地榆黃連灌腸劑提取工藝

曾凡帥,　于智莘,　王　沛

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院, 吉林 長(zhǎng)春　130117)

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地榆黃連灌腸劑提取工藝

曾凡帥,于智莘*,王沛

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院, 吉林 長(zhǎng)春130117)

以鹽酸小檗堿為指標(biāo)，采用紫外分光光度法測(cè)定其含量，選取不同的乙醇濃度、乙醇量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素，采用L9(34)正交試驗(yàn)法優(yōu)選地榆黃連灌腸劑的醇提工藝。最佳工藝為10倍藥材量的70%的乙醇，提取2次, 每次提取1.5 h。

地榆黃連； 灌腸劑； 鹽酸小檗堿

0　引　言

地榆黃連灌腸劑是在院內(nèi)協(xié)定處方地榆黃連湯的基礎(chǔ)上進(jìn)行劑型改良，其組方是由黃連、黃柏、苦參、地榆、五倍子、沒藥等組成。具有清熱解毒涼血的功效[1]。本實(shí)驗(yàn)采用醫(yī)用乙醇對(duì)藥用成分進(jìn)行提取。以鹽酸小檗堿含量為指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法優(yōu)選地榆黃連灌腸劑提取的最佳工藝參數(shù)[2]，目的是為該制劑研究提供質(zhì)量控制依據(jù)。

1　儀器與試藥

1.1儀器

AL204電子天平,梅特勒儀器有限公司；

TU-1810紫外可見分光光度計(jì),北京普析儀器有限公司；

91-B型電子調(diào)溫電熱套,天津市泰斯儀器有限公司。

1.2試藥

黃連、黃柏、地榆、苦參、沒藥、五倍子，吉林省長(zhǎng)春市同仁堂藥房；

鹽酸小檗堿對(duì)照品,中國(guó)藥品生物制品檢定所ID：3UGA-HEKE；

乙醇,北京化工廠。

2　方法與結(jié)果

2.1鹽酸小檗堿含量測(cè)定

2.1.1對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品25 mg，加入適量70%乙醇溶液，水浴加熱溶解25 min，放冷,過(guò)濾，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，制成濃度0.1 mg/mL的鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)溶液[3]，即得。

2.1.2供試品溶液的制備

精密量取地榆黃連灌腸劑1 mL，加入適量70%乙醇溶液，水浴加熱溶解25 min，放冷,過(guò)濾，轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，即得。

2.1.3檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液1 mL置于10 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，以70%乙醇作空白對(duì)照溶液。在300～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外光譜掃描，均在349 nm下測(cè)得最大吸收波長(zhǎng)，故確定349 nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.1.4線性關(guān)系考察

精密量取“2.1.1”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分別置于 10 mL量瓶中，加入70%乙醇至刻度，在349 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度[4]，吸收度分別為0.148、0.287、0.427、0.566、0.707、0.847，得到回歸方程y=69.914x+0.007 6(r=0.999 7)，說(shuō)明鹽酸小檗堿在乙醇中溶解后，濃度在 0.002～0.012 mg/mL范圍內(nèi)，濃度與吸收度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.1.5精密度試驗(yàn)

按“2.1.2”方法制備供試品溶液，取1 mL置于10 mL容量瓶中，加70%乙醇至刻度，在349 nm處測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定5次。吸光度結(jié)果分別為：0.754、0.754、0.753、0.753、0.753。計(jì)算RSD為0.07%，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)儀器精密度較好。

2.1.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1 mL置于10 mL容量瓶中，于室溫放置0、1、2、3、4、5 h后，在349 nm處測(cè)定吸光度，結(jié)果分別為：對(duì)照品0.707、0.707、0.707、0.707、0.706、0.706，計(jì)算RSD為0.07%；供試品0.754、0.754、0.753、0.753、0.752、0.752，計(jì)算RSD為0.12%。結(jié)果表明,對(duì)照品溶液和供試品溶液在5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用L9(34)正交試驗(yàn)法對(duì)黃連、黃柏、苦參、地榆等藥材進(jìn)行醇提取工藝優(yōu)選，選擇乙醇濃度(A)、乙醇量(B)、煎煮時(shí)間(C)、煎煮次數(shù)(D)四個(gè)因素，以鹽酸小檗堿含量為考察指標(biāo)，確定最佳工藝[5-6]，因素水平見表1。

