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    重金屬Hg2+對毛蚶的急性毒性及肝臟組織結構的影響

    2016-09-23 12:27張艷紅郭旭東崔健斌劉麗東
    河北漁業(yè) 2016年8期
    關鍵詞:急性毒性重金屬肝臟

    張艷紅+郭旭東+崔健斌+劉麗東

    摘 要:在水溫(12±0.5)℃、鹽度27‰的環(huán)境下,研究了重金屬Hg2+對毛蚶的急性毒性效應和肝臟組織結構的影響。結果表明,Hg2+對毛蚶24、48、96 h LC50分別為9.23、5.43和2.07 mg/L;安全濃度分別為0.09、0.05和 0.02 mg/L。通過對Hg2+暴露在不同濃度96 h的毛蚶肝臟組織切片觀察發(fā)現(xiàn),Hg2+對毛蚶的肝臟組織結構有明顯影響,肝臟的損傷程度隨著Hg2+濃度的增加而加深,2.91 mg/L為毛蚶肝臟解毒的閾值。

    關鍵詞:重金屬;毛蚶;急性毒性;肝臟

    毛蚶(Scapharca subcrenata)屬軟體動物門,雙殼綱,列齒目,蚶科,是我國沿海地區(qū)一種重要的經(jīng)濟貝類,通常生活在含泥沙較多的潮間帶,在我國南北沿海均有分布,因其肉質鮮美,營養(yǎng)價值高,深受國內外消費者的歡迎。近幾年,我國沿海地區(qū)的經(jīng)濟發(fā)展速度較快,隨之而來的是大量工業(yè)廢水和生活污水排入海洋,給海洋生態(tài)環(huán)境帶來極大的負擔,在諸多污染物中,重金屬對海洋環(huán)境的影響尤為顯著[1]。重金屬隨沿岸徑流排入海中后,容易在沿海的底泥中沉積,而毛蚶為生活在泥沙中的底棲生物,又具有移動性差的特點,因而最易受到重金屬的影響;重金屬污染物可以在海洋生物體內或其某一組織中積累,通過生物富集和放大,直接或間接威脅人類的健康[2]。在利用生物間的共生互補原理、運用生態(tài)學原理創(chuàng)建環(huán)境友好型養(yǎng)殖模式中,底棲貝類是一個重要的混養(yǎng)組合,通過貝類消耗掉其它養(yǎng)殖動物所排出的N,可以優(yōu)化養(yǎng)殖環(huán)境,同時增加養(yǎng)殖效益,例如海蜇、牙鲆和毛蚶的池塘立體生態(tài)混養(yǎng)。國內外已進行過許多有關重金屬對魚類及底棲貝類的急性毒性研究,但有關重金屬Hg2+對毛蚶的急性毒性效應和肝臟組織結構的影響尚未見報道。筆者研究了Hg2+對毛蚶成貝的急性毒性效應,得出了24、48和96 h半致死濃度和安全質量濃度;同時研究了暴露Hg2+不同濃度96 h的情況下,對毛蚶肝臟組織結構的影響。本實驗可為毛蚶安全養(yǎng)殖和重金屬生態(tài)毒理學研究提供基礎性數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料

    實驗對象為成體毛蚶,產(chǎn)地河北省黃驊市。毛蚶進入實驗室后,暫養(yǎng)5 d,期間定期投喂單細胞藻類,連續(xù)充氣,每日換水一次,換水量100%,暫養(yǎng)水溫在(12±0.5)℃。暫養(yǎng)期間貝類日死亡率低于5%后進行實驗,實驗前1 d停止投餌,選擇健康、反應靈敏、個體均勻的毛蚶隨機分組進行實驗,實驗貝類殼長2.96~3.77 cm,殼高2.39~2.82 cm,濕體質量8.62~14.27 g。

    HgCl2為貴州省銅仁化工研究所生產(chǎn),含量99.5%,用雙蒸水分別配制成含有Hg2+質量濃度為10 g/L母液,實驗時根據(jù)不同濃度進行稀釋。試驗用水為人工配制海水,使用海水晶(天津市塘沽區(qū)海生海水晶廠出品)+雙蒸水配制而來,鹽度27‰,pH值8.30。

    1.2 實驗方法

    1.2.1 急性毒性預實驗 使用15 L水槽,加入4 L配制海水和適量藥物母液,混勻后,放入10只毛蚶,保持實驗水溫在(12±0.5)℃,自然光照,實驗期間不換水,不充氣,不投餌。每個預實驗濃度做一組平行試驗,同時設一個對照組,取實驗數(shù)據(jù)平均值。24 h、48 h和96 h后觀察死亡情況,以多次刺激無反應、雙殼張開、外套膜萎縮為判斷其死亡的標準進行計數(shù)。通過預實驗查明重金屬離子不引起死亡的最大濃度(ILL)和最小100%致死濃度(LC100)。

