6 L/hm2。轉(zhuǎn)bar基因與EPSPS基因的轉(zhuǎn)基因甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代噴灑除草劑7 d后觀察，并拍照。轉(zhuǎn)bar基因甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代噴灑草銨膦7 d后的結(jié)果（圖7）顯示，每個(gè)花盆的左邊為補(bǔ)充種植的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓?，已?jīng)干枯并逐漸死亡，而右邊為轉(zhuǎn)bar基因植株則不受草銨膦的任何影響繼續(xù)健康生長(zhǎng)。說明轉(zhuǎn)bar基因的甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代都具備穩(wěn)定的耐除草銨膦特性。轉(zhuǎn)EPSPS基因甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代噴灑草甘膦7 d后的結(jié)果（圖8）顯示，每個(gè)花盆的右邊為補(bǔ)充種植的非轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩仓辏呀?jīng)干枯并逐漸死亡，而左邊為轉(zhuǎn)EPSPS基因植株則不受草甘膦的任何影響繼續(xù)健康生長(zhǎng)。說明轉(zhuǎn)EPSPS基因的甘蔗T0代、宿根1代及宿根2代都具備穩(wěn)定的耐除草甘膦特性。

圖7 轉(zhuǎn)bar基因甘蔗噴灑草銨膦

圖8 轉(zhuǎn)EPSPS基因甘蔗噴灑草甘膦

2.6 田間擴(kuò)繁T1代耐除草劑特性檢測(cè)

分別對(duì)轉(zhuǎn)bar基因與EPSPS基因的轉(zhuǎn)基因甘蔗田間擴(kuò)繁T1代，噴灑田間施用濃度的草銨膦4.5 L/hm2和草甘膦6 L/hm2。

田間噴灑草銨膦除草劑10 d后的結(jié)果（圖9）顯示，雜草及非轉(zhuǎn)基因?qū)φ崭收峋蔹S，基本接近死亡，對(duì)草銨膦沒有任何耐受性（圖9-A）；噴灑了草銨膦的轉(zhuǎn)bar基因的甘蔗不受草銨膦的任何影響繼續(xù)健康生長(zhǎng)（圖9-B），說明轉(zhuǎn)bar基因的甘蔗對(duì)草銨膦有極強(qiáng)的耐受性。

圖9 田間噴灑草銨膦除草劑10 d后

田間噴灑草甘膦除草劑10 d后的效果（圖10）顯示，雜草及非轉(zhuǎn)基因?qū)φ崭收峋蔹S，基本接近死亡，對(duì)草甘膦沒有任何耐受性（圖10-A）；噴灑了草甘膦的轉(zhuǎn)EPSPS基因的甘蔗不受草甘膦的任何影響繼續(xù)健康生長(zhǎng)（圖10-B），說明轉(zhuǎn)EPSPS基因的甘蔗對(duì)草甘膦有極強(qiáng)的耐受性。

圖10 田間噴灑草甘膦除草劑10 d后

3 討論

草甘膦和草銨膦從化學(xué)結(jié)構(gòu)上講都屬含磷的氨基酸類除草劑。草甘膦于1974年投入市場(chǎng)，而草銨膦于1986年投入市場(chǎng)。這兩種除草劑都是非選擇性的滅生性除草劑，這是他們的共同之處，但作用機(jī)制卻不同。草甘膦為5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶（EPSP）抑制劑。草甘膦通過阻礙此酶，從而破壞雜草所必須的芳香族氨基酸的合成，諸如色氨酸、酪氨酸、丙氨酸，導(dǎo)致雜草枯死。而草銨膦則為谷氨酰胺合成酶（GS）抑制劑，通過阻礙該酶的合成而滅殺雜草。目前草甘膦是全球銷售市場(chǎng)最高的除草劑，也是全世界銷售額第一的農(nóng)藥品種，2012年，其銷售額達(dá)45.75億美元。可見，草甘膦的銷售與應(yīng)用遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了草銨膦。所以目前抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物的推廣應(yīng)用也最為廣泛。