表1　提取工藝因素水平表

2.3正交試驗(yàn)樣品溶液的制備

按處方比例稱取黃連、黃柏、苦參、地榆等藥材9份，按表1條件進(jìn)行回流提取操作[7-8]，提取濾液后，過(guò)濾，濃縮成1∶1(藥液體積mL：生藥質(zhì)量g)的濃縮液[9-10]，按2.1.2操作方法制備，分別取1 mL置于10 mL容量瓶中，即得。

2.4正交試驗(yàn)結(jié)果

測(cè)定正交試驗(yàn)9份樣品中鹽酸小檗堿的含量，并對(duì)其進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表2和表3。

表2　乙醇回流提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果表

表3　方差分析結(jié)果表

P*：F1-0.05(2,2)=19.00

2.5正交試驗(yàn)分析

由表2和表3方差分析結(jié)果表明，各因素對(duì)提取工藝的影響順序?yàn)锳>C>B>D。當(dāng)處于A2B3C3D3條件時(shí)，得率最高，只有A因素對(duì)提取的影響存在顯著性差異，B、C、D因素均無(wú)顯著意義，從節(jié)約能源，節(jié)約成本方面考慮，可適當(dāng)減少煎煮次數(shù)，縮短煎煮時(shí)間，減少乙醇量，結(jié)合方差分析結(jié)果，確定醇提取的最佳條件為：A2B2C2D2，即加10倍藥材量的70%的乙醇，提取2次，每次提取1.5 h。

3　小結(jié)與討論

地榆黃連灌腸劑是在院內(nèi)處方地榆黃連湯的基礎(chǔ)上進(jìn)行劑型改良，鹽酸小檗堿是本方劑的主要藥效成分之一，成分穩(wěn)定，采用本方法提取率高，可以保證灌腸劑的療效。鹽酸小檗堿是灌腸劑發(fā)揮藥效的重要物質(zhì)基礎(chǔ)[11]，因此選擇鹽酸小檗堿為指標(biāo)。

實(shí)驗(yàn)通過(guò)正交設(shè)計(jì)[12-13]優(yōu)選了地榆黃連灌腸劑的提取工藝，以鹽酸小檗堿含量為考察指標(biāo)，因考慮節(jié)約成本因素，確定最佳工藝為：10倍藥材量的70%的乙醇，提取2次,每次提取1.5 h，且接近最高得率。按最佳工藝進(jìn)行重復(fù)性試驗(yàn)，穩(wěn)定性良好，適合于工業(yè)上的生產(chǎn)。

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Sanguisorba coptis enemas extraction

ZENG Fanshuai,YU Zhixin*,WANG Pei

(School of Medicine， Changchun University of Traditional Chinese Medicine, Changchun 130117, China)

The content of berberine enemas is taken as index, which is measured with UV spectrophotometry, and then ethanol concentration, the amount of ethanol, boiling time, boiling times are considered to select the optimal technology of berberine enema alcohol extraction by usingL9(34) orthogonal test. The result shows that the optimal technology is with 70% ethanol of 10 times amount of extracted medication, extraction 2 times for 1.5 hours.

sanguisorba rhizoma coptidis; enemas; berberine hydrochloride.

2016-03-19

吉林省科技廳科技支撐基金資助項(xiàng)目(20120446)

曾凡帥(1991-)，男，漢族，吉林長(zhǎng)春人，長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)碩士研究生，主要從事中藥制藥技術(shù)方向研究,E-mail:1103463098@qq.com. *通訊作者：于智莘(1977-)，女，漢族，吉林長(zhǎng)春人，長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)副教授，主要從事中藥制劑方向研究,E-mail:391791847@qq.com.

10.15923/j.cnki.cn22-1382/t.2016.4.04

R 965

A

1674-1374(2016)04-0328-04