生產(chǎn)環(huán)境的致病菌監(jiān)控

生產(chǎn)環(huán)境的致病菌監(jiān)控

講座導(dǎo)師簡介：

張洪沂，碩士，3M中國有限公司食品安全部門資深技術(shù)工程師。2008年畢業(yè)于上海海洋大學(xué)，獲食品科學(xué)碩士學(xué)位，主要從事食品安全檢測方向的研究。她在食品檢測領(lǐng)域工作了8年，并且有研發(fā)、技術(shù)支持和培訓(xùn)等多個職能的工作經(jīng)驗。在食品行業(yè)，她在微生物危害控制，微生物檢測方法，加工設(shè)備與環(huán)境清潔監(jiān)控以及食品質(zhì)量管理方面有廣泛經(jīng)驗。張洪沂一直工作在微生物檢測與ATP熒光檢測技術(shù)應(yīng)用前沿，并借助其深厚的技術(shù)知識背景，為包括乳品、肉制品、海產(chǎn)品、加工食品等各類客戶解決了在生產(chǎn)檢驗中遇到的各種問題。

“對于生產(chǎn)和加工環(huán)境中的采樣是用來確認和預(yù)防食品中出現(xiàn)治病性微生物非常有用的工具”—歐盟《食品微生物標準》（2073/2005/ EC）。在食品生產(chǎn)車間衛(wèi)生環(huán)境方面，國內(nèi)企業(yè)更加注重對指示菌和清潔設(shè)備的監(jiān)控，對于從整體生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控致病菌的措施較少。為了幫助企業(yè)有效從應(yīng)對食品污染前移到預(yù)防污染，實時掌握生產(chǎn)線和衛(wèi)生區(qū)域的動態(tài)信息，并與國際監(jiān)管機構(gòu)推薦的環(huán)境監(jiān)控措施接軌，《食品安全導(dǎo)刊》、食安中國網(wǎng)開辦的“食安大講堂”邀請到了3M中國食品安全部門資深技術(shù)工程師張洪沂老師。課堂上，張洪沂老師以“生產(chǎn)車間的致病菌環(huán)境監(jiān)控”為題，為百余名線上同學(xué)講述了致病菌環(huán)境監(jiān)控的實施方法。

為何要進行環(huán)境微生物監(jiān)測？

講堂中，張洪沂首先介紹了環(huán)境監(jiān)控的重要意義。據(jù)她介紹，微生物污染是食品污染的一種，即食品受到外來的多種微生物作用而引起的污染。由于微生物分布廣泛，工作人員、水、空氣、生產(chǎn)線、原料、產(chǎn)品接觸面、包裝、工器具等都是食品生產(chǎn)車間的污染源?？ǖ胤蛲柺看髮W(xué)的Chris Griffith教授在2008年的一份報告中表示，在生產(chǎn)車間中即食食品和清潔工具上分別檢測出相同基因型的菌株，菌株從生產(chǎn)環(huán)境轉(zhuǎn)移到了食品中。相關(guān)分析表明，在加工環(huán)境中存在的某種微生物有70%的機會進入到食品。

從終產(chǎn)品的檢測轉(zhuǎn)移到環(huán)境監(jiān)控是一種概念的轉(zhuǎn)換。以往人們經(jīng)常強調(diào)以終產(chǎn)品的檢驗來保證產(chǎn)品質(zhì)量，當(dāng)檢測不合格時加大抽樣比率，這種方式無形中增加了實驗室的壓力。另外，業(yè)內(nèi)人士經(jīng)初步統(tǒng)計認為，僅對終產(chǎn)品進行檢測其漏檢概率較大。數(shù)據(jù)顯示，如果某批樣品污染的比例為0.5%，當(dāng)檢測員從這批樣品中抽取3個，產(chǎn)品的漏檢率是99%；即使抽檢量上升到240個，漏檢概率依然高達30%。如果產(chǎn)品不合格率小于1%，那么從眾多產(chǎn)品中抽取到問題產(chǎn)品的概率非常低。

