子宮內(nèi)膜癌分子標(biāo)志物與臨床病理的關(guān)系研究

徐小仙，蘇　影，朱小平，閆鼎鼎，樓寒梅

(1.浙江省腫瘤醫(yī)院婦科，浙江 杭州 310022；2.浙江省腫瘤醫(yī)院病理科，浙江 杭州 310022；3.衢州市人民醫(yī)院放療科，浙江 衢州 324000)

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子宮內(nèi)膜癌分子標(biāo)志物與臨床病理的關(guān)系研究

徐小仙1，蘇影2，朱小平3，閆鼎鼎1，樓寒梅1

(1.浙江省腫瘤醫(yī)院婦科，浙江 杭州 310022；2.浙江省腫瘤醫(yī)院病理科，浙江 杭州 310022；3.衢州市人民醫(yī)院放療科，浙江 衢州 324000)

目的探索子宮內(nèi)膜癌患者雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)、表皮生長(zhǎng)因子受體2(CerbB-2)、增殖細(xì)胞核抗原(Ki-67)的表達(dá)以及其與臨床和病理的關(guān)系。方法選擇2013年8月至2014年8月于浙江省腫瘤醫(yī)院行手術(shù)治療的72例子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象，應(yīng)用免疫組化法測(cè)定不同病理分期、分化程度以及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移等ER、PR、CerbB-2、Ki-67各項(xiàng)表達(dá)情況。結(jié)果手術(shù)-病理分期Ⅲ期～Ⅳ期者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于Ⅰ期和Ⅱ期，而Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于I期，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為6.73、5.35、6.92、6.02、7.23、7.83、6.85、7.03，均P<0.05)。組織學(xué)分化G3級(jí)者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于G1級(jí)和G2級(jí)者，而G2、G3級(jí)者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于G1級(jí)者，且G3級(jí)者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于G2級(jí)者，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為7.53、6.68、7.90、7.24、9.22、12.64、6.82、7.53，均P<0.05)。肌層浸潤(rùn)深度>1/2者ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率均顯著低于肌層浸潤(rùn)深度≤1/2者和無(wú)肌層浸潤(rùn)者，而肌層浸潤(rùn)深度>1/2者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率顯著高于肌層浸潤(rùn)深度≤1/2者和無(wú)肌層浸潤(rùn)者，且肌層浸潤(rùn)≤1/2者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率顯著高于無(wú)肌層浸潤(rùn)者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為7.74、7.63、7.54、7.16、5.86、7.02、6.06、7.44，均P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為7.74、7.63，均P<0.05)，而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率比較無(wú)顯著差異(χ2值分別為1.22、2.05，均P>0.05)。結(jié)論ER、PR、CerbB-2、Ki-67表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床和病理有密切相關(guān)性，聯(lián)合應(yīng)用可作為判斷疾病預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療的依據(jù)。

子宮內(nèi)膜癌；雌激素受體；孕激素受體；表皮生長(zhǎng)因子受體2；增殖細(xì)胞核抗原；免疫組織化學(xué)

(1.DepartmentofGynecology,ZhejiangCancerHospital,ZhejiangHangzhou310022,China;2.DepartmentofPathology,ZhejiangCancerHospital,ZhejiangHangzhou310022,China;3.DepartmentofRadiotherapy,QuzhouPeople’sHospital,ZhejiangQuzhou324000,China)

[Keywords]endometrialcarcinoma;estrogenreceptor(ER);progesteronereceptor(PR);epidermalgrowthfactorreceptor2 (CerbB-2);proliferatingcellnuclearantigen(Ki-67);immunohistochemistry

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)三大惡性腫瘤之一，對(duì)女性健康威脅極大，隨著近些年生活水平的提高和生活壓力的增大，女性子宮內(nèi)膜癌的患病率在世界范圍內(nèi)均呈上升趨勢(shì)，且患者多趨向于年輕化[1-2]。臨床研究證實(shí)，子宮內(nèi)膜癌是一種激素依賴性腫瘤，其發(fā)病與雌、孕激素的表達(dá)有密切相關(guān)性[3]。本研究采用免疫組化法檢測(cè)雌激素受體(estrogenreceptor，ER)、孕激素受體(progesteronereceptor，PR)、表皮生長(zhǎng)因子受體2(epidermalgrowthfactorreceptor2，CerbB-2)、增殖細(xì)胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，Ki-67)的表達(dá)，并分析其與臨床和病理的關(guān)系，以為臨床治療和預(yù)后評(píng)估提供參考。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象

