肺炎支原體抗體兩種檢測(cè)方法的對(duì)比分析

羅桂香，周玉球，胡利清，吳洪秋，汪國(guó)慶，李　磊

(廣東省珠海市婦幼保健院檢驗(yàn)科　519001)

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·臨床研究·

肺炎支原體抗體兩種檢測(cè)方法的對(duì)比分析

羅桂香，周玉球，胡利清，吳洪秋，汪國(guó)慶，李磊

(廣東省珠海市婦幼保健院檢驗(yàn)科519001)

目的探討被動(dòng)凝集法(PPA)和間接免疫熒光法(IIFA)在肺炎支原體(MP)感染早期診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法對(duì)該院兒科2015年1～12月疑因MP感染的2 517例住院患兒采用PPA和IIFA檢測(cè)血清MP-IgM的結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，比較兩種方法檢測(cè)MP-IgM陽(yáng)性率的差異。結(jié)果PPA和IIFA各檢出MP-IgM陽(yáng)性976例和614例，陽(yáng)性檢出率分別為38.77%和24.39%，PPA陽(yáng)性檢出率明顯高于IIFA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。兩法的陽(yáng)性符合率為80.29%，陰性符合率為74.61%，總符合率為76.00%。同時(shí)采用兩種方法檢測(cè)MP-IgM，陽(yáng)性檢出率可達(dá)到43.58%，敏感性明顯高于任一單一方法。結(jié)論P(yáng)PA檢測(cè)MP-IgM較IIFA敏感，兩者聯(lián)合檢測(cè)可以提高M(jìn)P感染診斷的陽(yáng)性率。

肺炎支原體；肺炎支原體抗體；被動(dòng)凝集法；間接免疫熒光法

肺炎支原體(MP)是小兒呼吸道感染的常見(jiàn)病原體之一，近年來(lái)發(fā)病率逐年增多[1]，嚴(yán)重威脅了兒童健康。MP感染由于肺部體征輕、病情輕重不一、影像學(xué)檢查缺乏特異性等，僅靠臨床診斷較為困難，極易導(dǎo)致誤診、漏診而延誤病情，造成全身多器官、多系統(tǒng)損害，病情嚴(yán)重者甚至死亡[2-3]。因此MP感染的早期診斷對(duì)臨床治療和預(yù)后有重要意義。MP的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法有很多，包括MP培養(yǎng)、血清學(xué)方法和分子生物學(xué)方法等。本文回顧性分析2 517例MP肺炎患兒臨床資料，探討被動(dòng)凝集法(PPA)和間接免疫熒光法(IIFA)檢測(cè)MP抗體在兒童MP感染早期的診斷價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料選擇2015年1～12月在本院兒科住院同時(shí)做PPA和IIFA檢測(cè)的患兒2 517例，其中男1 552例，女965例，年齡1～9歲，中位年齡3歲。

1.2方法MP-IgM PPA和IIFA檢測(cè)試劑盒分別購(gòu)自珠海麗珠試劑公司和鄭州安圖生物工程股份有限公司。采用日本Olympus公司生產(chǎn)的CX22LKDRFS1型熒光顯微鏡用于IIFA熒光觀察。嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。PPA每次測(cè)試均設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照，與待測(cè)標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)。未致敏粒子反映圖像呈陰性結(jié)果，陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果，以血清稀釋度≥1∶40時(shí)出現(xiàn)陽(yáng)性(+)反應(yīng)圖像判定為陽(yáng)性，將顯示出反映圖像為(+)時(shí)的最終稀釋倍數(shù)作為抗體滴度。IIFA每次測(cè)試均設(shè)置陰性、陽(yáng)性對(duì)照，與待測(cè)標(biāo)本同時(shí)檢測(cè)。待檢血清經(jīng)過(guò)IgG吸附劑處理后，加在包被有MP抗原的生物玻片上，熒光顯微鏡下觀察內(nèi)部質(zhì)控孔陰性、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)的預(yù)期結(jié)果，以標(biāo)本中McCoy細(xì)胞中的MP出現(xiàn)蘋(píng)果綠熒光判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理和分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，兩種檢測(cè)方法陽(yáng)性率的比較采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1年齡和季節(jié)的影響患兒MP感染存在年齡和季節(jié)差異。6個(gè)月以內(nèi)的嬰幼兒感染率在6%以下，1～<4歲的患兒感染率在60%以上；11、12、8、10月MP感染陽(yáng)性率較高。各年齡段及各月份的MP-IgM 陽(yáng)性檢出率分布情況見(jiàn)圖1。

2.2檢測(cè)MP-IgM的陽(yáng)性率采用PPA和IIFA從上述患兒血清中檢出MP-IgM陽(yáng)性有976例和614例，陽(yáng)性率分別為38.77%和24.39%，PPA檢測(cè)陽(yáng)性率明顯高于IIFA，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=216.96，P<0.05)。

