匹多莫德口服液對(duì)二期梅毒外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞和Th1/Th2細(xì)胞因子的影響

林麗萍，陳麗娜，徐超，朱亞麗，馬啟超，王紅霞

匹多莫德口服液對(duì)二期梅毒外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞和Th1/Th2細(xì)胞因子的影響

林麗萍，陳麗娜，徐超，朱亞麗，馬啟超，王紅霞

目的探討匹多莫德口服液對(duì)二期梅毒外周血調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞和Th1/Th2細(xì)胞因子的影響。方法將80例二期梅毒患者分為觀察組與對(duì)照組，各40例，流式細(xì)胞儀檢測(cè)治療前和治療3個(gè)月后的外周血 CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞，ELISA檢測(cè)外周血IL-2、IFN-、IL-4及IL-10細(xì)胞因子，ELISA檢測(cè)治療3個(gè)月后梅毒血清TRUST滴度并加以療效分析。結(jié)果治療3個(gè)月后觀察組患者IL-2、IFN-明顯高于對(duì)照組，CD4+CD25+FOXP3+、IL-4、IL-10明顯低于對(duì)照組，兩組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05）；治療3個(gè)月后觀察組患者有效率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）。結(jié)論匹多莫德口服液可通過下調(diào)CD4+CD25+FOXP3+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞和改善Th1/Th2細(xì)胞因子的平衡而輔助治療二期梅毒。

梅毒；匹多莫德；T淋巴細(xì)胞；細(xì)胞因子

梅毒為我國目前主要的性傳播疾病之一。近年來，其發(fā)病率呈顯著上升趨勢(shì)[1]，經(jīng)驅(qū)梅治療后，有少數(shù)患者血清反應(yīng)素轉(zhuǎn)陰較慢或不陰轉(zhuǎn)，超過2年血清反應(yīng)素抗體不轉(zhuǎn)陰者稱為血清固定。一旦血清固定，臨床治療相當(dāng)困難，梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）持續(xù)陽性或經(jīng)久不愈，常給患者造成很大的心理壓力。如何有效的治療，以減少梅毒血清固定的發(fā)生，已成為梅毒患者治療面臨的重大課題。有研究表明梅毒血清固定患者細(xì)胞免疫功能低下，血清機(jī)體細(xì)胞免疫受到抑制是梅毒發(fā)生的重要因素[2]。本研究選取免疫調(diào)節(jié)劑匹多莫德口服液輔助治療二期梅毒，并于治療前后檢測(cè)觀察調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞CD4+CD25+FOXP3+、Th1型細(xì)胞因子（IL-2、IFN-）及Th2型細(xì)胞因子（IL-4、IL-10）的變化，以探討匹多莫德口服液免疫調(diào)節(jié)作用對(duì)早期梅毒治療的療效及免疫的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）所有病例按照國家衛(wèi)生部制定的WS273-2007《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》[3]確診的二期顯性梅毒患者；有明確病史及典型二期梅毒臨床表現(xiàn)，梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)（TPHA）均陽性，TRUST：1∶8～64，均來自寧波市鄞州第二醫(yī)院皮膚科2012年1月至2014年12月的門診患者；（2）所有病例HIV抗體檢測(cè)陰性，近半年未接受卡介菌多糖核酸針、白介素、轉(zhuǎn)移因子等免疫調(diào)節(jié)劑的治療，無自身免疫性疾病、過敏性疾病及嚴(yán)重系統(tǒng)性疾病。收集符合上述標(biāo)準(zhǔn)的患者80例，所有病例按簡單隨機(jī)法分為觀察組與對(duì)照組，各40例。入組前均未進(jìn)行過驅(qū)梅治療，所有入選者均對(duì)本研究知情同意。觀察組男25例，女15例；年齡18～50歲，平均（35±11）歲。對(duì)照組男23例，女17例；年齡20～51歲，平均（34±9）歲。兩組一般資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。

1.2方法

1.2.1治療方法所有病例均按衛(wèi)生部推薦的方案進(jìn)行驅(qū)梅毒治療，即芐星青霉素240萬單位，分兩側(cè)臀部肌肉注射，每周1次，共3次。為避免吉-海氏反應(yīng)，滴度大于1∶16的，第一次驅(qū)梅治療前3 d開始口服潑尼松，每次10 mg，2次/d，共4 d。對(duì)照組驅(qū)梅治療后不作其它治療，觀察組驅(qū)梅治療同時(shí)口服匹多莫德口服液，每次0.4 g，2次/d，共3個(gè)月。

1.2.2標(biāo)本采集兩組分別于治療前和開始治療3個(gè)月后抽取外周血，進(jìn)行外周血T淋巴細(xì)胞亞群及細(xì)胞因子檢測(cè)，驅(qū)梅治療前抽血檢測(cè)TRUST，驅(qū)梅治療后按常規(guī)進(jìn)行血監(jiān)測(cè)TRUST滴度隨訪，選取治療3個(gè)月后進(jìn)行療效判斷。

1.2.3CD4+CD25+FOXP3+的檢測(cè)首先抽取空腹靜脈血8ml，EDTA-K2抗凝，用淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），PBS洗滌1次；然后用200 l PBS重懸并調(diào)節(jié)PBMC濃度為1×106/ml，取100 l細(xì)胞懸液，加入相應(yīng)熒光素標(biāo)記的抗體：PC7-CD3 10 l，PC5-CD4、APCCD25各20 l，混勻室溫避光孵育10min；再將上述標(biāo)記細(xì)胞用預(yù)冷PBS1500r/min離心洗滌4 min，棄上清，重懸后加1 ml固定液4℃固定60min，加2ml破膜液洗滌2次，加FITC-FOXP3抗體20 l，4℃避光孵育30 min，加2 ml破膜液洗滌1次，用300 l PBS重懸，上機(jī)檢測(cè)。

