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    97%溴苯腈原藥對赤子愛勝蚓的急性毒性試驗(yàn)研究

    2016-10-11 03:14黎鎮(zhèn)非何海堅鐘長文黃佳喜張宏濤
    綠色科技 2016年14期
    關(guān)鍵詞:赤子蚯蚓人工

    黎鎮(zhèn)非, 何海堅, 鐘長文, 黃佳喜, 張宏濤

    (1.佛山市環(huán)境健康與安全評價研究中心,廣東 佛山 528051;2.佛山英拜檢測科技有限公司,廣東 佛山 528051)

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    97%溴苯腈原藥對赤子愛勝蚓的急性毒性試驗(yàn)研究

    黎鎮(zhèn)非1, 何海堅2, 鐘長文2, 黃佳喜2, 張宏濤1

    (1.佛山市環(huán)境健康與安全評價研究中心,廣東 佛山 528051;2.佛山英拜檢測科技有限公司,廣東 佛山 528051)

    采用人工土壤試驗(yàn)方法,以7 d和14 d為試驗(yàn)周期,進(jìn)行了農(nóng)藥97%溴苯腈原藥對赤子愛勝蚓(Eiseniafoetida)的急性毒性試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果表明:人工土壤試驗(yàn)空白對照組的蚯蚓死亡率為0,滿足質(zhì)量控制要求。采用人工土壤試驗(yàn)7 d和14 d時97%溴苯腈原藥的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為22.5 mg a.i./kg干土和21.8 mg a.i./kg干土,且隨著97%溴苯腈原藥濃度的升高赤子愛勝蚓的死亡率也在逐漸增加,二者呈現(xiàn)出較為明顯的線性關(guān)系。因此,農(nóng)藥97%溴苯腈原藥對土壤生態(tài)環(huán)境具有潛在的生態(tài)風(fēng)險,赤子愛勝蚓的死亡率可作為土壤對農(nóng)藥溴苯腈污染程度的一種生物指標(biāo)。

    溴苯腈;赤子愛勝蚓;急性毒性;研究

    1 引言

    蚯蚓是常見的一種陸生環(huán)節(jié)動物,對土壤中有機(jī)物質(zhì)的分解轉(zhuǎn)化具有重要作用,同時蚯蚓的活動可以改善土壤的結(jié)構(gòu),增強(qiáng)土壤的透氣和排水保水功能。蚯蚓的運(yùn)動和排泄物對改善土壤的質(zhì)量非常有益,可使土壤的透氣性保持良好,使土壤保持健康狀態(tài),對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有重要作用。蚯蚓能疏松土壤,增加土壤有機(jī)質(zhì)并改善其結(jié)構(gòu),還能夠促進(jìn)酸性或堿性土壤轉(zhuǎn)變?yōu)橹行酝寥?,使土壤適宜于農(nóng)作物的生長。

    蚯蚓能夠在一定程度內(nèi)消除環(huán)境污染。在土壤中保持健康的蚯蚓種群對于土壤生態(tài)環(huán)境的保護(hù)具有重要價值。由于蚯蚓能夠吸收土壤中的汞、鉛和鎘等微量金屬,這類金屬元素在蚯蚓體內(nèi)的聚集量遠(yuǎn)超外界含量。赤子愛勝蚯蚓存在于富含有機(jī)質(zhì)的土壤中,對化學(xué)農(nóng)藥的敏感性與真正棲息在土壤中的蚯蚓類似。其生活周期短,繁殖能力強(qiáng),易于在含各種有機(jī)廢物的土壤中飼養(yǎng)。赤子愛勝蚓及其蚓繭容易購得,有利于確保采用同一品系。因此,蚯蚓可作為土壤生態(tài)環(huán)境中重金屬污染的監(jiān)測動物,隨著化學(xué)新物質(zhì)在農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境中的廣泛應(yīng)用,蚯蚓的生態(tài)毒理學(xué)研究得到了較大的發(fā)展,赤子愛勝蚓已經(jīng)成為環(huán)境生態(tài)毒理研究的一個標(biāo)準(zhǔn)指示生物。

    溴苯腈(Bromoxynil),又稱伴地農(nóng),化學(xué)名為3,5-二溴-4-羥基-1-氰基苯。是一種防除闊葉雜草的腈類除草劑,屬于選擇性苗后觸殺型除草劑。微溶于水,可溶于丙酮。對大鼠經(jīng)口急性毒性LD50為190 mg/kg,經(jīng)皮急性毒性LD50為2000 mg/kg,可被葉片吸收,抑制光合作用而使雜草組織壞死。適用于小麥、大麥、黑麥、玉米和高粱等農(nóng)作物田間,防除藜、莧、麥家公等一年生雙子葉雜草。除單用外,還可以和多種除草劑混配,達(dá)到擴(kuò)大除草譜。筆者以97%溴苯腈原藥為受試物,采用人工土壤試驗(yàn)方法考察97%溴苯腈原藥對赤子愛勝蚓的急性毒性試驗(yàn)。