選擇2013年8月至2014年8月于浙江省腫瘤醫(yī)院行手術(shù)治療的72例子宮內(nèi)膜癌患者為研究對(duì)象，采用診斷性刮宮或手術(shù)病理證實(shí)為內(nèi)膜樣腺癌，且術(shù)前均未進(jìn)行放化療或內(nèi)分泌治療?；颊吣挲g為40～76歲，平均(63.04±3.93)歲，其中包括絕經(jīng)者28例，絕經(jīng)年限均在1～23年，平均(10.23±1.19)年。孕次0～4次，平均(2.50±0.20)次，產(chǎn)次0～4次，平均(1.88±0.19)次。參照2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(InternationalUnionofObstetricsandGynecology，F(xiàn)IGO)推薦使用的子宮內(nèi)膜癌患者手術(shù)-病理分期標(biāo)準(zhǔn)，即I期48例，Ⅱ期15例，Ⅲ期7例和Ⅳ期2例。組織學(xué)分級(jí)：G1(高分化)55例，G2(中分化)10例和G3(低分化)7例。肌層浸潤(rùn)程度：無(wú)肌層浸潤(rùn)13例，肌層浸潤(rùn)深度≤1/2肌壁者36例，肌層浸潤(rùn)深度>1/2肌壁者23例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移8例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移64例。

1.2研究方法

標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛常規(guī)固定24h以上，石蠟包埋。取標(biāo)本4μm連續(xù)切片，并用處理過(guò)的載玻片撈起，后置于60℃的恒溫烤箱中烤片，30～40min后取出；經(jīng)病理確認(rèn)后將其常規(guī)脫蠟至水，使用3%雙氧水室溫孵育10min后蒸餾水沖洗。以0.01mol/L、pH7.4的乙二胺四乙酸進(jìn)行熱修復(fù)，后降至室溫并PBS緩沖液沖洗。免疫組化采用S-P法，滴加一抗于4℃冰箱中保存過(guò)夜，恢復(fù)至室溫后使用PBS液沖洗3次后滴加二抗，于37℃下孵育30min后取出，使用PBS液沖洗3次；使用二氨基聯(lián)苯胺顯色，5min后用自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，5min后水洗返藍(lán)，脫水后封片。試劑盒為美國(guó)Zymed公司生產(chǎn)，且嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3觀察指標(biāo)

ER、PR、Ki-67陽(yáng)性表達(dá)均位于細(xì)胞核，呈棕黃色，CerbB-2陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞膜呈棕黃色。將組織切片置于高倍鏡下計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞占同類細(xì)胞數(shù)目的百分比，結(jié)果陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<10%即為陰性(-)；而陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≥10%即為陽(yáng)性(+)。結(jié)果均有2名與試驗(yàn)無(wú)關(guān)的專業(yè)人員進(jìn)行判定。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料均表示為例數(shù)(率)，且采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

手術(shù)-病理分期Ⅲ～Ⅳ期者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于Ⅰ期和Ⅱ期，而Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于I期，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為6.73、5.35、6.92、6.02、7.23、7.83、6.85、7.03，均P<0.05)。組織學(xué)分化G3級(jí)者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于G1級(jí)和G2級(jí)者，而G2、G3級(jí)者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于G1級(jí)者，且G3級(jí)者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于G2級(jí)者，上述差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為7.53、6.68、7.90、7.24、9.22、12.64、6.82、7.53，均P<0.05)。肌層浸潤(rùn)深度>1/2者ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率均顯著低于肌層浸潤(rùn)深度≤1/2者和無(wú)肌層浸潤(rùn)者，而肌層浸潤(rùn)深度>1/2者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率顯著高于肌層浸潤(rùn)深度≤1/2者和無(wú)肌層浸潤(rùn)者，且肌層浸潤(rùn)≤1/2者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率顯著高于無(wú)肌層浸潤(rùn)者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為7.74、7.63、7.54、7.16、5.86、7.02、6.06、7.44，均P<0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為7.54、7.28，均P<0.05)，而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率比較無(wú)顯著差異(χ2值分別為1.22、2.05，均P>0.05)，見(jiàn)附表。