1.2.4IL-2、IFN-、IL-4及IL-10的檢測(cè)采取空腹靜脈血8ml，離心取上清，采用E LISA方法測(cè)定Th1型細(xì)胞因子IL-2、IFN-和Th2型細(xì)胞因子IL-4、IL-10的水平。

1.2.5療效判斷標(biāo)準(zhǔn)痊愈：臨床癥狀或體征全部消失，血清TRUST轉(zhuǎn)陰；有效：TRUST下降2個(gè)或2個(gè)以上滴度；無效：TRUST下降不到2個(gè)滴度；痊愈+有效=總有效。

1.3統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用2檢驗(yàn)。＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1兩組治療后Th1/Th2各細(xì)胞因子指標(biāo)比較治療3個(gè)月后觀察組患者IL-2、IFN-明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（=17.84、10.90，均＜0.05）；治療3個(gè)月后觀察組患者IL-4、IL-10明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（=18.91、12.69，均＜0.05）。見表1。

2.2兩組調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞指標(biāo)比較治療前觀察組和對(duì)照組的CD4+CD25+FOXP3+細(xì)胞分別為（8.13±2.78）%（、7.95±3.16）%；治療后觀察組和對(duì)照組的CD4+CD25+FOXP3+細(xì)胞分別為（6.19±2.94）%、（8.09±3.34）%；治療3個(gè)月后觀察組患者CD4+CD25+FOXP3+細(xì)胞比例較對(duì)照組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（=17.98，＜0.05）。

2.3兩組臨床效果比較治療3個(gè)月后觀察組患者有效率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=5.591，＜0.05）。見表2。

3　討論

梅毒是由蒼白螺旋體引起的性傳染性疾病，醫(yī)學(xué)界普遍認(rèn)為細(xì)胞免疫是清除體內(nèi)Tp的主要方式，其中又以T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主。T細(xì)胞可分為CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞兩個(gè)亞群，CD4+細(xì)胞亞群主要是輔助性T細(xì)胞，它可分化為Th1、Th2細(xì)胞，Th1淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-2、IFN-及IL-12等，主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫，在機(jī)體抗梅毒螺旋體感染的免疫應(yīng)答過程中發(fā)揮著重大作用；而Th2淋巴細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-4、IL-6和IL-10等，主要介導(dǎo)體液免疫。研究發(fā)現(xiàn)，早期梅毒患者體內(nèi)以 Th1型細(xì)胞因子為主，隨病程的進(jìn)展，出現(xiàn)Th1向Th2漂移[4]

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞是一類具有獨(dú)特免疫抑制功能的T細(xì)胞亞群，具有免疫抑制的特性，并同時(shí)表達(dá)CD25和轉(zhuǎn)錄因子Foxp3，在感染性疾病、自身免疫性疾病和腫瘤等疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。有研究認(rèn)為 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞水平的增多可抑制自身免疫性疾病的發(fā)生，并能導(dǎo)致感染擴(kuò)散并造成感染后的血清抗體持續(xù)陽性表達(dá)而無法清除[5]。

國內(nèi)外多項(xiàng)研究顯示[6-7]，早期梅毒患者存在細(xì)胞免疫抑制及免疫功能失衡，這種免疫失衡或免疫抑制影響到了梅毒患者治療的轉(zhuǎn)歸，梅毒治療后，轉(zhuǎn)歸有治愈、血清固定及梅毒復(fù)發(fā)。血清固定是臨床治療的難點(diǎn)，其機(jī)制尚不十分明確，已有學(xué)者研究認(rèn)為，梅毒血清固定與Th1/Th2型細(xì)胞失衡及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)異常等有關(guān)[8-9]，梅毒的血清固定多發(fā)生在早期梅毒患者，有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)二期梅毒有17%的固定率[10]，如何提高梅毒的治療效果，減少血清固定的發(fā)生，已成為臨床治療亟待解決的一大難題。研究認(rèn)為機(jī)體免疫異常時(shí)梅毒的抗生素治療并不能達(dá)到預(yù)期效果[11]。匹多莫德是一種全新結(jié)構(gòu)的免疫調(diào)節(jié)劑，能刺激非特異性自然免疫及細(xì)胞免疫，促進(jìn)IL-2、INF-的產(chǎn)生，使TH/ TS正?；痆12]。本研究結(jié)果顯示：治療后3個(gè)月觀察組患者IL-2、IFN-明顯高于對(duì)照組；CD4+CD25+FoxP3、IL-4、IL-10明顯低于對(duì)照組；患者有效率明顯高于對(duì)照組；差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均＜0.05)。實(shí)驗(yàn)表明匹多莫德可通過糾正梅毒患者Th1/Th2細(xì)胞的平衡及下調(diào)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞而發(fā)揮其免疫調(diào)節(jié)作用，從而提高患者的細(xì)胞免疫水平，增強(qiáng)臨床治療效果。但本研究因隨訪時(shí)間不夠長，尚缺乏降低梅毒血清固定率的統(tǒng)計(jì)學(xué)支持，其實(shí)際治療效果仍有待于進(jìn)一步觀察和研究。

表1　兩組治療前后Th1/Th2各細(xì)胞因子水平比較　pg/ml

表2　兩組治療3個(gè)月后有效率比較例（%）

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10.3969/j.issn.1671-0800.2016.05.057

R759.1

A

1671-0800(2016)05-0671-02

2015-12-27

（本文編輯：陳志翔）

315000寧波，寧波市鄞州第二醫(yī)院

林麗萍，Email：yzeyllp@ 163.com