金銀花中有機磷類農藥測定方法建立及殘留狀況調查△

顧炎，薛健，金紅宇，馬雙成

(1.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京 100193；2.中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

金銀花中有機磷類農藥測定方法建立及殘留狀況調查△

顧炎1，薛健1，金紅宇2，馬雙成2

(1.中國醫(yī)學科學院 北京協(xié)和醫(yī)學院 藥用植物研究所，北京100193；2.中國食品藥品檢定研究院，北京100050)

目的：了解金銀花中有機磷農藥的殘留狀況，并在此基礎上提出具有針對性的監(jiān)管建議。方法：建立了GC-FPD同時測定54種有機磷類農藥的方法，并對60個批次的金銀花樣品進行測定，對測定結果進行分析。結果：60個批次的樣品共有23個檢出含有有機磷類農藥；方法涉及的54種有機磷類農藥，共檢出敵敵畏、馬拉硫磷、毒死蜱和水胺硫磷4種。檢出率最高的為毒死蜱(38.3%)，其余的3種農藥均只有個別樣品有檢出。毒死蜱的檢出濃度也相對較高。結論：金銀花中多數有機磷類農藥的總體檢出率不高，但毒死蜱檢出率較高，且檢出濃度也相對較大，需要重點監(jiān)控。

金銀花；有機磷農藥；中藥材；殘留狀況；GC-FPD

有機磷農藥是一類高毒殺蟲劑，目前該類農藥中毒已成為嚴重的健康問題之一，每年導致的死亡人數約20萬[1]。但是由于其具有廉價、高效以及低生物累積性等優(yōu)點，仍有不少種類被廣泛應用[2]。為保障安全，該類農藥的使用規(guī)范和殘留控制顯得尤為重要。

金銀花種植過程中蟲害嚴重，有機磷類殺蟲劑的使用較為普遍，近年來金銀花農藥殘留測定的報道中也時有該類農藥檢出[3-5]。但是，目前大部分報道中涉及的樣品量都比較少，對金銀花中有機磷類農藥的殘留狀況很難有全面的認識。為進一步了解金銀花中有機磷農藥的殘留狀況，本研究建立了測定金銀花中54種有機磷農藥的方法，對金銀花中有機磷類農藥殘留狀況進行了調查分析，并在此基礎上提出具有針對性的監(jiān)管建議。

1 儀器與材料

1.1儀器

6890型氣相色譜分析儀(配備火焰光度檢測器)(美國Agilent公司)、HP-5(30m×0.32mm，0.25μm)色譜柱(美國Agilent公司)、自動進樣器G4513A(美國Agilent公司)、PL203/01型電子天平(瑞士梅特勒公司)、WH-1型渦旋混合儀(上海滬西分析儀器廠)、LABOROTA4000/4型旋轉蒸發(fā)器(德國海道夫公司)、Feb-80型離心沉淀器(金壇市醫(yī)療儀器廠)、SGK-5LB型低噪音空氣泵(北京東方精華苑科技有限公司)。

1.2試劑

分析純乙腈、甲苯(北京化工廠)；色譜純丙酮(FisherScientific)；甲胺磷、敵敵畏、敵百蟲、速滅磷、蟲螨畏、滅線磷、治暝磷、甲拌磷、甲基乙拌磷、巴胺磷、特丁硫磷、內吸磷、殺螟腈、地蟲硫磷、甲基對氧磷、氯唑磷、乙嘧硫磷、除線磷、甲基毒死蜱、甲基對硫磷、甲基立枯磷、對氧磷、皮蠅磷、殺螟松、馬拉硫磷、倍硫磷、毒死蜱、對硫磷、水胺硫磷、溴硫磷、嘧啶磷、異柳磷、稻豐散、喹硫磷、殺撲磷、乙基溴硫磷、殺蟲畏、苯線磷、碘硫磷、丙溴磷、蟲螨磷、.豐索磷、乙硫磷、三唑磷、三硫磷、敵瘟磷、噠嗪硫磷、亞胺硫磷、苯硫磷、伏殺磷 、谷硫磷、硫丙磷、乙基谷硫磷、蠅毒磷標準品(100μg·mL-1，農業(yè)部環(huán)保所)；石墨化碳/氨基固相萃取柱[500mg，500mg·(6mL)-1，SUPELCO]。