但隨著草甘膦抗性難除雜草的增多、百草枯禁用日期臨近，草銨膦作為理想的替代選擇成為業(yè)界關(guān)注的熱點(diǎn)品種。在2014年11月的草銨膦應(yīng)用技術(shù)與市場(chǎng)推廣交流會(huì)上，不少業(yè)內(nèi)專家認(rèn)為，除草劑將進(jìn)入草銨膦時(shí)代。草銨膦對(duì)土壤、作物根系和后茬無影響，殺草譜廣、持效期較長(zhǎng)，可以減少用藥次數(shù)，降低成本，性價(jià)比優(yōu)勢(shì)明顯，未來應(yīng)用面積將進(jìn)一步擴(kuò)大。國(guó)內(nèi)百草枯水劑退市后，近4萬t市場(chǎng)空白將被草銨膦等滅生除草劑替代，而草銨膦將成為唯一的快速滅生除草劑，尤其是淺根作物行間除草，增長(zhǎng)空間大。草銨膦生產(chǎn)工藝復(fù)雜，要經(jīng)過13道反應(yīng)工序，歷經(jīng)半個(gè)多月的時(shí)間才能生產(chǎn)出來，國(guó)內(nèi)能生產(chǎn)出這一產(chǎn)品的廠家屈指可數(shù)，產(chǎn)能供應(yīng)不足。同時(shí)，價(jià)格偏高也限制了其在大田作物的應(yīng)用。雖然草銨膦的用藥成本是百草枯的2-3倍，但至少能節(jié)約一次用藥，每公傾可以節(jié)省用工成本300多元錢，目前人工成本貴，而且勞動(dòng)力緊缺。百草枯的退市，使得滅生性除草劑選擇空間變?。滑F(xiàn)在農(nóng)戶對(duì)種植成本有了新的認(rèn)識(shí)，不是簡(jiǎn)單看價(jià)錢，關(guān)鍵看性價(jià)比；隨著草銨膦規(guī)模的不斷擴(kuò)大和科技進(jìn)步，也會(huì)逐漸降低生產(chǎn)成本，這幾大因素讓草銨膦有非常大的發(fā)展?jié)摿?。同時(shí)這也將進(jìn)一步推進(jìn)抗草銨膦轉(zhuǎn)基因作物的研究與應(yīng)用［17］。

4 結(jié)論

利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法分別獲得了抗草甘膦與草銨膦的轉(zhuǎn)基因甘蔗，并對(duì)T0代、宿根1代、宿根2代及田間擴(kuò)繁T1代外源基因遺傳穩(wěn)定性和耐除草劑穩(wěn)定性進(jìn)行較為系統(tǒng)的研究。結(jié)果證明，轉(zhuǎn)bar基因耐草銨膦和轉(zhuǎn)EPSPS基因耐草甘膦的甘蔗轉(zhuǎn)基因植株的外源基因均能穩(wěn)定遺傳，耐除草劑特性強(qiáng)且穩(wěn)定。因此，轉(zhuǎn)bar基因和轉(zhuǎn)EPSPS基因的耐除草劑轉(zhuǎn)基因甘蔗有良好的應(yīng)用前景。

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（責(zé)任編輯 馬鑫）

On Application of Herbicide Resistant Gene bar and EPSPS in Transgenic Sugarcane

WANG Wen-zhi YANG Ben-peng CAI Wen-wei XIONG Guo-ru FENG Cui-lian WANG Jun-gang WU Yuan-li SHEN Lin-bo ZHANG Shu-zhen
（Sugarcane Research Center of CATAS，Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology of CATAS，Key Biotechnology Laboratory for Tropical Crops of Ministry of Agriculture，Haikou 571101）

In this research gene bar and EPSPS were transferred into sugarcane cultivar via agrobacterium-mediated method，and the transgenic sugarcane lines resistant to glufosinate-ammonium and glyphosphate were obtained. Directly spraying two herbicides at application concentration for field onto the field planting the transgenic sugarcane lines demonstrated the genetic stability of exogenous gene in generation T0，T1，ratoon 1，and 2 of them，and the lines had the stable herbicide-resistant ability. Therefore，the transgenic sugarcane lines resistant to herbicide can be widely used in the field production as the other transgenic herbicide-resistant crops such as corn，soybean，rape and cotton.

transgenic sugarcane；herbicide-resistant；gene bar；gene EPSPS；glufosinate-ammonium；glyphosphate

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.03.012

2015-06-01

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31371687），現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系（甘蔗）建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（CARS-20-6-11）

王文治，男，碩士研究生，助理研究員，研究方向：甘蔗基因工程；E-mail：wangwenzhi@itbb.org.cn

張樹珍，女，博士，研究員，研究方向：甘蔗生物技術(shù)；E-mail：zhangshuzhen@itbb.org.cn