在國際上，對于生產(chǎn)衛(wèi)生環(huán)境監(jiān)控的政策趨勢推動企業(yè)將注意力從應(yīng)對污染轉(zhuǎn)移到預(yù)防污染上。據(jù)張洪沂介紹，以美國為例，2011年頒布的美國食品現(xiàn)代法案（簡稱“FSMA”）第103部分—“強制預(yù)防控制”中涵蓋了5個項目：環(huán)境監(jiān)控、環(huán)境衛(wèi)生和清洗、過敏原控制、減輕危害、供應(yīng)商驗證，其中前3個項目都與環(huán)境控制相關(guān)。在歐洲，歐盟《食品微生物標準》2073/2005明確規(guī)定需要對生產(chǎn)商進行環(huán)境監(jiān)控，以應(yīng)對即食食品的單增李斯特氏菌風(fēng)險與嬰兒配方食品或用于6個月以下特殊醫(yī)學(xué)用途嬰兒配方食品的阪崎腸桿菌風(fēng)險。在中國，大家熟悉的2013年版《食品生產(chǎn)通用衛(wèi)生規(guī)范》中增加了附錄A“食品加工環(huán)境微生物監(jiān)控程序指南”，對指示菌和致病菌的檢測提出了建議，隨之各行業(yè)增加了相應(yīng)的生產(chǎn)規(guī)范。越來越多的國家，越來越多的企業(yè)，都逐漸重視到生產(chǎn)環(huán)境微生物的監(jiān)控。

微生物的環(huán)境監(jiān)控主要分為3個部分，指示菌監(jiān)控、致病菌監(jiān)控和快速衛(wèi)生監(jiān)控，不同的監(jiān)控項目有著不同的監(jiān)控意義。致病菌的監(jiān)控方面，主要是為了快速尋找并消滅李斯特菌、沙門氏菌等致病菌。區(qū)別于指示菌監(jiān)控保證食品衛(wèi)生的意義，監(jiān)控致病菌更強調(diào)預(yù)防食物中毒現(xiàn)象發(fā)生。對此，ICMSF（國際食品微生物標準委員會）認為：“不能阻止致病菌污染生產(chǎn)設(shè)備，監(jiān)控的目的是減少致病菌的存在”。對于致病菌的環(huán)境監(jiān)控本身不能阻止致病菌污染設(shè)備或產(chǎn)品，其最大的目的是減少致病菌的存在，降低產(chǎn)品受到微生物或者受到致病菌污染的風(fēng)險，強調(diào)從風(fēng)險控制的角度來管理生產(chǎn)環(huán)境。

對于致病菌的監(jiān)控主要是為了快速尋找并消滅李斯特菌、沙門氏菌等致病菌。區(qū)別于指示菌監(jiān)控保證食品衛(wèi)生的意義，監(jiān)控致病菌更強調(diào)預(yù)防食物中毒現(xiàn)象發(fā)生。

致病菌環(huán)境監(jiān)控的實施方法

監(jiān)控生產(chǎn)環(huán)境的致病菌首先要選擇出監(jiān)測項目。面對繁多的致病菌種類，監(jiān)測項目應(yīng)怎樣選擇呢？對此，張洪沂提出了兩點建議。第一，可以參考對終產(chǎn)品的致病菌檢測項目，以此確定環(huán)境監(jiān)控的檢測項目。第二，根據(jù)科學(xué)證據(jù)或歷史數(shù)據(jù)選擇檢測項目，比如冷飲中的李斯特菌、巧克力制品中的沙門氏菌等。

