兩種柞蠶微孢子蟲病病原致病力的比較

赫英姿　宋　策　劉孝良　于庭洪　賈　姝　趙　翀　左玲玲

(遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所,遼寧鳳城 118100)

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兩種柞蠶微孢子蟲病病原致病力的比較

赫英姿宋策劉孝良于庭洪賈姝趙翀左玲玲

(遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所,遼寧鳳城 118100)

近年柞蠶微孢子蟲病的發(fā)生有了新的變化，病原種類中寄生率較低的Nosema sp.(一種未命名的小孢子)發(fā)生比例在逐年上升。比較原來的寄生優(yōu)勢種柞蠶微粒子蟲與Nosema sp.對蠶的致病力，結(jié)果表明：Nosema sp.的致病力與柞蠶微粒子蟲相當(dāng)。發(fā)生比例上升的原因多數(shù)是鏡檢遺漏所致。

柞蠶原蟲病病原致病力比較發(fā)生原因

長期以來柞蠶微孢子蟲病一直是影響柞蠶繭、特別是柞蠶種繭生產(chǎn)的重要因素之一，柞蠶微孢子蟲病是柞蠶種繭檢疫中的一個主要指標(biāo)，在遼寧省地方標(biāo)準(zhǔn)《柞蠶良種繁育及檢驗規(guī)則》中嚴(yán)格規(guī)定母種及春季繁育的原種種繭，蛹期檢驗必須無微孢子蟲病發(fā)生[1]。為了控制柞蠶微孢子蟲病對柞蠶生產(chǎn)的危害，自上世紀(jì)20年代中國柞蠶生產(chǎn)開始采用Paster創(chuàng)立的雌蛾顯微鏡檢查技術(shù)，即根據(jù)柞蠶微孢子蟲形態(tài)進(jìn)行鑒定，淘汰患病蛾卵[2]，在此基礎(chǔ)上，又先后補充了蟻蠶檢查法[3]、早期淘汰微孢子蟲病個體[4]、蛾期2次檢查[5]等補正方法，從而確保了柞蠶業(yè)的持續(xù)發(fā)展。

但近年來隨著柞蠶放養(yǎng)量的增加，尤其是繁種規(guī)模的擴(kuò)大，遼寧種繭檢驗結(jié)果表明柞蠶種繭微孢子蟲病發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢，發(fā)生重的年份達(dá)到2%[2]。與此同時，筆者通過生產(chǎn)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，危害柞蠶的微孢子蟲病病原優(yōu)勢種種類也發(fā)生了變化。以往生產(chǎn)中寄生危害柞蠶的優(yōu)勢種為柞蠶微粒子蟲(Nosema pernyi Wen et Ding)[6-7]，在各種柞蠶微孢子蟲病原種類中其發(fā)生比例超過90%，近幾年則下降為50%左右，相反，過去在生產(chǎn)中很少發(fā)生的種類Nosema sp.[7](未命名種)發(fā)生量卻越來越大，其發(fā)生比例已接近50%。過去僅對該孢子的形態(tài)特征和生活史做了初步研究，其對柞蠶的感染力至今沒有研究報道，為此筆者以柞蠶微粒子蟲為對照，試驗比較了這兩種孢子對柞蠶幼蟲的感染力，旨在為進(jìn)一步探討其發(fā)生數(shù)量上升的原因及防控提供依據(jù)和參考。

1　材料與方法

1.1供試材料

柞蠶微粒子蟲(Nosema pernyi Wen et Ding)和Nosema sp.均由患病柞蠶母蛾中分離提取，制成純孢子懸浮液，計數(shù)后貯存于4 ℃冰箱中備用。試驗用柞蠶為本所保存的抗大品種。

1.2試驗方法

將孢子懸浮液配制成1.1×103個/mL和1.1×105個/mL兩種濃度，分別給二齡起蠶噴葉添食接種，每處理3次重復(fù)，每重復(fù)10頭蠶，養(yǎng)蟲瓶單頭飼育，同時設(shè)空白對照。待試蠶取食24 h后除沙換新鮮柞樹葉飼育。

1.3調(diào)查方法

對飼育過程中死亡的試蠶分別用顯微鏡檢測，以判斷是否為柞蠶微孢子蟲感染致死。待不出現(xiàn)死亡現(xiàn)象時對剩余試蠶分別鏡檢，進(jìn)行統(tǒng)計計算。

死亡率(%)=死亡數(shù)/供試蠶數(shù)×100%

感染率(%)=感染數(shù)/供試蠶數(shù)×100%

其中感染數(shù)包括感染死亡數(shù)和感染未死亡數(shù)。

2　結(jié)果與分析

2.1發(fā)病時期

通過噴葉給二齡起蠶添食濃度為1.1×105個/mL的兩種柞蠶微孢子蟲，出現(xiàn)病癥的時期沒有明顯差異，其中柞蠶微粒子蟲處理于四齡第三天開始引起柞蠶發(fā)病，Nosema sp.處理于四齡第五天開始引起發(fā)病，二者均在五齡第六天達(dá)到發(fā)病高峰。添食濃度為1.1×103個/mL的兩種孢子處理，引起柞蠶發(fā)病相對較晚，均于五齡第一天開始發(fā)病，至第六天達(dá)到發(fā)病高峰。

2.2發(fā)病及感染情況的比較

兩種孢子對柞蠶的致死率和感染率的統(tǒng)計結(jié)果見表1。

表1　二齡蠶添食不同孢子的病死率比較

二齡蠶添食1.1×105個/mL的柞蠶微粒子蟲和Nosema sp.對柞蠶的致死能力和感染能力均較強(qiáng)，其中致死率分別為63.33%和53.33%，感染率分別為76.67%和80.00%。經(jīng)獨立性測驗，表明該濃度處理，微孢子蟲對柞蠶致死力和感染力與添食孢子種類無關(guān)。