    2 材料與方法

    2.1供試動物

    赤子愛勝蚓(Eiseniafoetida),為《GB/T 31270.15-2014化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗(yàn)準(zhǔn)則 第15部分:蚯蚓急性毒性試驗(yàn)》推薦使用蚓種,購自珠海市洪銘蚯蚓養(yǎng)殖園,由本中心實(shí)驗(yàn)室馴養(yǎng)和繁殖。蚯蚓馴養(yǎng)室環(huán)境條件溫度為21~23 ℃,濕度為70%~90%,試驗(yàn)前,對2~3月齡蚯蚓至少馴養(yǎng)7 d;試驗(yàn)開始前24 h,把蚯蚓放在人工土壤中飼養(yǎng)。期間蚯蚓保持健康良好,大小基本一致,具有生殖環(huán)帶,體重為300~600 mg。

    2.2儀器設(shè)備與材料

    2.2.1試驗(yàn)儀器

    電子天平、人工氣候箱、電子秤、加濕器、移液槍。

    2.2.2試驗(yàn)耗材

    大燒杯(1000 mL)、塑料薄膜、鐵制托盤、培養(yǎng)皿、小燒杯、竹簽。

    2.2.3試驗(yàn)基質(zhì)(人工土壤)

    草炭,高嶺土,石英砂,碳酸鈣。配制人工土壤前,分別取一定量的上述各組分物質(zhì),在105 ℃條件下烘干后稱重(恒重),測定各組分的含水量。然后按相應(yīng)比例配制人工土壤,加入適量去離子水調(diào)節(jié)人工土壤的濕度至土壤干重的30%~35%,充分混合均勻后,備用。在試驗(yàn)開始前,添加一系列的受試物貯備液與上述配制好的人工土壤相混合,配置成不同濃度的試驗(yàn)土壤介質(zhì)。供試用蚯蚓在試驗(yàn)前用去離子水沖洗兩遍至表面干凈。

    2.3試劑

    97%溴苯腈原藥,由浙江禾本科技有限公司提供。

    2.4實(shí)驗(yàn)方法

    2.4.1受試生物的質(zhì)量保證

    馴養(yǎng)后的蚯蚓在進(jìn)行試驗(yàn)前,采用人工土壤試驗(yàn)方法測定氯乙酰胺作為參比物進(jìn)行蚯蚓敏感性檢查,設(shè)置系列濃度為11.3、16.4、23.8、34.5和50.0 mg a.i./kg干土的參比物敏感性試驗(yàn),試驗(yàn)方法同正式試驗(yàn)。結(jié)果顯示,氯乙酰胺對蚯蚓急性毒性14 d-LC50為25.6 mg a.i./kg干土,滿足參比物氯乙酰胺的14 d-LC50值在20~80 mg a.i./kg干土之間,供試蚯蚓的敏感性符合質(zhì)量控制要求。

    2.4.2人工土壤試驗(yàn)

    在進(jìn)行正式試驗(yàn)前,先進(jìn)行較大范圍的系列濃度分別為0.800、4.00、20.0和100 mg a.i./kg干土的預(yù)試驗(yàn),為正式試驗(yàn)設(shè)置受試物系列濃度提供設(shè)計依據(jù)。預(yù)試驗(yàn)每個濃度處理組設(shè)置1個平行,同時設(shè)置1個空白對照組。預(yù)試驗(yàn)周期為14 d,試驗(yàn)溫度為18~22 ℃,濕度70%~90%,光照強(qiáng)度400~800 lx,連續(xù)光照。試驗(yàn)第14 d,將培養(yǎng)容器內(nèi)的試驗(yàn)介質(zhì)輕輕倒入托盤上,取出蚯蚓,用探針刺激蚯蚓尾部,檢查并記錄死亡情況以及觀察到的異常行為或病理癥狀。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果,進(jìn)行系列濃度為13.6、19.7、28.5、41.4和60.0 mg a.i./kg干土的正式試驗(yàn),同時設(shè)置空白對照組,各組均設(shè)置3個平行。具體試驗(yàn)步驟和條件與預(yù)試驗(yàn)相同,試驗(yàn)周期為14 d。于試驗(yàn)第7 d,將培養(yǎng)容器內(nèi)的試驗(yàn)介質(zhì)輕輕倒入托盤上,取出蚯蚓,用竹簽刺激蚯蚓尾部,檢查并記錄死亡情況以及觀察到的異常行為癥狀;于試驗(yàn)第14 d,將培養(yǎng)容器內(nèi)的試驗(yàn)介質(zhì)輕輕倒入托盤上,取出蚯蚓,用竹簽刺激蚯蚓尾部,檢查并記錄死亡情況以及觀察到的異常行為癥狀。在試驗(yàn)前稱量蚯蚓體重一次,在試驗(yàn)結(jié)束后再稱量存活蚯蚓體重一次,同時測定試驗(yàn)期間每天的溫度和相對濕度。

