艾納香提取前不同處理方法對(duì)左旋龍腦含量的影響△

王中洋，楊全，龐玉新，張影波，孫懂華

(1.廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，海南 儋州 571737；3.海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南 儋州 571737)

艾納香提取前不同處理方法對(duì)左旋龍腦含量的影響△

王中洋1，2，3，楊全1*，龐玉新2，3*，張影波2，3，孫懂華1，2，3

(1.廣東藥學(xué)院 中藥學(xué)院，廣東 廣州 510006；2.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院 熱帶作物品種資源研究所/農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，海南 儋州 571737；3.海南省艾納香工程技術(shù)研究中心，海南 儋州 571737)

目的：研究艾納香提取前不同處理方法對(duì)艾納香中左旋龍腦含量的影響，確定合理有效的提取前處理方法。方法：以左旋龍腦為對(duì)照品，以水楊酸甲酯為內(nèi)標(biāo)物，采用氣相色譜法檢測不同蔭干時(shí)間、不同烘干溫度及優(yōu)化潤濕處理方法的艾納香中左旋龍腦含量的變化。結(jié)果：常溫情況下左旋龍腦含量隨著干燥時(shí)間的增加而減少，新鮮樣品左旋龍腦含量以干重計(jì)為9.151 9 mg·g-1，常溫情況下左旋龍腦含量隨著干燥時(shí)間的增加而減少，24 h內(nèi)減少最快；烘培溫度越高左旋龍腦損失越多，烘焙溫度超過50 ℃后損失加快，當(dāng)烘焙溫度為30 ℃時(shí)含量以干重計(jì)為6.097 8 mg·g-1；料液比為1∶2、潤濕時(shí)間為20 min時(shí)樣品左旋龍腦含量最高，以干重計(jì)為4.798 3 mg·g-1。結(jié)論：艾納香鮮品左旋龍腦含量高；干燥溫度越低時(shí)間越短左旋龍腦損失越少；料液比為1∶2、潤濕時(shí)間為20 min時(shí)左旋龍腦含量最高。

艾納香；前處理；左旋龍腦；氣相色譜

艾納香為菊科艾納香屬植物艾納香Blumeabalsamifera(L.)DC.的新鮮或干燥地上部分，又名大風(fēng)艾、冰片艾、大風(fēng)葉、牛耳艾、娜龍(黎藥名)，主產(chǎn)于貴州、廣西、海南、廣東、云南和臺(tái)灣等省[1]。其中以貴州分布最為廣泛，是該地區(qū)的道地藥材之一。艾納香是獲取艾片(主要有效成分為左旋龍腦)的重要原料植物[2]。艾片為艾納香經(jīng)水蒸氣蒸餾升華純化所得結(jié)晶。艾納香的提取加工主要是農(nóng)戶式小生產(chǎn)，即便較大的生產(chǎn)廠家對(duì)艾納香提取前處理也沒有明確的研究[3]。實(shí)際生產(chǎn)中艾納香加工前處理方法主要包括新鮮樣品直接加工、蔭干后直接提取和蔭干樣品潤濕后再提取，但這幾種處理方法的優(yōu)劣及每種方法的最佳條件沒有明確的研究。因此本研究對(duì)每種處理方法進(jìn)行優(yōu)化后，比較各種處理方法對(duì)艾納香中左旋龍腦含量影響的差異，以期對(duì)艾納香提取加工前處理方法提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

7890A型GC儀(氫火焰離子化檢測器、G4513A型16位自動(dòng)進(jìn)樣器，美國Agilent公司)；KQ-500DB型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；CPA225D型十萬分之一電子分析天平(德國Sartorius公司)。

1.2 試劑

左旋龍腦對(duì)照品(阿法埃莎化學(xué)有限公司，批號(hào)：10147015，純度≥98%)；水楊酸甲酯(天津光復(fù)精細(xì)化工研究所，純度≥99.5%)；乙酸乙酯(色譜純，美國Fisher Scientific公司)；其余試劑均為分析純。