1.3樣品

金銀花樣品信息及對應序號如表1所示。

表1 金銀花樣品信息

注：“/”表示產地不確定。

2 方法

2.1標準品溶液配制

取54種農藥濃度為100μg·mL-1標準品各0.5mL，置于50mL容量瓶中，加丙酮定容至刻度，搖勻，即得質量濃度為1000ng·mL-1的混合標準儲備溶液。精密量取混合標準儲備液適量，用空白提取液定量稀釋至所需濃度，搖勻，即得工作農藥基質添加標準品溶液。

2.2樣品制備

樣品粉碎，過三號篩。準確稱定1.0g金銀花樣品于10mL具塞試管中，加入乙腈5mL，渦旋提取5min，3500r·min-1離心15min，取出上清液于梨形瓶中，再用乙腈5mL提取一次，合并提取液，減壓濃縮至約1mL。

固定好石墨化碳/氨基固相萃取柱，用5mL乙腈-甲苯(3∶1)溶液預淋洗，當液面到達柱面頂部時，將上述濃縮液加入柱中，用1mL左右乙腈洗滌3次，洗滌液加入固相萃取柱。用20mL乙腈-甲苯(3∶1)溶液洗脫，梨形瓶收集淋洗液，減壓濃縮至近干，取出到刻度試管中，加丙酮定容至1mL，進入GC-FPD進行分析。

2.3儀器條件

色譜柱：HP-5(30m×0.32mm，0.25μm)，DB-1701(30m×0.32mm，0.25μm)輔助定性；進樣口溫度：250℃，不分流進樣。檢測器溫度：250℃，氫氣流量：75mL·min-1，空氣流量：60mL·min-1；載氣為氮氣，恒定壓力：6.71psi，進樣量1μL。升溫程序：初始溫度100℃，以5℃·min-1升到190℃，以2℃·min-1升到200℃，以10℃·min-1升到250℃，保持14min。該條件下分離效果最好，1μg·mL-1對照品氣相HP-5及DB-1701柱色譜圖如圖1所示。

2.4方法學考察

2.4.1線性關系 取1000ng·mL-154種有機磷類農藥混合標準品儲備液，分別配制出50、100、200、500、1000ng·mL-1的基質添加標準溶液，進行GC-FPD的測定。進樣后繪制標準曲線，以峰面積為縱坐標，試樣濃度(ng·mL-1)為橫坐標，進行回歸計算。

2.4.2精密度和靈敏度 取200ng·mL-1基質添加標準溶液重復進樣6次，測得各農藥的RSD值。根據各農藥的信噪比，以信噪比(S/N)為3測得54種農藥檢出限(LOD)；以信噪比(S/N)為10測得方法的定量限。

2.4.3加樣回收試驗 準確稱取金銀花樣品1.0g，分別添加0.1、0.4、1mL質量濃度為500ng·mL-1的農藥對照品溶液，揮干溶劑，制成50、200、500ng·g-13個添加水平樣品(每個水平3個平行)，按照2.2、2.3中的步驟進行測定。樣品本底色譜圖如圖1所示，加樣回收結果如表2所示。