    1.2.2 急性毒性實驗 經(jīng)預實驗,Hg2+對毛蚶不引起死亡的ILL為0.53 mg/L,LC100為15.93 mg/L。在此Hg2+實驗濃度范圍內,按照等比級數(shù)設定9個濃度組,每組設3個平行,1個對照,每個水槽內隨機放入10只毛蚶,實驗條件與預實驗條件保持一致,24 h、48 h和96 h后觀察死亡情況并及時清除死亡個體。實驗重復一次,最終數(shù)據(jù)取平均值。

    改進寇氏法計算LC50及95%可信限。安全濃度為LC50×AF,其中AF為應用系數(shù),對于穩(wěn)定且又易于在生物體內積累的污染物,其系數(shù)多選在0.01~0.05范圍內。本實驗中重金屬離子屬于難分解、積累性強的物質,AF值取0.01。

    1.2.3 肝臟組織切片的制備與觀察 取暴露不同濃度Hg2+ 96 h的活體毛蚶,解剖,取肝臟組織,用Bouin氏液固定、經(jīng)自來水沖洗、梯度酒精脫水、透明、透蠟和石蠟包埋等步驟;后進行切片,切片厚度5 μm;采用蘇木精-伊紅染色法( H. E)染色,BK5000顯微鏡觀察并拍照。

    2 結果與分析

    2.1 結果

    2.1.1 中毒癥狀 不同實驗濃度下毛蚶的中毒反應有所不同。實驗開始24 h內,低濃度組的毛蚶大部分都伸出了斧足和水管,而高濃度組中的毛蚶雙殼緊閉,其中高于10.42 mg/L濃度組的部分個體黏液分泌明顯,最高濃度組的個體在24 h全部死亡;24~48 h內,0.81 mg/L濃度組中的毛蚶有少數(shù)伸出斧足,0.53 mg/L濃度組的個體則幾乎全部伸出斧足,高濃度組則雙殼緊閉,刺激無反應,水中漂浮大量粘絲,拿起毛蚶,可見大量粘液掛在殼面上;48~96 h內,受試毛蚶的中毒現(xiàn)象越來越嚴重,出現(xiàn)外套膜脫落現(xiàn)象,高濃度組的死亡率接近100%,但0.53 mg/L濃度組的個體則仍有部分個體伸出斧足,但相比對照組中的毛蚶所伸出的斧足相對要小??傮w上,Hg2+濃度越高,毛蚶所排黏液就越多。中毒死亡的個體少部分雙殼張開,大部分雙殼緊閉,但幾乎均是外套膜、水管脫落。

    2.1.2 急性毒性實驗結果 Hg2+對毛蚶的急性毒性實驗具體結果見表1,Hg2+對毛蚶的半致死濃度、安全濃度及95%可信限見表2。

    2.1.3 Hg2+對毛蚶肝臟組織結構的影響 當Hg2+0.53 mg/L暴露96 h時,肝臟組織只有輕微損傷,表現(xiàn)為胃粘膜層的柱狀細胞有增生現(xiàn)象但不明顯,肝小管有空泡化現(xiàn)象;Hg2+0.81 mg/L暴露96 h,毛蚶的胃粘膜層的柱狀細胞有輕微增生現(xiàn)象,肝小管有空泡化現(xiàn)象;Hg2+1.24 mg/L暴露96 h,毛蚶的胃粘膜層的柱狀細胞有輕微增生現(xiàn)象,肝小管上皮細胞腫脹、細胞界限模糊,有空泡化現(xiàn)象;Hg2+1.90 mg/L暴露96 h,毛蚶的胃粘膜層的柱狀細胞有輕微增生現(xiàn)象,肝小管上皮細胞腫脹,同時部分肝小管有壞死現(xiàn)象;Hg2+2.91 mg/L暴露96 h,毛蚶的肝小管上皮細胞略微腫脹,同時部分肝小管有廣泛壞死現(xiàn)象;Hg2+4.45 mg/L暴露96 h,毛蚶的肝小管上皮細胞界限模糊,出現(xiàn)了廣泛壞死現(xiàn)象,血細胞浸潤;Hg2+6.81 mg/L暴露96 h,毛蚶的胃變化并不明顯,肝小管上皮細胞界限模糊,細胞明顯萎縮,廣泛壞死,出現(xiàn)了大面積空白區(qū)。