1.3 樣品

艾納香藥材于2015年5月采摘自農(nóng)業(yè)部儋州熱帶藥用植物資源種質(zhì)圃，經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院龐玉新副研究員鑒定為菊科植物艾納香B.balsamifera(L.)DC.。

2 方法

2.1 材料處理

對(duì)于新采集的艾納香葉采取蔭干、烘箱烘干、蔭干后潤濕樣品等不同處理方法處理備用。

2.2 GC法檢測左旋龍腦

2.2.1 色譜條件 參考文獻(xiàn)[4-5]的方法檢測左旋龍腦色譜條件，HP-5石英毛細(xì)管色譜柱(30 mm×0.32 mm，0.25 μm)；以80 ℃為起始溫度，保持2 min，然后以5 ℃·min-1升溫至100 ℃，再以20 ℃·min-1升溫至200 ℃；進(jìn)樣口溫度為220 ℃；氫火焰離子檢測器(FID)檢測器溫度為240 ℃；進(jìn)樣量0.6 μL；分流比為9∶1。左旋龍腦對(duì)照品和艾納香供試品色譜圖見圖1。

注：1.左旋龍腦；2.水楊酸甲酯；A.水楊酸甲酯+對(duì)照品；B.供試品。圖1 左旋龍腦對(duì)照品和艾納香供試品色譜圖

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取左旋龍腦對(duì)照品適量，加乙酸乙酯溶解，置100 mL量瓶中，定容，搖勻，即得質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為1.000 mg·g-1的對(duì)照品溶液。

2.2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯適量，加乙酸乙酯溶解，置100 mL量瓶中，定容，搖勻，即得質(zhì)量分?jǐn)?shù)約為1.000 mg·g-1的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備 參考文獻(xiàn)[6]的方法，分別稱取新鮮葉片約3 g，將其剪切為直徑1 mm的小段，置50 mL具塞錐形瓶中，精密移取乙酸乙酯25 mL，用封口膜封口，稱質(zhì)量，超聲處理(功率：500 W，頻率：40 kHz)40 min，靜置。再次精密稱定，用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失的質(zhì)量，過濾，搖勻后精密吸取2.0 mL，置10 mL量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 mL，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.5 線性關(guān)系考察 分別精密移取對(duì)照品溶液0.125、0.250、0.500、1.000、2.000 mL，置10 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，再加乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，即得混合對(duì)照品溶液。精密吸取混合對(duì)照品溶液0.6 μL，按2.2.1色譜條件進(jìn)樣測定。以對(duì)照品中左旋龍腦的質(zhì)量濃度(X，mg·mL-1)為橫坐標(biāo)，對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積積分比值(Y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程?？疾炀€性關(guān)系是否符合要求。

3 結(jié)果與分析

3.1 左旋龍腦檢測標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)2.2項(xiàng)下檢測方法，對(duì)左旋龍腦對(duì)照品及提取液進(jìn)行檢測，色譜圖見圖1。按2.2.1色譜條件測定峰面積積分值，以左旋龍腦質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)，對(duì)照品左旋龍腦與內(nèi)標(biāo)物水楊酸甲酯的峰面積比為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程：Y=15.407X-0.033 3，r=0.999 5，線性范圍為0.012 82～0.205 10 mg·mL-1。

3.2 不同處理方法對(duì)左旋龍腦含量的影響

3.2.1 蔭干時(shí)間對(duì)左旋龍腦含量的影響 樣品采集后蔭干處理，分別在第0、3、6、12、24、48、72、144、192 h按照2.2方法檢測艾納香葉片中左旋龍腦含量。結(jié)果見圖2。艾納香葉中左旋龍腦含量隨蔭干時(shí)間的增加而減少，且24 h內(nèi)減少最快，144～192 h差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 干燥時(shí)間對(duì)左旋龍腦含量影響