2.3PPA和IIFA檢測(cè)的一致性兩種方法陽(yáng)性符合率為80.29%(493/614)，陰性符合率為74.61%(1 420/1 903)，總符合率為76.00%。IIFA陽(yáng)性PPA陰性有121例，IIFA陰性PPA陽(yáng)性有483例。同時(shí)采用這兩種方法檢測(cè)MP-IgM，則陽(yáng)性檢出率可達(dá)到43.58%，敏感性明顯高于任一單一方法。見(jiàn)表1。

表1　　PPA與IIFA測(cè)定MP-IgM結(jié)果比較(n)

3　討　　論

人類感染MP 6～7 d后，就產(chǎn)生IgM類抗體，2～4周達(dá)高峰，以后緩慢下降，持續(xù)時(shí)間短。IgG比IgM出現(xiàn)晚，在感染兩周后逐漸升高，持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)[4-5]。一般情況下，血清中IgM抗體陽(yáng)性提示MP早期感染，IgG抗體陽(yáng)性提示既往感染，IgM、IgG及IgA均為陽(yáng)性提示初次感染或現(xiàn)癥感染，且不能排除再次感染的可能。由于各地氣候、環(huán)境不同，MP感染陽(yáng)性率有明顯季節(jié)差異[6]。從調(diào)查結(jié)果可知，珠海地區(qū)冬、秋季患兒的MP-IgM陽(yáng)性檢出率較高。這主要是因?yàn)橹楹Ｇ铩⒍竟?jié)氣候溫和且干燥，適宜于MP的生存和傳播而致MP流行。此外，患兒的年齡也影響MP感染的陽(yáng)性率?！?個(gè)月患兒MP感染率不到6%，1～<4歲患兒MP感染則超過(guò)60%。MP主要經(jīng)飛沫傳播，≤6個(gè)月嬰幼兒MP感染率低與其被動(dòng)免疫和外界接觸較少密切相關(guān)。而1～<4歲幼兒多為學(xué)齡前兒童，自身的免疫系統(tǒng)尚在建立和發(fā)育之中，尚不健全，且相對(duì)于≤6個(gè)月嬰幼兒，活動(dòng)的空間和接觸的人群也會(huì)廣些，因此，容易感染MP。該結(jié)果與文獻(xiàn)[7-8]的嬰兒期MP肺炎陽(yáng)性率低，幼兒期陽(yáng)性率逐漸增高的結(jié)論吻合。

本研究結(jié)果顯示，PPA和IIFA檢測(cè)MP-IgM陽(yáng)性符合率為80.29%，陰性符合率為74.61%，總符合率為76.00%，PPA檢測(cè)MP-MP陽(yáng)性率明顯高于IIFA(P<0.05)。造成這種差異的根本原因是PPA除了檢測(cè)MP-IgM外，還包括了MP-IgG和MP-IgA，因此，靈敏度比IIFA高，但特異度遜色于后者。IIFA和PPA檢測(cè)同為陽(yáng)性，如本文報(bào)道的493例患兒，結(jié)合臨床表現(xiàn)、療效和愈后，提示為MP現(xiàn)癥感染或近期感染。值得注意是，對(duì)于嬰幼兒或免疫功能低下者以及一些早期MP感染患者，產(chǎn)生的MP-IgM少，甚至不產(chǎn)生，PPA檢測(cè)有可能為陰性[9-10]。IIFA雖可在MP急性感染期檢出低水平的MP-IgM，但可能對(duì)MP中后期感染的檢測(cè)無(wú)能為力。因此，對(duì)于這些臨床上高度懷疑為MP感染但PPA和IIFA測(cè)試為陰性的患兒，有待做進(jìn)一步檢查或過(guò)幾天抽血復(fù)查。本研究中尚有部分病例出現(xiàn)兩者結(jié)果不一致的情況，這是由于患兒在MP感染的不同階段或重復(fù)感染或存在自身抗體時(shí)所致。基于以上的研究結(jié)果，臨床上有必要同時(shí)采用PPA和IIFA檢測(cè)MP抗體，能提高實(shí)驗(yàn)診斷MP感染的能力。本研究結(jié)果也證實(shí)了以上觀點(diǎn)。

綜上所述，PPA和IIFA檢測(cè)MP各有優(yōu)劣。PPA不需任何設(shè)備、易于開(kāi)展，特異度和靈敏度基本滿足臨床需求，可作為檢測(cè)MP早期感染的診斷方法。IIFA特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、快速、重復(fù)性好，檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性基本可以確定為MP感染。因此，建議臨床聯(lián)合應(yīng)用PPA和IIFA檢測(cè)，結(jié)合患者情況綜合分析MP抗體陰陽(yáng)性的臨床意義，提高M(jìn)P感染早期診斷的確診率。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.17.043

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