二齡蠶添食1.1×103個/mL的柞蠶微粒子蟲和Nosema sp.，與高濃度處理相比，感染數(shù)量和死亡數(shù)量均較低，其中致死率分別為23.33%和20.00%，感染率分別為56.67%和60.00%。經(jīng)獨立性測驗，表明低濃度處理，微孢子蟲對柞蠶致死力和感染力與添食孢子種類無關(guān)。

二齡蠶添食1.1×105個/mL和1.1×103個/mL兩種濃度的柞蠶微粒子蟲，經(jīng)獨立性測驗，結(jié)果表明柞蠶微粒子蟲對柞蠶致死力與添食濃度有關(guān)，感染力與添食濃度無關(guān)；二齡蠶添食1.1×105個/mL和1.1×103個/mL兩種濃度的Nosema sp.，經(jīng)獨立性測驗，結(jié)果表明微孢子蟲Nosema sp.對柞蠶的致死力與添食濃度有關(guān)，感染力與添食濃度無關(guān)。

3　討論

試驗表明：二齡蠶添食微粒子蟲和Nosema sp.兩種孢子，均表現(xiàn)為濃度高發(fā)病早、死亡重；濃度低發(fā)病晚，死亡輕。兩者對柞蠶的致死率均與添食濃度有關(guān)，感染率均與添食濃度無關(guān)，且兩種微孢子對柞蠶的致病力和感染力相當(dāng)。柞蠶微粒子蟲大小為4.57 μm (± 0.49 μm)×1.88 μm(± 0.26 μm)，由于過去發(fā)生量大，易于識別，已引起廣泛關(guān)注，而Nosema sp.研究發(fā)現(xiàn)較晚，加之發(fā)生量小，特別是其孢子大小為3.47 μm (± 0.29 μm) ×2.43 μm(± 0.28 μm)，接近于卵圓形，在顯微鏡下不易識別，很容易與脂肪球相混淆，因此，在鏡檢過程中會出現(xiàn)遺漏現(xiàn)象，再加上其具有較強(qiáng)的感染力和致病力，從而導(dǎo)致生產(chǎn)中該種類發(fā)生數(shù)量逐年上升。

為了提高柞蠶種繭繁育質(zhì)量，減少柞蠶微孢子蟲病的發(fā)生，筆者認(rèn)為要對種繭進(jìn)行蛹期的預(yù)知檢查，明確微孢子蟲病發(fā)生種類，以便制種過程中顯微鏡檢查引起注意。必要時要進(jìn)行鏡檢人員的崗前培訓(xùn)，強(qiáng)化對微孢子蟲Nosema sp.的認(rèn)識，避免人為因素導(dǎo)致種卵含微孢子蟲基數(shù)過大。

[1]柞蠶良種繁育及檢測規(guī)則：DB21/T 964-1997[S].[出版者不詳]，1997．

[2]鄧真華，姜義仁，秦利, 等．柞蠶微粒子病研究現(xiàn)狀及展望[J]．中國蠶業(yè)，2010，31(1)：5-8．

[3]馬文石，韓建華，李鳳芹，等．柞蠶卵(蟻蠶)微粒子病檢查方法的研究[J]．北方蠶業(yè), 2002, 23(4):38-39．

[4]秦利．中國柞蠶學(xué)[M]．北京：中國科學(xué)文化出版社，2003．

[5]歷紅達(dá)，李喜升．論柞蠶微粒子病補正檢查[J]．中國蠶業(yè)，2003(5)：47．

[6]遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所．中國柞蠶[M]．沈陽:遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，2003．

[7]李樹英，秦利．柞蠶病理學(xué)[M]．沈陽：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，2015．

[8]姜雯夫，朱秋梅，杜敏．近年柞蠶微粒子病蔓延的原因及其防治措施[J]．北方蠶業(yè)，2007，28(2)：36-37．

[9]孟憲民，孫悅蓮．春蠶種卵微粒子不同含量與秋繭產(chǎn)量的關(guān)系[C].//遼寧省蠶業(yè)科學(xué)研究所．蠶業(yè)研究論文集．沈陽：遼寧科學(xué)技術(shù)出版社，535．

[10]呂鴻聲，錢紀(jì)放編譯，昆蟲病理學(xué)[M]．杭州：浙江科學(xué)技術(shù)出版社，1982，109-127．

[11]廣瀨安春．野外昆蟲微孢子蟲類的交叉感染[J]．蠶絲研究.1979(111)：124-128．

[12]中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)研究所，中國養(yǎng)蠶學(xué)[M]．上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1990，592-597．

Comparison of Microsporidiosis Etiology Virulence for Two Tussah Types

HE Yingzi，SONG Ce，LIU Xiaoliang，YU Tinghong，JIA Shu，ZHAO Chong，ZUO Lingling

(Liaoning Sericulture Institute,Fengcheng Liaoning 118100,China)

Recent years have seen the new changes of Tussah microsporidiose.Nosema sp.(one unnamed microspore) which occurs least is becoming to rise year by year.Therefore, the comparison of virulence between the used-to-be dominant species, tussah corpuscule, and Nosema sp.，was carried out.The results indicate their virulence is fairly equivalent.The reason for the rising trend of Nosema sp.is microscopic examination has missed to spot them.

tussah protozoosis;etiology virulence comparison; occurrence reason

赫英姿(1973-)，女，大學(xué)本科，副研究員，從事柞蠶保護(hù)研究。

* 資助項目：現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(CARS-22)；遼寧省科技廳項目(2012201024-6-1)