低水分活度食品原料易受沙門氏菌的污染，如巧克力、堅果及制品、乳品成分及混合物、干制肉制品及副產(chǎn)品，滅菌后包裝前的任何產(chǎn)品都有可能引起微生物污染。以沙門氏菌為例，張洪沂為現(xiàn)場聽眾講述了致病菌環(huán)境監(jiān)測的實施方案。方案包括5個步驟。首先，確定生產(chǎn)車間是否需要進行致病菌監(jiān)控（是否是微生物敏感產(chǎn)品）。其次，設(shè)計文件化要求和指導(dǎo)書，包括：確定監(jiān)控的目標菌，監(jiān)控涉及的產(chǎn)品或加工過程，確定取樣點、頻率和取樣方法，測試方法和可接受的標準，糾偏行動計劃，培訓(xùn)。再次，決定樣品在哪里測試。然后，測試方法是否正確。最后，建立相應(yīng)的糾偏措施，保留記錄。

區(qū)域劃分及采樣點是課程中的重要概念。張洪沂介紹，不同于平時“潔凈區(qū)”和“非潔凈區(qū)”，本次介紹的車間分區(qū)原則是根據(jù)某個位點或區(qū)域可能對成品造成污染的相對程度來劃分。國際上通常將生產(chǎn)車間分為4區(qū)，稱為區(qū)域1（Zone 1）、區(qū)域2（Zone 2）、區(qū)域3（Zone 3）、區(qū)域4（Zone 4）。區(qū)域1是直接接觸終產(chǎn)品的地方，例如員工手、傳送帶/鏟斗、切片機、卸物槽、填充器等。區(qū)域2是臨近產(chǎn)品（終產(chǎn)品區(qū)域）的非產(chǎn)品接觸表面，例如設(shè)備外表、制冷設(shè)備、框架、設(shè)備護蓋（儀表板的按鈕、操作按鈕）、圍裙、拖布把手、手套、稱重控制數(shù)據(jù)輸入等。區(qū)域3是在距離產(chǎn)品接觸表面較遠的加工廠房（原料加工區(qū)）里的非產(chǎn)品，例如手推車、有輪的設(shè)備、叉車、墻、地溝、地板等。區(qū)域4是在加工廠房外距離產(chǎn)品接觸表面較遠的區(qū)域，例如廊、浴室的門、自助餐廳、冷卻器等。

在檢測中，通常使用的采樣工具是生理鹽水濕潤過的棉簽，但是致病菌不同于指示菌，存在量較小，小面積難以采集。所以為確保致病菌的順利采集，在進行環(huán)境致病菌監(jiān)控時應(yīng)采用海綿，并達到10×10cm的涂抹面積。針對致病菌的采集，3M專門研發(fā)了在外形上有帶手柄、帶手套區(qū)別的兩款纖維素材質(zhì)涂抹海綿。3MTM海綿涂抹類產(chǎn)品配有預(yù)置中和緩沖液，其精心設(shè)計的紅色垂條可方便開袋且防止污染，藍色無菌手套和開封條使之更易識別，雙層聚乙烯碾壓無菌袋增加雙倍強度，伽馬輻照滅菌，無滅菌劑殘留。由于工廠內(nèi)使用的消毒劑對目標菌的采集與生長會產(chǎn)生影響，故需用中和緩沖液來中和殘留的消毒劑，便于加大環(huán)境樣品的檢出率。不同中和緩沖液對于消毒劑的中和效果不一樣，例如letheen肉湯對于含季銨鹽，碘、氯化合物，酚化合物的消毒液有很好的中和效果。D/E肉湯對于消毒劑普遍含有的化合物都有很好的中和效果。

3M 海綿采樣棒的不同中和液

3　M 海綿采樣棒的不同中和液

對于采樣程序張洪沂介紹，環(huán)境采樣有兩種檢測方法。第一是直接檢測目標菌，比如在車間直接檢測沙門氏菌。第二是檢測潛在致病菌的指示菌，比如在李斯特菌屬中單增李斯特能夠引起人類疾病，而其它李斯特菌不引起人類疾病，對于整個李斯特菌屬的控制能夠加強對單增李斯特致病菌的控制。需要強調(diào)的是，菌落總數(shù)主要作為加工環(huán)境的衛(wèi)生指標菌，不能作為致病菌的安全指示，兩者沒有直接關(guān)系。由于環(huán)境監(jiān)控需要盡可能快速出結(jié)果，建議廠商進行快速檢測。采樣操作人員應(yīng)是經(jīng)過適當(dāng)培訓(xùn)、有資質(zhì)的人員。采樣面積越大越好，至少達到900cm2，若存在消毒劑則需考慮中和緩沖液（e.g.D/E中和緩沖液）。另外，在區(qū)域1中，若采樣工具已預(yù)潤濕，則采樣完后需用含酒精的消毒劑處理，將海綿或采樣棒用無菌手套取出后再放回到采樣袋或容器中并作標記方便區(qū)分。