    2.2 分析

    2.2.1 重金屬Hg2+對毛蚶的急性毒性效應及毒性機理 本實驗在水溫(12±0.5)℃、鹽度27‰的環(huán)境下,研究了重金屬Hg2+對毛蚶的急性毒性效應。結果表明,Hg2+對毛蚶24、48、96 h LC50分別為9.23、5.43和2.07 mg/L;安全濃度分別為0.09、0.05和 0.02 mg/L。閻波等[3]研究了Cd2+對毛蚶的急性毒性,96 h LC50為6.20 mg/L,他們所用毛蚶的個體略小于本次實驗,另外報道中沒有標明實驗水溫,但在室內實驗,應該實驗水溫高于(12±0.5)℃;因此,這與重金屬毒性的眾多研究報道趨勢(Hg2+>Cd2+)是一致的。王曉宇等[4]研究了Hg2+對四角蛤蜊的急性毒性,96 h LC50為0.207 mg/L,遠低于本次實驗值,但他們的實驗水溫為(15±2)℃,而本實驗水溫為(12±0.5)℃,而多數(shù)重金屬的毒性與水溫呈正相關;隋國斌等[5]研究了Hg2+對皺紋盤鮑的急性毒性,96 h LC50為0.123 mg/L,也遠低于本次實驗值,但其實驗水溫為(15±1)℃,另外,實驗所用皺紋盤鮑的體質量只有本實驗所用毛蚶的5%左右。

    實驗開始后,低濃度組的毛蚶除最初受到人為刺激緊閉雙殼外,2 h后大部分個體都伸出了斧足和水管;而高濃度組中的毛蚶則始終雙殼緊閉,說明其受到Hg2+刺激后以閉殼的方式進行避毒。目前,汞對水生生物的毒害機理還未真正研究清楚,汞的毒理研究較多地集中在對水生生物(主要是魚類和貝類)的致死濃度和體內汞積累量等方面。但汞可誘導活性氧自由基的形成并改變細胞的抗氧化能力,對水生生物構成脅迫作用,使多種酶類及活性因子失去活性,從而破壞生物體的酶系統(tǒng),阻斷其各種生化反應和新陳代謝活動,導致生物體死亡。

    2.2.2 Hg2+對毛蚶肝臟組織結構的影響 雙殼貝類分布廣、遷移性差、能高度富集水中污染物,因而是生物監(jiān)測和毒理學最常被研究的群體之一。肝臟是毛蚶的主要解毒和代謝功能器官,是重金屬Hg2+進入其體內的主要富集部位,當Hg2+進入體內后會誘導活性氧自由基的形成并改變細胞的抗氧化能力,一旦超過肝臟的解毒能力,就會對肝臟的組織結構產(chǎn)生不同程度的影響,其組織病理學評價可用于鑒定Hg2+的污染程度。

    本研究發(fā)現(xiàn),Hg2+對毛蚶肝臟組織結構的影響有明顯的濃度依賴性,Hg2+濃度越高,對肝臟的損傷就越明顯。當暴露Hg2+0.53 mg/L時,肝臟組織只有輕微損傷,表現(xiàn)為胃粘膜層的柱狀細胞有增生現(xiàn)象,但不明顯;肝小管有空泡化現(xiàn)象;但暴露Hg2+2.91 mg/L時,肝臟組織損傷明顯,表現(xiàn)為肝小管上皮細胞腫脹,同時部分肝小管有廣泛壞死;而暴露Hg2+4.45 mg/L時,肝小管上皮細胞界限模糊,出現(xiàn)了廣泛壞死和血細胞浸潤現(xiàn)象;暴露Hg2+6.81 mg/L時,肝臟組織大范圍壞死后已經(jīng)完全失去消化腺的結構,只有部分肝小管留有輪廓,此時毛蚶的肝臟已完全失去其生理功能。高于6.81 mg/L濃度組的毛蚶在96 h前已全部死亡,因此沒有取樣切片。從實驗結果可以看出,Hg2+2.91 mg/L濃度暴露96 h時達到了毛蚶肝臟解毒的閾值,高于此濃度會導致肝臟逐漸失去其代謝、解毒生理功能。

    參考文獻:

    [1]陳靜生,鄧寶山,陶澎,等.環(huán)境地球化學[M].北京:海洋出版社,1990:196-235

    [2] 柳學周,徐永江,蘭功剛.幾種重金屬離子對半滑舌鰨胚胎發(fā)育和仔稚魚的毒性效應[J].海洋水產(chǎn)研究,2006,27(2):33-42

    [3] 閻波,李英,高楠,等. Cd2+對毛蚶的毒性效應及對其SOD活性和TAOC的影響[J].天津科技大學學報,2015,30(5):48-52

    [4] 王曉宇,王清,楊紅生.鎘和汞兩種重金屬離子對四角蛤蜊的急性毒性[J].海洋科學,2009,33(12):24-29

    [5] 隋國斌,楊鳳,孫丕海,等. 鉛、鎘、汞對皺紋盤鮑幼鮑的急性毒性試驗[J].大連水產(chǎn)學院學報,1999,14(1):22-26

    (收稿日期:2016-04-21)

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