3.2.2 烘干溫度對(duì)艾納香中左旋龍腦含量的影響 將新鮮的樣品，分別在30、50、60、70、80、100 ℃下烘干，分別烘3 h，每個(gè)處理重復(fù)3次，采用2.2項(xiàng)下方法檢測艾納香葉中左旋龍腦含量。結(jié)果見圖3。艾納香葉中左旋龍腦含量隨干燥溫度的升高而減少，當(dāng)溫度高于50 ℃時(shí)含量減少加快。因此在樣品干燥時(shí)應(yīng)控制干燥溫度在50 ℃以下。

圖3 烘干溫度對(duì)左旋龍腦含量影響

3.2.3 蔭干后潤濕樣品對(duì)左旋龍腦含量的影響 潤濕加水量對(duì)左旋龍腦含量的影響：取蔭干7 d的樣品3.00 g，分別按照料液比1∶1、1∶3、1∶5、1∶7、1∶10加入蒸餾水，潤濕20 min，每個(gè)處理重復(fù)3次，按2.2項(xiàng)下方法檢測左旋龍腦含量。結(jié)果見圖4。結(jié)果顯示，加水量在1∶5時(shí)含量最高，但總體相差不大。

圖4 潤濕加水量對(duì)左旋龍腦含量的影響

潤濕時(shí)間對(duì)左旋龍腦含量的影響：取蔭干7 d的樣品3.00 g，按照1∶5的料液比加入蒸餾水，分別在第10、20、30、60、120 min取樣，每個(gè)處理重復(fù)3次，按2.2項(xiàng)下方法檢測左旋龍腦含量。結(jié)果見圖5，20 min后艾納香葉中左旋龍腦含量變化不大。

圖5 潤濕時(shí)間對(duì)左旋龍腦含量的影響

潤濕方法對(duì)左旋龍腦含量的影響：取蔭干7 d的樣品3.00 g，考察加水比例1∶3、1∶5、1∶7和潤濕時(shí)間10、20、30 min 交互優(yōu)化，每個(gè)處理重復(fù)3次，按2.2項(xiàng)下方法檢測左旋龍腦含量。結(jié)果見表1，潤濕加水量為1∶5，潤濕時(shí)間為20 min時(shí)含量最高，比含量最低的處理組高出13.2%。

潤濕方法驗(yàn)證：根據(jù)上述結(jié)果，取蔭干7 d的樣品3.00 g，取5份樣品按照1∶5料液比加水潤濕20 min，按2.2項(xiàng)下方法檢測左旋龍腦含量。結(jié)果見表2，樣品平均質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4.798 3 mg·g-1，RSD值為1.9<2.0。因此，此法潤濕樣品與交互優(yōu)化結(jié)果一致。

表1 潤濕方法交互實(shí)驗(yàn)對(duì)左旋龍腦含量的影響

注：表中不同小寫字母代表組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 優(yōu)化方法驗(yàn)證結(jié)果分析

4 討論

龐玉新等[6]研究表明，艾納香蔭干前后左旋龍腦含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，蔭干后艾納香葉片中左旋龍腦含量較新鮮葉片下降33.64%。本實(shí)驗(yàn)對(duì)艾納香的干燥溫度和時(shí)間及提取前潤濕處理方法進(jìn)行考察及優(yōu)化。結(jié)果顯示，艾納香葉中左旋龍腦含量隨蔭干時(shí)間的增加而減少，24 h內(nèi)下降最快，144 h后基本穩(wěn)定，艾納香樣品采收加工以鮮品最好，因此如不能及時(shí)加工則盡量在24 h內(nèi)加工；艾納香葉片中左旋龍腦含量隨干燥溫度的升高而降低，且當(dāng)溫度超過50 ℃后左旋龍腦損失加快，故烘干溫度越低越好。烘干效果雖較蔭干效果略好，但成本較高，因此如需干燥則可以考慮常溫蔭干。