附表子宮內(nèi)膜癌患者ER、PR、CerbB-2、Ki-67表達(dá)陽(yáng)性及其與臨床、病理的關(guān)系[n(%)]

Table　Expressions of ER, PR, CerbB-2 and Ki-67 in endometrial carcinoma patient and their relationship with clinicsand pathology [n(%)]

3討論

3.1子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病特點(diǎn)及疾病診斷

子宮內(nèi)膜癌是婦科最為常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，也是女性最為常見(jiàn)的生殖道惡性腫瘤，其發(fā)病率在世界范圍內(nèi)均呈持續(xù)上升的趨勢(shì)，雖然患者5年生存率較高，但仍有部分患者預(yù)后差，分析其組織類型、病理分期、組織學(xué)分化及肌層浸潤(rùn)程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等可能影響患者預(yù)后[4-5]。近些年的臨床研究發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展以及患者治療預(yù)后與其體內(nèi)激素類受體表達(dá)有密切相關(guān)性，因此，針對(duì)這方面的研究也逐漸開(kāi)展，以為準(zhǔn)確判定患者預(yù)后以及選擇合理治療方案提供依據(jù)[6]。近些年，免疫組化技術(shù)有了不斷提高，為疾病的診斷和臨床治療提供了可為可靠的依據(jù)。但至今還未發(fā)現(xiàn)一種具有高敏感性和特異性的指標(biāo)[7]。

3.2雌孕激素受體與臨床和病理的關(guān)系

ER和PR主要存在于女性的生殖系統(tǒng)和組織細(xì)胞中，但細(xì)胞癌變會(huì)導(dǎo)致受體產(chǎn)生和作用受損，且癌變發(fā)展到一定程度會(huì)明顯減少甚至消失[8]。本研究結(jié)果顯示，手術(shù)-病理分期Ⅲ～Ⅳ期者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于Ⅰ期和Ⅱ期，組織學(xué)分化G3級(jí)者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于G1級(jí)和G2級(jí)者，肌層浸潤(rùn)深度>1/2者ER、PR陽(yáng)性表達(dá)率均顯著低于肌層浸潤(rùn)深度≤1/2者和無(wú)肌層浸潤(rùn)者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者ER、PR陽(yáng)性率均明顯低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(均P<0.05)。分析ER、PR的缺乏可能是子宮內(nèi)膜癌患者病變惡性程度增高的主要表現(xiàn)，同時(shí)支持了子宮內(nèi)膜癌為激素依賴性疾病的觀點(diǎn)，臨床檢測(cè)其水平能夠指導(dǎo)治療、判定療效和預(yù)后。

3.3表皮生長(zhǎng)因子受體2、增殖細(xì)胞核抗原與臨床和病理的關(guān)系

CerbB-2是一種細(xì)胞膜受體，在癌癥的發(fā)病機(jī)制中均發(fā)揮一定作用，其正常情況為非激活狀態(tài)，但與特異性配體結(jié)合后可調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂、分化、增殖等，其正常組織中是無(wú)表達(dá)或低表達(dá)[8]。Ki-67是存在于增殖細(xì)胞和基質(zhì)內(nèi)的一種核蛋白，是臨床用于檢測(cè)惡性腫瘤細(xì)胞增殖的活性的最可靠指標(biāo)，其陽(yáng)性產(chǎn)物定位于細(xì)胞核，對(duì)判定腫瘤侵襲力及疾病預(yù)測(cè)和治療方案選擇上有較高的應(yīng)用價(jià)值[9-10]。但本研究結(jié)果顯示，手術(shù)-病理分期Ⅱ期和Ⅲ期-Ⅳ期者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于I期，組織學(xué)分化G2、G3級(jí)者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于G1級(jí)者，且G3級(jí)者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率均明顯高于G2級(jí)者，肌層浸潤(rùn)深度>1/2者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率顯著高于肌層浸潤(rùn)深度≤1/2者和無(wú)肌層浸潤(rùn)者，且肌層浸潤(rùn)≤1/2者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率顯著高于無(wú)肌層浸潤(rùn)者(均P<0.05)。而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性率比較無(wú)顯著差異(均P>0.05)。說(shuō)明CerbB-2、Ki-67陽(yáng)性表達(dá)隨手術(shù)病理分期的增加、組織分化程度的增加及組織浸潤(rùn)程度的加深而呈增強(qiáng)趨勢(shì)，高表達(dá)顯示惡性腫瘤的侵襲性更強(qiáng)，可能患者預(yù)后不良。