2.5樣品測定

按照2.2、2.3中的步驟，對60份樣品進行測定。并對陽性結果進行GC-MS確認。

注：A.對照品 HP-5色譜圖；B.對照品DB-1701色譜圖；C.樣品本底圖；1.甲胺磷 2.敵敵畏 3.敵百蟲 4.速滅磷 5.蟲螨畏 6.滅線磷 7.治暝磷 8.甲拌磷 9.甲基乙拌磷 10.巴胺磷 11.特丁硫磷 12.內吸磷 13.殺螟腈 14.地蟲硫磷15.甲基對氧磷16.氯唑磷17.乙嘧硫磷18.除線磷19.甲基毒死蜱 20.甲基對硫磷21.甲基立枯磷22.對氧磷 23.皮蠅磷24.殺螟松25.馬拉硫磷26.倍硫磷27.毒死蜱 28.對硫磷29水胺硫磷30.溴硫磷31.嘧啶磷32.異柳磷33.稻豐散 34.喹硫磷35.殺撲磷36.乙基溴硫磷37.殺蟲畏38苯線磷39.碘硫磷40.丙溴磷41.蟲螨磷42.豐索磷43.乙硫磷44.三唑磷45.三硫磷46.敵瘟磷47.噠嗪硫磷48.亞胺硫磷49.苯硫磷50.伏殺磷 51.谷硫磷52.硫丙磷53.乙基谷硫磷54.蠅毒磷。圖1 1 μg·mL-1 54種有機磷類農藥對照品HP-5/DB-1701色譜圖與樣品本底色譜圖

農藥名稱50ng·g-1200ng·g-1500ng·g-1回收率RSD回收率RSD回收率RSD甲胺磷78.36.789.92.878.33.8敵敵畏67.34.071.20.762.93.8敵百蟲92.65.988.57.089.72.1速滅磷69.37.292.12.689.23.3蟲螨畏96.73.189.52.891.62.1滅線磷97.26.892.22.890.93.1治暝磷98.110.891.03.792.41.5甲拌磷95.48.285.55.789.51.3甲基乙拌磷86.99.770.29.981.51.7巴胺磷+特丁硫磷97.511.590.64.591.41.7內吸磷+殺螟腈97.711.891.23.493.01.4地蟲硫磷93.412.291.53.592.21.7甲基對氧磷93.09.992.65.790.53.3氯唑磷93.512.593.04.293.71.6乙嘧硫磷98.28.292.15.491.40.8除線磷103.513.990.23.392.41.5甲基毒死蜱+甲基對硫磷96.611.292.34.992.91.6甲基立枯磷97.48.293.64.793.22.5對氧磷+皮蠅磷100.29.092.64.792.52.0殺螟松96.11.694.02.792.71.7馬拉硫磷98.86.996.33.892.51.4倍硫磷89.49.087.27.291.81.1毒死蜱+對硫磷99.412.793.93.991.81.5水胺硫磷98.711.091.73.193.11.9溴硫磷91.89.492.12.393.02.1嘧啶磷97.713.092.82.592.41.7異柳磷100.28.391.95.690.71.8稻豐散+喹硫磷98.313.191.83.592.31.9殺撲磷94.410.890.63.292.91.5乙基溴硫磷94.67.091.92.991.42.0殺蟲畏107.26.794.83.890.42.4苯線磷89.910.087.59.089.24.2碘硫磷102.714.390.24.989.51.6丙溴磷92.86.691.87.189.30.5蟲螨磷98.714.495.03.694.11.9豐索磷96.910.791.04.893.01.4乙硫磷96.59.490.03.592.81.5三唑磷99.08.790.83.895.91.7三硫磷90.814.090.93.397.51.9敵瘟磷93.19.689.30.392.83.4噠嗪硫磷101.410.588.71.392.33.2亞胺硫磷93.47.088.66.491.50.3苯硫磷91.210.489.72.891.71.6伏殺磷+谷硫磷100.49.989.52.592.51.5硫丙磷107.38.6103.02.193.04.1乙基谷硫磷86.47.779.97.593.22.1蠅毒磷97.14.8101.62.492.01.4

3 結果與討論

3.1測定方法的適用性

本研究建立的測定方法選擇乙腈作為提取溶劑，主要是考慮到乙腈對有機磷類農藥溶解性良好[6]，且對色素等成分溶出少，可以減小凈化的難度。提取方式選擇渦旋提取離心分離，不僅耗費的溶劑量少，且縮短了前處理時間，降低了花費的同時，也提高了測定效率。為了簡化測定，樣品凈化則采用操作簡便、且適用性廣的固相萃取法，考慮到有機磷極性以及金銀花色素含量較高的特點，選擇了石墨化碳-氨基固相萃取柱[7-8]。