    2.4.3結(jié)果有效性

    試驗(yàn)結(jié)束時,空白對照組的死亡率為0,不超過10%;參比物氯乙酰胺的14 d- LC50值為25.6 mg a.i./kg干土,在20~80 mg a.i./kg干土之間,符合敏感性試驗(yàn)要求。試驗(yàn)期間,實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件正常,試驗(yàn)溫度范圍為20.1~21.7 ℃,試驗(yàn)相對濕度范圍為80.3%~86.6%,光照強(qiáng)度在511~531 lx。綜上所述,本次試驗(yàn)符合質(zhì)量控制要求,試驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果真實(shí)有效。

    2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計

    采用DPS 13.5統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計算7 d及14 d的死亡率、LC50值、95%置信限、回歸方程及相關(guān)系數(shù)r,建立相應(yīng)的劑量-效應(yīng)關(guān)系標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    3 結(jié)果與分析

    97%溴苯腈原藥對赤子愛勝蚓的急性毒性人工土壤試驗(yàn),試驗(yàn)系列濃度組為分別13.6、19.7、28.5、41.4、60.0 mg a.i./kg干土,得到試驗(yàn)相應(yīng)的半數(shù)致死濃度(LC50)、95%置信限、回歸方程及相關(guān)系數(shù)結(jié)果如表1,試驗(yàn)對數(shù)劑量-機(jī)率值線性關(guān)系圖如圖1和圖2所示,隨著97%溴苯腈原藥濃度的升高赤子愛勝蚓的死亡率也在逐漸增加,二者呈現(xiàn)出較為明顯的線性關(guān)系。依據(jù)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗(yàn)準(zhǔn)則》(農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所,2014)中第15部分的蚯蚓急性毒性試驗(yàn)-毒性評價標(biāo)準(zhǔn)(表2),從該試驗(yàn)結(jié)果可以得出結(jié)論:97%溴苯腈原藥對赤子愛勝蚓的急性毒性試驗(yàn)為低毒。

    表1 蚯蚓急性毒性試驗(yàn)-半數(shù)致死濃度、95%置信限、回歸方程及相關(guān)系數(shù)

    表2 蚯蚓急性毒性試驗(yàn)-毒性評價標(biāo)準(zhǔn)

    圖1 97%溴苯腈對赤子愛勝蚓7 d的急性毒性試驗(yàn)劑量-機(jī)率值線性關(guān)系

    圖2 97%溴苯腈對赤子愛勝蚓14 d的急性毒性試驗(yàn)劑量-機(jī)率值線性關(guān)系

    4 結(jié)論

    (1) 人工土壤試驗(yàn)結(jié)束時,空白對照組蚯蚓死亡率為0,不超過10%,滿足試驗(yàn)有效性要求。

    (2) 參比物敏感性試驗(yàn)結(jié)果為LC50(14 d)為25.6 mg a.i./kg干土,滿足參比物氯乙酰胺的14 d-LC50值在20 mg a.i./kg~80 mg a.i./kg之間,供試蚯蚓的敏感性符合質(zhì)量控制要求。

    (3) 采用上述人工土壤試驗(yàn)7 d和14 d時,97%溴苯腈原藥的半數(shù)致死濃度(LC50)分別為22.5 mg a.i./kg(干土)和21.8 mg a.i./kg干土,97%溴苯腈原藥對赤子愛勝蚓的急性毒性均為低毒。

    (4) 隨著97%溴苯腈原藥濃度的升高赤子愛勝蚓的死亡率也在逐漸增加,二者呈現(xiàn)出較為明顯的線性關(guān)系。因此,農(nóng)藥97%溴苯腈原藥對土壤生態(tài)環(huán)境具有潛在的生態(tài)風(fēng)險,赤子愛勝蚓的死亡率可作為土壤對農(nóng)藥溴苯腈污染程度的一種生物指標(biāo)。

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    2016-05-19

    國家發(fā)改委佛山環(huán)境與健康安全評價公共服務(wù)平臺項目;廣東省科技計劃項目(編號:2011B010600001);廣東省科技計劃項目(編號:2013B090800004);廣東省科技計劃項目(編號:2014A040401002)

    黎鎮(zhèn)非(1984—),男,本科,主要從事生態(tài)環(huán)境健康、環(huán)境毒理和環(huán)境行為的檢測工作。

    張宏濤(1978—),男,碩士,工程師,主要從事生態(tài)環(huán)境健康、環(huán)境毒理和環(huán)境行為的檢測工作。

    X174

    A

    1674-9944(2016)14-0045-03

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