綜合上述研究，ER、PR、CerbB-2、Ki-67表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌臨床和病理有密切相關(guān)性，聯(lián)合應(yīng)用可作為判斷疾病預(yù)后和指導(dǎo)臨床治療的依據(jù)，值得進(jìn)行推廣和借鑒應(yīng)用。

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[專業(yè)責(zé)任編輯：安瑞芳]

Relationship between endometrial cancer molecular markers and clinical pathology

XU Xiao-xian1, SU Ying2, ZHU Xiao-ping3, YAN Ding-ding1, LOU Han-mei1

ObjectiveToexploretheexpressionsofestrogenreceptor(ER),progesteronereceptor(PR),epidermalgrowthfactorreceptor2 (CerbB-2)andproliferatingcellnuclearantigen(Ki-67)inendometrialcarcinomaandtheirrelationshipwithclinicsandpathology.MethodsTherewere72caseswithendometrialcancerundergoingsurgicaltreatmentinZhejiangCancerHospitalduringtheperiodofAugust2013toAugust2014,andtheywereselectedasresearchobjects.TheexpressionsofER,PR,CerbB-2andKi-67weredeterminedbyimmunohistochemicalmethod.ResultsThepositiveratesofERandPRinthestageofⅢ-ⅣoftheoperationandpathologyweresignificantlylowerthanthoseinstageⅠandstageⅡ,whilethepositiveratesofCerbB-2andKi-67inthestageofⅡandⅢ-ⅣwerehigherthanthoseofstageⅠ,andthedifferenceswerestatisticallysignificant(χ2valuewas6.73, 5.35, 6.92, 6.02, 7.23, 7.83, 6.85and7.03,respectively,allP<0.05).ThepositiveratesofPRandERofG3werelowerthanthoseofG1andG2,thepositiveratesofCerbB-2andKi-67ofG2andG3werehigherthanthoseofG1,andthoseofG3wereobviouslyhigherthanthoseofG2withsignificantdifferences(χ2valuewas7.53, 6.68, 7.90, 7.24, 9.22, 12.64, 6.82and7.53,respectively,allP<0.05).ThepositiveratesofERandPRweresignificantlylowerandthoseofCerbB-2andKi-67werehigherinpatientswithmyometrialinvasiondepth>1/2thaninthosewithmyometrialinvasiondepth≤1/2orwithoutmuscularlayerinfiltration,andthoseofCerbB-2andKi-67inpatientswithmyometrialinvasiondepth≤1/2wereobviouslyhigherthanthosewithoutmuscularlayerinfiltration(χ2valuewas7.74, 7.63, 7.54, 7.16, 5.86, 7.02, 6.06and7.44,respectively,allP<0.05).ThepositiveratesofERandPRofpatientswithlymphnodemetastasisweresignificantlylowerthanthosewithoutlymphnodemetastasis(χ2valuewas7.74and7.63,respectively,bothP<0.05),butthepositiveratesofCerbB-2andKi-67werenotsignificantlydifferentbetweenpatientswithandthosewithoutlymphnodemetastasis(χ2valuewas1.22and2.05,respectively,bothP>0.05).ConclusionTheexpressionsofER,PR,CerbB-2andKi-67arecloselyrelatedtotheclinicalandpathologicalchangesofendometrialcarcinoma.Thecombinedapplicationcanbeusedasbasisforjudgingtheprognosisandguidingclinicaltreatment.

2015-09-29

2015年浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃一般研究計(jì)劃資助項(xiàng)目(編號(hào)：2015KYA037)

徐小仙(1982-)，女，主治醫(yī)師，碩士，主要從事宮頸癌，子宮內(nèi)膜癌的放化療方面的研究。

樓寒梅，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2016.01.039

R737.33

A

1673-5293(2016)01-0114-03