本方法涉及的多數農藥種類在50～500ng·mL-1線性良好，定量限小于50ng·mL-1，精密度(以RSD計)均小于5%。50、200、500ng·g-13個添加水平的平均回收率分別為94.8%、90.6%、90.9%，RSD均小于15%，且整個方法操作便捷、耗時較短，適用于金銀花中有機磷類農藥的殘留測定，符合本研究對測定方法的需求。

3.2金銀花有機磷農藥殘留狀況

河南和山東不僅是金銀花的道地產區(qū)，也是金銀花的主產地，根據中藥材天地網給出的數據，2015年這兩個地區(qū)金銀花產量占到全國總產量一半以上[9]，從市場上購買的金銀花產地也主要集中在這兩個地區(qū)。

60個批次的樣品共有23個檢出含有有機磷類農藥，其中1個批次樣品同時檢出3種，3個檢出2種，其余均只檢出1種。方法涉及的54種有機磷類農藥，共檢出敵敵畏、馬拉硫磷、毒死蜱和水胺硫磷4種，檢出的最大值分別為0.353、0.383、0.504、0.031μg·g-1。檢出率最高的為毒死蜱(38.3%)，其余的3種農藥均只有個別樣品有檢出。被檢出的4種有機磷農藥，馬拉硫磷為低毒，毒死蜱和敵敵畏為中毒，而水胺硫磷為高毒[10]。其中毒性最高的水胺硫磷僅有1個樣品有檢出，且檢出濃度較低。而檢出率高的毒死蜱，其檢出濃度也相對較高。

3.3金銀花有機磷農藥監(jiān)管建議

根據農業(yè)部1586號和2032號公告，水胺硫磷和毒死蜱分別在柑橘和蔬菜上禁止使用，但在中藥材上的使用均未有明確的限制。與之相對的，這4種農藥都未在金銀花上進行登記，也沒有在金銀花上的安全使用研究報道。樣品中有檢出的種類，很大可能是在金銀花的實際生產過程中有使用的。為確保使用安全，有必要對這4種有機磷類農藥在金銀花上的殘留動態(tài)等進行研究，并在研究基礎上給出安全使用建議。

此外，目前國內尚未有這幾種農藥在中藥材上的最大殘留限量的規(guī)定，而沒有明確限量規(guī)定對實際監(jiān)控是極大的阻礙。因此，農藥在中藥材上的最大殘留限量標準的制定十分迫切。對金銀花而言，尤其是檢出率和檢出濃度都比較高的毒死蜱，更是標準制定工作中需要優(yōu)先考慮的。

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[9] 李凌. 金銀花2015年產量數據[EB/OL].中藥材天地網(2015-08-20).http://www.zyctd.com/zixun/205/220808.html

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MethodofDeterminationforOrganophosphorusPesticidesandResiduesInvestigateinHoneysuckle

GUYan1，XUEJian1*，JINHongyu2，MAShuangcheng2

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；2.NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing100050，China)

Objective：To give some targeted suggestions for supervision and management on the basis of residual dynamics of organophosphorus pesticides in Honeysuckle.Methods：A method of determination for54organophosphorus pesticides in Honeysuckle by GC-FPD was established and60samples collected were tested.Results：23of samples had detectable residues and a total of4pesticides were identified which were dichlorvos，malathion，chlorpyrifos and isocarbophos.Chlorpyrifos had the highest detectable rate (38.8%)，while the other three ones were rarely detected.Besides，the concentration of chlorpyrifos was also relatively higher than that of the others.Conclusion：The detectable rates of organophosphorus pesticides in Honeysuckle were low generally，but both the detectable rate and concentration of chlorpyrifos were comparatively high.Therefore，more attention should be payed to chlorpyrifos in the supervisory process.

Honeysuckle；organophosphorus；traditional Chinese medicine；residual dynamics；GC-FPD

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.014

2016-02-29)

“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(2014ZX09304307-002)

*

薛健，研究員，研究方向：中藥有效成分分析及農藥殘留重金屬研究；Tel：(010)57833097，E-mail：xuejian200@sina.com