以沙門氏菌為例，沙門氏菌的主要檢測區(qū)域為2、3、4，對區(qū)域2、3的采樣頻率大于區(qū)域4，通常為10～15個樣品/周，而區(qū)域4為5～10個樣品/月，并取決于區(qū)域的面積。區(qū)域2、3、4的采樣可不中斷生產(chǎn)，應(yīng)貫穿整個生產(chǎn)周期（如生產(chǎn)剛開始時、生產(chǎn)開始3～4小時后、生產(chǎn)結(jié)束前）。由于生產(chǎn)環(huán)境良好的車間很難在區(qū)域1檢出沙門氏菌，所以對于區(qū)域1的致病菌檢測只有在特殊情況下才會進行，比如成品檢測出了沙門、生產(chǎn)工藝改動、天花板漏水等。當(dāng)進行區(qū)域1檢測時，需要嚴格對產(chǎn)品實行扣留并獨立于其他區(qū)域，直到檢測結(jié)果表明沒有問題時才能放行。

環(huán)境采樣的位點與數(shù)量取決于該產(chǎn)品與工藝的風(fēng)險水平。檢測頻率比較高的位點包括：使用水的區(qū)域、人流物流繁忙的區(qū)域、曾經(jīng)檢出過致病菌的區(qū)域、處理與儲存易受到微生物污染的原料的區(qū)域。應(yīng)關(guān)注滅菌后包裝前的產(chǎn)品區(qū)域，該區(qū)域產(chǎn)品再污染的風(fēng)險較高，并根據(jù)具體某天或某生產(chǎn)批次進行位點的輪換。

糾偏措施

一旦在某一個點檢測出陽性結(jié)果，需要以“矢量涂抹采樣法”在污染點的上下左右前后6個方向采集10～15個樣品，以尋找污染軌跡、確認是否有擴散跡象。如果未檢出陽性結(jié)果，對污染區(qū)域內(nèi)進行消毒處理即可；如果在擴散點檢出陽性結(jié)果，則需以新污染點為基礎(chǔ)繼續(xù)“矢量涂抹采樣法”檢測。消毒后的污染點需再次檢測，3次檢測結(jié)果內(nèi)連續(xù)呈陰性為止。糾偏措施的主要目的是及時消除致病菌，這對于檢測時間要求較高，建議選擇快速檢測。3MTM24小時解決方案針對13項微生物檢測項目提供專業(yè)測試片及設(shè)備。對于大部分致病菌檢測項目可直接將檢測樣品夾在測試片上，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)即可。

矢量法涂抹采樣的示意圖

3MTM24小時解決方案

課程的最后張洪沂介紹，在執(zhí)行常規(guī)致病菌采樣計劃前，工廠應(yīng)當(dāng)提前制定好糾偏方案。糾偏方案包括：確定各區(qū)域及時糾偏措施的類型；確認沙門氏菌已在區(qū)域內(nèi)被消除的行動措施；污染根源分析，以防止將來的污染。具體措施包括：重新檢查人流物流方式，積極改造；檢查操作程序（產(chǎn)品、衛(wèi)生、維護和原料操作）；根據(jù)需要重新設(shè)計和/或進行設(shè)備維護；開展擦洗地面或清洗頂部管道設(shè)備的清潔工作。一般情況下，在區(qū)域4偶爾發(fā)現(xiàn)沙門陽性屬正常情況，如在2、3區(qū)域發(fā)現(xiàn)陽性情況則表明清洗和衛(wèi)生程序需要加強。