在生產(chǎn)中會(huì)出現(xiàn)采集樣品不能及時(shí)提取加工的現(xiàn)象，由蔭干后潤濕加工方法進(jìn)行優(yōu)化的結(jié)果可知，樣品加水量1∶5，潤濕時(shí)間20 min時(shí)左旋龍腦含量最高，比最低含量高15%，但較干燥7 d的樣品左旋龍腦含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而不同提取前處理方法對(duì)艾粉得率的影響仍需進(jìn)一步研究。

[1] 官玲亮，龐玉新，王丹，等.中國民族特色藥材艾納香研究進(jìn)展[J].植物遺傳資源學(xué)報(bào)，2012，13(4)：695-698.

[2] 黃衛(wèi)東，呂武清.冰片的研究進(jìn)展[J].中國藥業(yè)，2008，17(4)：64-66.

[3] 江興龍，潘俊鋒，等.貴州艾納香產(chǎn)地采收提取艾粉技術(shù)研究[J].生物質(zhì)化學(xué)工程，2006，40(1)：17-20.

[4] 龐玉新，黃梅，等.黔瓊產(chǎn)艾納香中主要化學(xué)成分含量差異分析[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2014，30(4)：448-452.

[5] 于福來，黃梅，等.栽培艾納香單株左旋龍腦和總黃酮含量變異分析[J].中國現(xiàn)代中藥，2014，16(8)：640-644.

[6] 龐玉新，胡雄飛，等.艾納香葉片干燥前后的左旋龍腦含量比較[J].中國藥房，2014，25(39)：3673-3675.

EffectofDifferentPretreatmentofBlumeabalsamiferaonContentofl-borneol

WANG Zhongyang1，2，3，YANGQuan1*，PANGYuxin2，3*，ZHANGYingbo2，3，SUNDonghua2，3

(1.SchoolofTraditionalChinese，GuangDongPharmaceuticalUniversity，Guangzhou510006，China；2.TropicalcropsGeneticResourcesInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofCropGeneResourcesandGermplasmEnhancementinSouthernChina，Danzhou，Hainan571737，China；3.HainanProvincialEngineeringResearchCenterforBlumeabalsamifera，Danzhou，Hainan571737，China)

Objective：Study on the influence of different processing methods on the content of(l-borneol)inBlumeabalsamifera(L.)DC，to determine reasonable and effective extraction pretreatment methods.Methods：Thel-borneol as the standard，to Methylis salicylas as internal standard，using GC to detect the shadow of different time，different temperature drying of wet processing method and optimization einar centre-left spin borneol content changes.Results:L-borneol content in normal temperature decreases with the increase of drying time，F(xiàn)resh samplesl-borneol content on a dry weight for 9.151 9 mg·g-1，normal temperaturel-borneol content with the increase of drying time and reduce，24 h in the fastest decline; Baking temperature higherl-borneol loss more，baking temperature more than 50 ℃ loss accelerated，when the baking temperature is 30 ℃content on a dry weight for 6.097 8 mg·g-1; Solid-liquid ratio of 1∶2，wetting time of 20 minl-borneol content in the highest dry weight 4.798 3 mg·g-1.Conclusion:Blumeabalsamiferafresh goodsl-borneol content high;Drying temperature，the lower the shorter the timel-borneol loss less; The ratio of material to liquid 1∶2，the wetting time of 20 min with the highest content ofl-borneol.

Blumeabalsamifera；pretreatment；l-borneol；GC

2015-09-16)

科技部科研院所技術(shù)開發(fā)研究專項(xiàng)(2013EG1343239)；貴州重大課題專項(xiàng)計(jì)劃(黔科合重大專項(xiàng)字[2013]6011號(hào))

*

楊全，教授，研究方向：中藥資源；Email：yangquan7208@vip.163.com 龐玉新，副研究員，研究方向：南藥資源研究與開發(fā)；Tel：(0898)23300268，Email：blumeachina@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.3.022